沙冬青AmCSDP基因特性及转基因烟草的抗寒性分析

冷休克结构域蛋白(CSPs)是含有不同数量冷休克结构域(cold shock domain,CSD)的低温响应蛋白,在低温胁迫中发挥重要作用。以沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)为材料,克隆得到了冷休克结构域蛋白基因AmCSDP。生物信息学分析显示AmCSDP(Gen Bank登录号:KX756575)全长540bp,编码180个氨基酸,二级结构由8.9%的α–螺旋、47.8%的β–折叠和43.3%的无规则卷曲组成,其N端含有冷休克结构域。进化分析表明沙冬青与花生同源性最高。构建了AmCSDP真核表达载体Pcambia2300-35S-AmCSDP-OCS,经农杆菌介导转入本氏烟中。对转基因T1代和野生型烟草进行4℃低温胁迫处理,结果证实转基因本氏烟比野生型的耐冷能力强。     

沙冬青A20／ANl锌指蛋白基因序列及表达分析

A20/AN1锌指蛋白普遍存在于真核生物中,在胁迫响应引起的信号传导过程中发挥着重要作用。本文利用生物信息学和RT-PCR方法从低温干旱胁迫的沙冬青叶片组织中分离锌指蛋白基因AmSTZF,该基因编码一条含172个氨基酸残基的多肽,含A20和AN1两个锌指蛋白保守结构域,属A20/AN1锌指蛋白。生物信息学分析显示该蛋白定位于细胞质中,具有磷酸化位点,参与细胞转录调控。RT PCR分析表明:低温和干旱胁迫处理的沙冬青叶片中,AmSTZF的表达增强,初步推测该基因与沙冬青低温、干旱胁迫响应相关。      

沙冬青GATA型锌指蛋白基因序列及表达分析

根据沙冬青低温干旱诱导cDNA文库表达序列标签中锌指蛋白基因序列设计特异引物,采用PCR技术扩增锌指蛋白基因AmZFPG的cDNA全长.序列分析表明,cDNA全长669 bp,推测编码223个氨基酸残基、分子量约25 kD的蛋白质.氨基酸保守性分析及同类锌指结构比对表明AmZFPG属于GATA结合蛋白家族,且具有高度的...     

植物原生质体再生细胞壁研究进展

原生质体作为单细胞且具有全能性,为研究植物细胞壁生物合成提供了独特的视角和模型。原生质体细胞壁再生过程复杂,涉及诸多细胞信号转导通路,应用普通的研究方法难以全面解析整个再生壁过程的分子网络。为充分了解植物原生质体再生壁内在特性,推动植物原生质体再生壁的分子机理进一步完善,笔者从原生质体再生细胞壁培养、细胞壁再生的细胞生物学证据、结合诸多组学技术研究细胞壁再生分子机理3个方面进行系统分析和归纳总结。分析了不同植物原生质体培养的主要影响因素如植物材料限制、培养基及培养方式的差异;归纳了2种常用染料应用于原生质体再生壁可视化研究的进展;总结了转录组、蛋白组及更为精细的核蛋白组及磷蛋白组技术在揭示细胞壁再生分子网络机理方面的应用和意义,并提出了对原生质体细胞壁再生机理深入研究的展望。     

一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略．该策略中的所有操作步骤,包括poly (A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行．扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料（Driver）的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料（Tester）cDNA第二链中的共有序列．多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失．最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率．该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列．经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因．      

转沙冬青锌指蛋白基因AmZFPG 烟草非生物胁迫抗性分析

 分析了沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）锌指蛋白基因AmZFPG 在非生物胁迫下的表达 特性,结果显示AmZFPG 受低温、干旱、高盐胁迫诱导表达,表明该蛋白参与多种胁迫相关的信号转导 和应答反应。为进一步探索AmZFPG 的功能,构建了真核表达载体AmZFPG-pCAMBIA2300,将该基因 转入烟草（Nicotiana tabacum L.）,对转基因烟草T1 代进行非生物胁迫分析,结果显示,转基因烟草的耐 寒性、耐旱性、耐盐性均获得了提高。     

颐和园古桑树的组织培养与快速繁殖

以北京颐和园古桑树为外植体进行组织培养,取桑树当年新生嫩茎切段为外植体进行,其中不定芽启动培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+PVP 0.2 g/L;将无菌苗接到最适分化培养基MS+ 6-BA 0.8 mg/L +NAA 0.1 mg/L +PVP 0.2 g/L上,组培苗分化率高;不定根最适诱导培养基为：1/2MS+NAA 0.5 mg/L +PVP 0.2 g/L,生根率达100%。组培苗移栽成活率达95%。     

颐和园古西府海棠的组织培养与快速繁殖

以北京颐和园古西府海棠嫩枝为外植体进行组织培养研究,结果表明：取西府海棠当年新生嫩茎务切段为外植体进行组织培养,其中最适不定芽启动培养基为1／2MS＋IBA0．3mg／L＋NAA0．05mg／L;将无菌苗接种到分化培养基MS＋6－BA1．5mg／L＋NAA0．4mg／L上,组培苗生长健壮且分化率高,增殖系数可达4．16;不定根最适诱导培养基为1／2MS＋IBA0．6mg／L和1／2MS＋NAA1．0mg／L,生根率分别达100％、98％。炼苗基质为蛭石：珍珠岩体积比：1：1。试管苗移栽成活率达92％。     

四种树木端粒酶活性与树龄及叶位的相关性

为探究端粒酶活性与树龄以及叶位是否存在一定的关系，应用TRAP法对不同年龄的油松、银杏、楸树、国槐叶片及油松和银杏同一棵树不同叶位的叶片进行端粒酶活性的测定。结果表明，油松端粒酶活性同树龄无明确的相关性，而楸树、国槐的端粒酶活性随着树龄增加而表现为增加的趋势。端粒酶活性与叶位相关，越靠近顶端的叶片端粒酶活性较高，而靠近下端的叶片端粒酶活性较低。     

模拟UVB增强胁迫对大田水稻生长及内源激素含量的影响

利用可调式紫外线增强系统人工模拟了江西省千烟洲地区20%臭氧层衰竭程度所导致的紫外线辐射增强环境,在大田栽培条件下,对晚稻品种“协优432”的叶绿素含量、株高、内源激素IAA、ABA、GA3和Zeatin(Z)含量进行了测定。结果表明:经过增强的UV辐射处理后,叶绿素a和叶绿素b含量均有明显下降,UV-A UV-B处理组和UVA处理组与对照组间的差异均达到极显著水平(p<0.01)。株高在处理组和对照组之间差异不显著。UV-A UV-B处理组IAA、GA3和Z含量分别比正常日光对照组降低了21.86%、31.90%和30.28%,分别比UV-A处理组降低了31.79%、35.84%、39.14%。ABA含量UV-A UV-B处理组比正常日光对照组降低了29.16%,比UV-A处理组降低了32.33%,但是经过统计学检验后差异均不显著。