基于CRISPR/Cas9技术研究金针菇冷诱导结实基因HK1和HK2的编辑转化系统

对金针菇(Flammulina velutipes)冷诱导相关的组氨酸激酶基因HK1和HK2构建了基因组编辑(CRISPR/Cas9)pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA表达载体,探索了金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度,利用PEG介导的方法将表达载体pgfvs-Cas9-HK1/HK2-gRNA转化金针菇原生质体,经潮霉素筛选后的拟转化子再进行PCR鉴定。结果显示:金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度均为50μg/mL;经潮霉素筛选后的部分拟转化子成功扩增出Cas9的部分片段,携带有HK1、HK2基因载体的Cas9蛋白基因成功整合到了金针菇的基因组中,两个表达载体转化率分别为24.1%和12.5%。     

以金针菇菌糠为培养基质的猴头菇高效栽培技术

以猴头菇为研究对象,采用金针菇菌糠、滤泥等廉价培养基质,通过优化液体菌种和栽培培养基配方、栽培方式等建立猴头菇高效栽培技术体系。结果表明,猴头菇液体菌种的培养基配方为H3,培养到第4天时活力最强;猴头菇栽培培养基配方W2;栽培方式以小口径、不需要搔菌为好;比较菌糠培养基与纯玉米芯培养基栽培获得的子实体,金针菇菌糠培养基培养的猴头菇菌丝生长速度更快,菌丝满袋时间和现蕾时间更短,子实体重量提高44%,并且具有更高的营养价值。     

油菜叶片衰老相关基因的分离：ATP硫化酶cDNA的克隆和序列分析

通过筛选缩减ｃＤＮＡ文库中在油菜叶片衰老阶段表达而在绿叶中不表达的ｃＤＮＡ克隆，分离了与油菜叶片衰老有关的基因ＬＳＣ６６。ＤＮＡ序列测定和分析结果表明，ＬＳＣ６６的全长可读框架由１３８０个碱基组成，编码４６０个氨基酸，它的核昔酸序列与拟南芥菜ＡＴＰ硫化酶基因有８６．６７％的同源性，其推导的氨基酸序列与拟南芥菜ＡＴＰ硫化酶的氨基酸序列有９１．７４％的同源性。对ＬＳＣ６６基因产物在植物叶片衰老过程中的作用进行了讨论。     

油菜叶片衰老相关基因的分离：细胞色素P450cDNA的克隆和序列 …

通过绿叶和衰老叶片ｃＤＮＡ的缩减杂交和差别筛选，富集并分离了缩减ｃＤＮＡ文库中与油菜叶片衰老有关的基因片段。以目的基因片段为探针，通过筛选油菜衰老叶片的ｃＤＮＡ文库，分离了油菜叶片衰老阶段表达增强的全长ｃＤＮＡＬＳＣ４６。     

简便高质量的食用菌总RNA提取方法

STE法是针对食用菌多糖含量高而设计的一种提取食用菌总RNA的有效方法。本研究以灵芝、香菇和白腐真菌TR16菌株的菌丝体为材料，采用STE法提取其总RNA，同时以Trizol法作对照。结果表明：采用STE法提取的三种菌丝的总RNAA260／A280比值在1．80～2．10范围内，A260／A230略大于2．00；而Trizol法提取的总RNAA260／A280比值小于1．80，A260／A230小于1．90，明显比STE法效果差；总RNA电泳检测表明：STE法的3条带（28S rRNA、18SrRNA和5SrRNA）清晰，无拖尾，无杂带，效果比Trizol法好；将STE法提取的总RNA进行反转录后合成双链cDNA，进行预扩增，电泳显示呈弥散状；再进行选择性扩增，有相同或相异的条带。进一步表明STE法提取的总RNA质量较高，可以满足后续分子生物学研究的要求。     

杏鲍菇菇脚对肉兔生长性能及肉品质影响研究

研究在饲料中添加杏鲍菇废弃菇脚,并且投喂柚子皮对肉兔的生长性能及肉品质的影响。把48只30d～32d龄的新西兰肉兔随机分为3组,分别投喂0％、1％、5％烘干菇脚,同时每组又分为2组,分别投喂烘干柚子皮。结果表明添加5％杏鲍菇菇脚及投喂柚予皮均能显著降低兔粪TBARS水平,改善肠道抗氧化状况;饲喂菇脚对肉兔增重和兔肉品质没有影响,兔肉中无棉酚残留;柚子皮对增重无显著影响,但能显著降低兔肉胆固醇含量。     

灵芝免疫调节蛋白基因的克隆和分析

采用同源克隆方法,分别以6个灵芝品种和1个云芝品种的基因组DNA为模板,进行灵芝免疫调节蛋白基因的PCR扩增。扩增产物克隆进T-载体后,进行DNA测序和BLASTn序列分析。结果表明,从赤芝、紫芝、韩芝和甜芝4个菌株中克隆到的PCR扩增片段,含有灵芝免疫调节蛋白基因编码区全长,顺次编号为gimp01,gimp02,gimp03,gimp04。它们已经在国际GeneBank中登记注册,注册号:AY449802,AY449805,AY449804,AY449803。     

甘蔗F_1代糖分性状的遗传

研究了甘蔗F_1代群体6个糖分性状的遗传趋势。结果表明,丛含糖量的表型分布呈现偏向高端的近似正态分布,蔗汁蔗糖分、蔗汁转光度、蔗汁锤度、田间锤度和蔗汁重力纯度的表型分布呈现偏向低端的近似正态分布:丛含糖量的基因型变异系数为33.37％-50.82％。基因型变异范围为0.053-0.298kg;蔗汁蔗糖分的基因型变异系数为4.60％-11.66％,基因型变异范围为8.94％-17.97％;6个糖分性状的广义遗传力均较高,为69.61％-73.21％。     

灰树花gpd-GF启动子的克隆与表达载体的构建

根据已经报道有强启动子活性的香菇gpd启动子设计引物，从灰树花基因组PCR扩增获得大小分别为1018,615bp的2个片段gpd-GF1和gpd-GF2，通过DNA序列测定得知二者的大小分别为1018,615bp，经NCB1中的BLASTN比较，gpd-GF1，gpd-GF2与已报道的香菇中克隆的gLeGPD基因上游序列的同源性分别为96%，98%，通过启动子预测软件分析，结果表明，gpd-GF1和gpd-GF2含有多个顺式作用元件如TATA box,GAtA box,CAAT box等，初步证实 gpd-GF1,gpd-GF2可能有较强的启动子活性。将gpd-GF1,gpd-GF2分别与切除CaMV35S启动子的pCAMB1A1301大片段进行亚克隆，构建成表达载体pCBgpdGF1和pCBgodGF2。