microRNA-124-3p调控H1N1亚型猪流感病毒致小鼠肺损伤的研究

为研究microRNA-124-3p（miR-124-3p）对H1N1亚型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）感染小鼠所致肺损伤的调控作用，本试验构建miR-124-3p腺病毒表达载体，通过小鼠尾部静脉注射法构建miR-124-3p差异表达小鼠模型，试验分3组：过表达组、抑制组和对照组。48 h后，各组小鼠鼻腔接种H1N1亚型SIV，每只10⁵ EID₅₀（50 μL）。连续观察14 d，计算小鼠平均体重变化率、观察病理切片并测定相关炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA相对表达量。结果显示，已成功将pre-miR序列及其sponge序列插入腺病毒的穿梭质粒，并将其共转染293A细胞。实时荧光定量PCR检测证实，与对照组相比，过表达组和抑制组小鼠黑色素瘤细胞miR-124-3p表达水平分别极显著升高（P<0.01）和显著降低（P<0.05），表明成功构建腺病毒表达载体。过表达组、抑制组和对照组小鼠体重变化率分别为－5.5%、－12.4%和－8.6%。抑制组和对照组均可见肺泡壁增厚，其间有多量淋巴细胞浸润，部分肺泡内出现纤维蛋白渗出，且抑制组病理变化更为严重，肺泡中还有大量的红细胞浸润；而过表达组仅有少量的淋巴细胞浸润，肺脏组织较正常。与对照组相比，过表达组检测的炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平均显著降低（P<0.05）；抑制组炎症相关炎症因子mRNA表达水平均显著升高（P<0.05）。本试验结果表明，miR-124-3p对H1N1亚型SIV感染小鼠所致的肺脏炎症因子的表达具有抑制作用，同时能减轻肺脏病理损伤。     

鸭肝炎病毒VP1蛋白B细胞抗原表位预测及变异分析

以鸭肝炎病毒(DHV)SN株VP1基因序列为基础,运用Garnier-Robson、Chou-Fasman和Karplus-Schulz方法预测VP1蛋白的二级结构,并分别运用Kyte-Doolittle方法、Jameson-Wolf方法和Emini方法预测蛋白的亲水性、抗原指数和表面可及性,最后结合吴玉章的方法综合分析预测其B细胞抗原表位.结果显示,VP1蛋白C端第132～137、177～186、209～219区段有较好的亲水性、表面可及性和较高的抗原指数,并且在二级结构上含有易形成抗原表位的无规则卷曲和β-转角,可能是VP1蛋白的B细胞抗原优势表位;DHV SN株与弱毒疫苗株在推测的VP1 B细胞抗原表位177～186和209～219两个区域氨基酸序列变异较大.     

2种猪伪狂犬病基因缺失苗产前免疫母猪的效果比较

选择广东某规模化养猪场母猪30头,产前10 d分别用国产(A)和进口(B)猪伪狂犬病(PR)基因缺失弱毒苗进行免疫试验,观察2种疫苗免疫后对母猪免疫效果。结果表明:母猪免疫前PR抗体阳性率较低,经A、B苗分别接种免疫后20 d母猪抗体阳性率为83.3%和93.3%,30~120 d母猪抗体阳性率上升达到或接近峰值,峰值持续时间长达90 d,提示产前20~30 d对母猪进行免疫是适合时机。试验结果还提示,接种A苗和B苗都能收到较好效果,但使用B苗较A苗免疫效果好,更能为母猪提供有效保护。     

副猪嗜血杆菌分离鉴定与PCR检测方法的建立及应用

从养猪场送检的猪肺病料中分离到3株疑似副猪嗜血杆菌(HPS)可疑菌株。经形态镜检、染色特性、生化和部分生物学特性试验,初步鉴定为HPS。在细菌学鉴定基础上,设计合成3对引物,分别以3株分离菌株的DNA为模板进行PCR扩增,结果均扩增出822 bp8、24 bp和1.9 kb的预期特异性条带。以HPS GD株作为参考阳性菌株,以P1、P2为引物,设计优化PCR反应程序,建立HPS PCR检测方法,并应用于临床病料检测。结果表明,所建立的HPS PCR检测方法特异与敏感性高、适用性强,可应用于HPS感染的诊断和检测。     

禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒多联RT-PCR诊断方法的建立

利用分子生物学方法,选择禽流感病毒的M基因、新城疫病毒的F基因以及传染性支气管炎病毒的N基因,分别在基因序列的保守区域设计1对特异性引物,利用所合成的3对引物对相应靶基因进行RT-PCR扩增,在优化单项RT-PCR条件的基础上,建立禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒多联RT-PCR的检测方法,同时对该检测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明:这3对引物分别能特异性地扩增出禽流感病毒的M基因片段、新城疫病毒的F基因片段及传染性支气管炎病毒的N基因片段,大小分别为385 bp、520 bp和748 bp,初步建立了快速、敏感、特异鉴别检测禽流感、新城疫、传染性支气管炎病毒的分子诊断方法。     

斑点杂交法检测猪传染性胸膜肺炎

将位于猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP) apx A毒素基因 3′端的长为 442 bp的DNA片段作为模板制备出地高辛标记的 APP核酸探针。敏感性检测结果表明 ,该探针对 APPDNA的最低检出量为 1 .8ng。特异性检测结果表明 ,该探针能与 APP1～ 1 0血清型标准菌株 DNA抽提物发生特异性杂交反应 ,而与多杀性巴氏杆菌A型和 B型、链球菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 DNA进行的杂交反应均为阴性。应用该探针对临床 6份阳性病料 ,1 1份纤维渗出性病料进行检测 ,结果阳性病料全部检出 ;而对于 1 1份纤维渗出性病料 ,斑点杂交检出 4份是阳性 ,比 PCR方法 6/ 1 1的检出率要低 ,但仍表明所制备的探针用于 APP的检测是一种比较敏感、特异的诊断方法。     

H1N1亚型猪流感病毒的生物学特性测定及其HA基因序列分析

测定了A/Swine/Guangdong/1/01(H1N1)猪流感病毒的部分生物学特性;运用RT-PCR方法扩增其HA基因,并对其进行了克隆和序列分析。结果表明,该株病毒的EID50/0.2 mL及TCID50/0.1 mL分别为10-2.3和10-2.1,小鼠感染试验亦说明该病毒具有致病性。序列分析表明,HA基因全长为1 701 bp,与国内外流行株同源性达90.8%~99.0%。     

水禽场进行水体消毒的方法及注意事项

在水禽的生产和养殖过程中,细菌或病毒性疫病的反复发作一直是困扰水禽养殖业发展的瓶颈之一。采用病原敏感的药物进行预防和治疗尽管具有良好的效果,但若不能结合对被病原已经污染的水体进行有效消毒,常常在停药后出现疫情反复的情况。现就水禽场采用何种消毒药物、如何进行水     

鸭肝炎病毒结构蛋白SDS-PAGE分析

鸭肝炎病毒(DH V)由Levine和Fabricant于1950年首次分离成功,并被鉴定为一种小RN A病毒。它主要感染5周龄内小鸭,而2周龄内雏鸭最易感,是以急性发病、肝脏病变和高死亡率为特征的一种急性接触性传染病。该病呈世界性分布,是目前危害养鸭业最严重的疾病之一。现认为D H V有3个血     

母猪子宫内膜炎的诊断与综合防制

20 0 0年 8月至 1 2月期间 ,广东某种猪场共有1 2 4头母猪发生较为严重的子宫内膜炎 ,由于母猪发情不正常甚至不发情 ,屡配不孕或流产 ,给该猪场造成巨大的经济损失。为了寻找真正的发病病因 ,我们从子宫内膜炎的患猪采取子宫炎性分泌物 ,经过病原的分离、鉴定及其致病性检验 ,