猪的繁殖调控技术(一)

猪的繁殖调控技术对于提高种猪的繁殖效率,进而提高养猪场总体生产效率和经济效益具有重要意义。近年来国内外在这方面取得了一系列令人瞩目的进展。目前技术比较成熟且实用意义较大的有发情排卵调控、定时分娩、早期孕检、提高窝产仔数和频密产仔等方面的技术。为了尽快将这些技术应用于生产,促进养猪业的发展,本刊特邀请湖北省农业科学院畜牧兽医研究所魏庆信研究员,将这方面的技术进展分四个部分进行讲座,供广大养猪户和各类养猪场的技术人员、管理人员和饲养人员参考。各地可根据自己的实际情况,因地制宜地使用,并不断总结经验,有所提高。     

转人MCP和CD59双基因小鼠的制备

采用显微混合注射的方法制备转人MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(膜反应性溶解抑制物)双基因小鼠,共注射478枚受精卵,移植于21只受体,其中14只受孕,8只受孕小鼠中途流产,从6只受孕小鼠获得18只仔鼠,经检测,其中9只仔鼠单基因阳性(50％),6只仔鼠双基因阳性(33．3％)。结果表明：通过显微混合注射的方法可以获得转人MCP和CD59双基因小鼠。     

H6N2亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆及其序列分析

设计特异引物,采用RT—PCR技术,成功从本实验室分离、保存的H6N禽流感病毒毒株（HB2002）中克隆到血凝素基因（HA）序列,该克隆基因全长1714hp,提交GenBank,获得登录号DQ285546。同部分H6,H5,H7,H9亚型禽流感病毒HA基因序列分析表明,该基因核酸、氨基酸序列与A／duck／Hainan／4／2004（H6N2）,A／duck／HongKong／3600／99（H6N2）毒株有99％的相似性;分子进化分析结果显示,该基因与此2毒株亲缘关系最近。由该克隆核酸序列推导的HA蛋白共566个氨基酸,该蛋白同其他H6亚型AIV的HA蛋白有相同裂解位点序列即PQIETR↓G,无高致病性毒株典型的裂解位点特征,因此,初步判定毒株HB2002为低致病性禽流感病毒．     

多重RT-PCR快速检测禽流感病毒的研究

参考H1-H15亚型禽流感病毒(AIV)的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因,共设计4对引物,建立了2对引物扩增AIV的NP、HA基因的多重RT-PCR方法.应用此法分别对H5、H6、H9亚型AIV尿囊液RT-PCR,电泳,回收预期片段进行测序,并同Genebank的注册序列进行同源性分析.也对NDV、IBV、IBDV尿囊液以及3种亚型AIV尿囊液的2倍系列稀释样品进行检测.结果表明,3种亚型AIv尿囊液均出现2条特异性条带,经测序确证为目的扩增片段,BLAST的同源性初步判断3种AIV的亚型为H5N1、H6N2、H9N20对NDV、IBV、IBDV的RNA扩增未见2条目的条带,判断为阴性,说明该法特异性强:能对3种亚型AIV尿囊液64～128倍稀释的样品检测出AIV,表明其灵敏度高.该检测法检测的整个过程仅需4h,实现了AIV的快速检测.     

乌鸡卵清白蛋白基因cDNA的克隆及同源性分析

乌骨鸡是原产中国的观赏和药用珍禽 ,在中国的饲养历史悠久。金水乌鸡是湖北省农业科学院以江西泰和鸡为主 ,按照白羽丝毛乌骨鸡的十大特征 ,进行闭锁性继代选育获得的一个特有品种。卵清白蛋白是鸡蛋中蛋白质的主要成分 (占总蛋白的 5 4 % ) [1 ] ,其合成与分泌严格地受激素包括雌激素和孕酮的调节[2 ] 。目前 ,鸡卵清白蛋白的基因结构及功能已较为清楚 ,为 7个外显子的分离基因[3] ,转录后经内含子的切除 ,连接成为成熟的ｍＲＮＡ。由于卵清白蛋白基因只在输卵管细胞中表达 ,因此 ,该基因在输卵管蛋白质合成与分泌中具有主要的调控作用。…     

PCR法构建小鼠α-1,3-GT基因沉默载体研究

在已报道的shRNA序列前加上人类H1启动子,设计一段沉默小鼠α-1,3-GT基因的siRNA序列,针对该序列分段设计引物,完全采用PCR法将其连接起来,然后把该序列克隆到pGEM-T载体中,构建出针对小鼠α-1,3-GT基因的特异性沉默载体,为进一步获得α-1,3-GT基因沉默小鼠,构建异种器官移植用小鼠模型奠定了基础.     

转基因猪银染核仁组织区的初步研究

采用外周血淋巴细胞培养技术，硝酸银银染法研究转基因猪的染色体银染核仁组织区（Ａｇ－ＮＯＲ）。结果表明：由湖北白猪Ｖ系经基因转移形成的转基因猪（以后简称转基因猪）与湖北自猪ＩＶ系普通猪（以后简称普通猪）银染点的数目和大小在个体、细胞、染色体水平上具有多态性，Ａｇ－ＮＯＲ位于第８号和第１０号染色体的次缢痕区；不同个体的Ａｇ－ＮＯＲ数不同，转基因猪平均每个细胞有二个银染点，普通猪平均每个细胞有三个银染点     

哺乳动物的克隆

1996年,英国爱丁堡卢斯林研究所杨·维勒穆特教授领导的实验室,采用体细胞核移植技术,从247个重组胚胎中,获得一只克隆绵羊,取名“多莉”(DOLLY).消息一公布,立即引起了轰动,被列为1996年世界十大科技新闻之一.各国生物科学家、医学专家,其它行业的专家乃至发明原子弹的专家,以及许多国家的政府要人对此纷纷发表评论.美国克林顿总统组织专门的班子就这项技术在各方面的影响展开调查.     

原核注射转基因猪的准备——诱发发情、超数排卵和原核胚的获取

进行了湖北白猪青年母猪的诱发发情、超数排卵和配种后注射hCG影响胚胎发育阶段的研究,比较了自然发情、诱发发情和超数排卵处理母猪的排卵数、冲卵数和胚胎的发育阶段。结果表明:PG诱发发情效果(51.3%)明显优于PMSG、hCG组合(0);超数排卵两种剂量组合间的差异显著;复配后注射hCG显著地提高了原核胚的数量;自然发情、诱发发情和超数排卵3个处理中,诱发发情组原核胚的数量显著高于其他两组。