番鸭细小病毒VP2基因在毕赤酵母中的表达及表达产物的鉴定

通过DNA重组技术,将克隆到的MDPV-Q和MDPV-26的VP2基因片段,经两种限制性核酸内切酶SaclI和Kp-nl的酶切,将酶切产物再克隆到表达载体pPICZαA中,得到表达重组质粒pPICZαA-M-Q VP2和pPICZαA-M-26 VP2.将这两种表达重组质粒分别转化到毕赤酵母(Pichia Pastoris X-33)中进行表达,经甲醇诱导和SDS-PAGE分析结果表明,MDPV-QVP2和MDPV-26 VP2基因片段的表达产物大小约为73kD,与理论预计相符.此外,本研究还意外地发现,重组质粒转化到酵母菌进行表达,在表达VP2结构蛋白的同时,还表达了一条大小约为60kD的蛋白条带.     

猪圆环病毒2型感染对口蹄疫O型合成肽疫苗免疫应答的影响

采用阻断ELISA方法对单独接种口蹄疫O型(FMD)组(C组,n=3)及PCV2人工感染4周后接种FMDO型疫苗组(PC组,n=4)后不同时相血清中的FMDO型抗体进行检测;同时对不同时相前腔静脉血进行CD4/CD8流式细胞术及血常规分析。结果显示,除接种后4周C组白细胞及淋巴细胞含量与略低于PC组外,接种疫苗后2～8周C组白细胞及淋巴细胞含量均略高于CP组,且在接种疫苗后2周,C组淋巴细胞含量显著高于PC组(P0.05);在整个试验过程中PC组的幼稚型Th细胞含量均高于C组,且在接种疫苗后0周和8周2组间幼稚型Th细胞含量差异显著(P0.05);在接种疫苗后2～6周期间,除在接种疫苗后4周2组间Tc细胞含量较为接近外,C组的Tc细胞含量均高于PC组;除在8WPIPC组CD4+CD8+记忆/激活Th细胞含量略高于C组外,在接种疫苗后0～6周过程中,C组记忆/激活Th细胞含量均略高于PC组,且在接种疫苗后6周,2组间记忆/激活Th细胞含量差异显著(P0.05);在接种前疫苗4周和前2周(-4-2WPI)期间,C组的抗体阻断率均高于PC组,在接种疫苗后4～8周2组间抗体阻断率差异逐渐变小,且PC组抗体阻断率略高于C组。结果表明,PCV2感染对机体产生针对FMDO型特异性抗体早期有一定的抑制作用,但在后期这种抑制作用逐步减弱,甚至消失;PCV2感染确实可以在一定程度上抑制机体对猪FMDO型合成肽疫苗体液免疫应答,导致机体的淋巴细胞及白细胞含量降低,进而导致Tc细胞及记忆/激活Th细胞含量下降。     

猪圆环病毒2型与猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒混合感染的诊治

猪圆环病毒2型自1991年被证实具有致病性以来,已遍布除大洋州外的世界各养猪国家和地区。国内外研究结果表明,猪断奶后多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾病综合征及猪呼吸道疾病综合征被认为与猪圆环病毒2型的感染有关。圆环病毒2型感染引起了国内从事养猪生产及猪病研究工作者的高度重视。2005年7月广东省某猪场发生了一种以体温升高,呼吸困难,腹股沟淋巴结高度肿大,颜面部、会阴部及腹部皮肤呈现出血性皮炎及一定程度的黄疸为特征的传染病。经流行病学、临床症状、剖检变化和实验室诊断,确诊为猪圆环病毒2型与猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒混…     

microRNA-124-3p对Th17细胞体外分化的影响分析

为探讨microRNA-124-3p(miR-124-3P)对Th17细胞体外分化的影响,本研究通过密度梯度离心获取小鼠脾脏单淋巴细胞悬液,运用免疫磁珠法分选幼稚T细胞,然后用腺病毒表达载体转染幼稚T细胞,介导miR-124-3P过表达和抑制表达,并设空白对照组,加入Th17细胞分化相关细胞因子,诱导幼稚T细胞向Th17细胞方向极化,运用流式细胞术检测极化后的Th17细胞占比,并用ELISA方法检测细胞培养上清中白细胞介素-17A(IL-17A)浓度。结果表明免疫磁珠法纯化幼稚T细胞纯度>90%;miR-124-3P过表达腺病毒载体转染幼稚T细胞,可显著提高miR-124-3P的表达量(P<0.05);流式细胞术和ELISA检测结果均表明,相比较空白对照组,过表达miR-124-3p可显著抑制Th17细胞体外分化,而抑制miR-124-3P表达可显著促进Th17细胞体外分化。研究表明,miR-124-3p对Th17细胞体外分化具有重要调控作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光检测方法的建立

为了建立一种快速、准确的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)直接免疫荧光检测方法,对前期制备的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体进行亲和层析法纯化,经异硫氰酸荧光素标记;通过对荧光染色的固定试剂、固定时间、染色时间和荧光抗体工作浓度的测定,确定荧光抗体染色法在PRRSV感染细胞和病料中的最佳工作条件。利用荧光抗体染色法对本实验室收集的62份病料进行检测,同时以RT-PCR进行验证,确定荧光染色法的检测符合率。结果显示,FITC标记的荧光抗体检测细胞培养物最佳工作条件:80%丙酮4℃固定20 min,荧光抗体按1:400稀释,感作时间为1 h;检测组织病料最佳工作条件:病料组织进行涂片后,用80%丙酮4℃固定30 min,荧光抗体按1:200稀释,感作时间为2 h;病料组织荧光检测与RT-PCR的检测一致率为74.2%。本研究建立的快速、准确的猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光检测方法为今后该疾病诊断奠定了基础。     

贝莱斯芽孢杆菌的鉴定和抑菌作用研究

该研究对6株贝莱斯芽孢杆菌分离株进行测序鉴定、药敏试验与抑菌试验。结果表明：所分离的6株菌16S rDNA序列与贝莱斯芽孢杆菌处于同一遗传进化树分支，对选定的7种抗菌药物均敏感。应用指示菌进行抑菌试验，6株菌及其代谢产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑菌作用，抑菌作用从强到弱依次是：贝莱斯芽孢杆菌菌液、上清液和菌液滤液。     

复合精油与有机酸的抑菌效果和协同作用研究

文章旨在从15种植物精油和6种有机酸中筛选出对金黄葡萄球菌和乙型溶血性链球菌抑菌效果最好的精油和酸，通过正交试验筛选出最佳复合精油，并研究其与有机酸复合的协同作用。结果表明，肉桂醛、牛至油和甲酸对金黄葡萄球菌和溶血性链球菌的抑菌效果最好，其中肉桂醛和牛至油对金黄葡萄球菌和溶血性链球菌的最小抑菌浓度分别为0.3125和0.625?mg/mL|肉桂醛与牛至油最佳组合为2：1，其对金黄葡萄球菌和溶血性链球菌最小抑菌浓度分别为0.078125和0.3125?mg/mL|复合精油与甲酸复合提高了整体抑菌效果。 [关键词]植物精油|有机酸|金黄葡萄球菌|乙型溶血性链球菌|抑菌     

植物提取物和植物精油对麻黄肉鸡生长性能、抗氧化指标和免疫器官指数的影响

为了研究植物提取物和植物精油对麻黄肉鸡生长性能、抗氧化指标和免疫器官指数的影响，试验将300只健康的21日龄麻黄肉鸡随机分为5组，每组3个重复，每个重复20只。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ组分别饲喂基础日粮+1 000,2 000 g/t植物提取物，试验Ⅲ、Ⅳ组分别饲喂基础日粮+200,400 g/t植物精油。在试验第1,21天对每栏肉鸡空腹称重，计算平均日增重、平均日采食量、料重比及死淘率。试验第21天，所有肉鸡空腹称重后，每个重复随机选取3只体重相近的肉鸡采集血液并分离血清，检测抗氧化指标[总超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)];屠宰后采集免疫器官(肝脏、脾脏和法氏囊)并称重，计算免疫器官指数。结果表明：与对照组相比，试验Ⅰ～Ⅳ组肉鸡平均日增重提高，料重比(除试验Ⅰ组外)和死淘率降低，但均差异不显著(P>0.05)。与对照组相比，试验Ⅲ、Ⅳ组T-SOD活性显著提高(P<0.05),试验Ⅲ组MDA浓度显著降低(P<0.05)。各组之间肝脏指数和脾脏指数均差异不显著(P>0.05)。与对照组相比，试验Ⅰ～Ⅳ组法氏囊指数均提高，其中试验Ⅱ组法氏囊指数...