利用盐酸-正丁醇法测定蒙农红豆草缩合单宁的含量

红豆草在内蒙古种植较多,耐寒耐旱性强,且在畜牧业上有很好的利用价值。本试验旨在测定蒙农红豆草(Onobrychis viciaefolia Scop.cv.Mengnong)所含缩合单宁含量,为将来进一步开发利用红豆草及其单宁(Onobrychis viciaefolia,Sainfoin)提供数据支持和理论依据。试验以蒙农红豆草为原料,经丙酮溶液提取,通过盐酸-正丁醇法进行缩合单宁(total condensed tannin,TCT)含量的测定。结果表明,不论是蒙农红豆草全植株、茎和叶子中缩合单宁的含量均为生长期最高(P0.05);各个生长阶段中均是叶子中含有的缩合单宁含量最高(P0.05),生长期可达156.93 g.Kg-1DM(dry matter)。由此可见,蒙农红豆草所含缩合单宁主要在叶子上,且生长期含量最高。     

瑞香狼毒涂搽剂急性毒性及对皮肤刺激性试验

[目的]观察瑞香狼毒涂搽剂的急性毒性与外用药的安全性。[方法]采用小白鼠急性经口毒性试验方法及根据GB15670—1995《农药登记毒理学试验方法》,对家兔进行皮肤、眼部刺激性试验。[结果]瑞香狼毒涂搽剂急性经口毒性的LD50为894.4mg/kg,皮肤刺激得分均小于0.49,急性眼刺激得分指数最高为2.1。[结论]瑞香狼毒涂搽剂为低毒、对皮肤无刺激性、对眼部轻微刺激的制剂,外用安全。     

大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织细胞因子表达及损伤程度的影响

本试验旨在研究体外感染金黄色葡萄球菌与大肠杆菌对奶牛子宫内膜组织中细胞因子白介素-6(IL-6)、IL-1β和IL-8的表达及损伤程度的影响。以体外培养的奶牛子宫内膜组织作为研究对象,采用1×10~5～1×10~9 CFU/mL大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织进行体外感染,通过实时荧光定量PCR和ELISA方法检测两种细菌刺激后奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白的表达量,并用HE染色法观察两种细菌感染后奶牛子宫内膜组织病理学切片。结果显示,1×10~5～1×10~9 CFU/mL大肠杆菌体外感染后,奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β和IL-8 mRNA表达量均极显著高于空白对照组(P0.01);金黄色葡萄球菌感染浓度为1×10~5、1×10~6 CFU/mL时,IL-6、IL-1βmRNA表达量极显著高于空白对照组(P0.01),感染浓度为1×10~7 CFU/mL时,IL-6、IL-1βmRNA表达量显著高于空白对照组(P0.05),感染浓度为1×10~6 CFU/mL时,IL-8 mRNA表达量显著高于空白对照组(P0.05),其他感染浓度均与空白对照组无显著差异(P0.05)。奶牛子宫内膜组织感染1×10~5～1×10~9 CFU/mL金黄色葡萄球菌和大肠杆菌时,IL-6、IL-1β及IL-8蛋白表达量均极显著高于空白对照组(P0.01)。相同浓度的大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织后,IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白表达量均极显著高于金黄色葡萄球菌感染组(P0.01)。HE切片染色结果显示,大肠杆菌感染后仍有部分上皮细胞保留,而金黄色葡萄球菌感染后上皮细胞全部脱落。本试验结果表明,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织后,引起的炎症反应不同。大肠杆菌感染后,促炎性细胞因子被显著上调,而金黄色葡萄球菌感染后破坏子宫内膜上皮细胞程度更加严重。     

双峰驼肝脏CYP3A亚酶活性的初步研究

CYP3A亚酶参与45%~60%常用药物的生物转化,在机体处置外源性物质的过程中发挥着重要作用。为了探讨双峰驼肝脏CYP3A亚酶活性,采用改进的钙离子沉淀法制备肝微粒悬液,并借助生物化学方法对双峰驼CYP3A亚酶活性进行了初步研究。结果表明,钙离子沉淀法制备的双峰驼肝微粒体蛋白含量为(1.541±0.264)mg/mL,CYP总酶含量为(0.412±0.063)nmol/mg,红霉素-N-脱甲基酶的活性为(1.159±0.001)nmol/(mg·min)。以上研究结果为今后借助探针药物检测双峰驼CYP3A亚酶的体外代谢活性的深入研究奠定了基础。     

公共事业管理专业实践教学体系与运行机制研究

构建科学的实践教学体系与运行机制,是公共事业管理专业建设的重要内容.公共事业管理专业实践教学以“理论-模拟-应用-创新”满足社会和学生的多元需求,在实践课程群组的支撑下,由多个模块构成课程、层次,最终组成总体框架.同时,完善运行机制,理顺内部系统的配合关系,完成“分散-集中-整合”,维持公共事业管理专业实践教学体系的平稳运转.除了从课程内外、学校内外整体构建公共事业管理专业实践教学体系与运行机制,还应加以综合评估,确保实践教学的效果.     

蒙药小白蒿总黄酮物质提取工艺的优化

旨在筛选蒙药小白蒿总黄酮的最佳提取工艺。利用单因素试验设计法,分别考查溶剂种类及其浓度、小白蒿与溶剂的料液比、提取温度和提取时间等影响小白蒿总黄酮提取效果的因素。结果表明,小白蒿总黄酮类物质的最佳提取工艺是:提取溶剂选用60%的乙醇,小白蒿与60%乙醇的料液比为1∶25,提取温度为70℃,提取时间为4h。研究结果为小白蒿有效成分的高效提取及临床应用提供了试验基础。     

超声辅助提取法对黄芩总黄酮含量的影响

为从不同超声条件中,筛选出黄芩总黄酮的最佳提取工艺。用超声波辅助技术提取黄芩总黄酮,用亚硝酸钠—硝酸铝比色法测定总黄酮含量。通过单因素和正交试验,确定了黄芩总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度为50%,超声处理时间为25 min,料液比1∶25,超声处理温度为70 ℃。在该条件下,总黄酮提取量为15.15 mg/g。     

采用特异性探针药物法测定双峰驼CYP3A酶活性

【目的】探究双峰驼CYP3A酶体外活性及其对外源性药物代谢的影响。【方法】将双峰驼禁食过夜12 h,颈静脉放血处死后,立即于肝门静脉处采集块状肝脏组织,洗去血污称重匀浆后,采用Ca²⁺沉淀法制备双峰驼肝微粒体,并通过BCA法测定其蛋白含量。同时优化双峰驼肝微粒孵育体系,取不同浓度的双峰驼肝微粒体蛋白悬液（0.016、0.031、0.063、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg?mL^-1）、不同浓度的探针药物咪达唑仑（MDZ）（7.813、15.625、31.250、62.500、125、250、500、1 000 µg?mL^-1）分别加入到孵育体系中,37℃预孵育5 min后,加入NADPH溶液后再孵育不同时间（0、2、5、10、15、20、25、30 min）。待反应完全后加入冰冷的甲醇和地西泮（DZP）溶液,涡旋混匀,800 µL全部混合液体经14 500 r/min离心20 min后,取20 µL上清液进行高效液相色谱紫外检测（HPLC-UV）,确定最适底物浓度、最适酶浓度以及最适孵育时间。分别取浓度为7.813、15.625、31.250、62.500、125、250、500、1 000 µg?mL^-1 MDZ探针药物溶液20 µL与双峰驼肝微粒体共同孵育15 min后,以混有内标DZP的冰冷甲醇终止反应,采用高效液相色谱紫外检测法测定反应产物1'-羟基咪达唑仑（1'-OHMDZ）的动态含量,计算出部分药物动力学参数。色谱条件：Sigma-Aldrich/Supelco Discovery C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为V（乙腈）﹕V（0.01 mol?L^-1 PBS缓冲液）= 40﹕60;等浓度洗脱20 min;检测波长为254 nm;流速为0.8 mL?min^-1;柱温为30℃;进样量为20 μL。【结果】使用Ca²⁺沉淀法制备的双峰驼肝微粒体保持了酶的良好活性,能满足后续体外药物代谢试验的基本要求,经BCA法测定其蛋白含量为(1.936±0.052) mg?mL^-1。双峰驼肝微粒体蛋白悬液、探针药物MDZ、PBS缓冲液、MgCl₂溶液以及NADPH溶液构成双峰驼肝微粒体孵育体系,随着孵育时间的延长,酶和底物进一步反应,当MDZ浓度为125 µg?mL^-1（终浓度为7.073 nmol?mL^-1）,肝微粒体浓度为2.000 mg?mL^-1（终浓度为0.050 mg?mL^-1）时,孵育15 min,酶和底物的结合最紧密,并呈现出饱和的状态,故确定其终浓度和时间为最适浓度和最佳孵育时间。经HPLC-UV法测定,1'-OHMDZ、MDZ和DZP的出峰保留时间分别为6.710、11.383和15.263 min,各成分色谱峰分离良好,且不受肝微粒体孵育体系中其他干扰峰的影响。HPLC检测方法的精密度、稳定性及回收率的试验结果均符合色谱测定的基本要求,即成功建立了准确、灵敏、可靠、重现性好的双峰驼CYP3A酶特异性探针药物的检测方法。以底物MDZ浓度和反应产物1'-OHMDZ生成速率进行Lineweaver-Burk双倒数作图,分别计算出最大反应速度V_max和米氏常数K_m。经Origin Pro8.6软件进行线性回归分析得到最大反应速度V_max为(0.380±0.028)nmol?mg^-1?min^-1,米氏常数K_m为(9.603±3.229)nmol?mL^-1,以此体现酶和底物的反应情况,并对双峰驼CYP3A酶的活性进行了间接测定。【结论】成功建立了跟踪检测CYP3A酶的特异性探针药物MDZ及其代谢产物浓度的高效液相色谱紫外检测方法。MDZ在体内经CYP3A酶的特异性氧化代谢后主要生成1'-OHMDZ,本文以MDZ的代谢产物1'-OHMDZ的生成速率为检测指标,首次对双峰驼CYP3A酶的体外活性及酶与底物的相互作用特点进行了研究。     

健康反刍动物源饲用芽孢杆菌的分离筛选和鉴定

为筛选到性能良好的芽孢杆菌,笔者在呼和浩特郊区的几个健康牛羊养殖场采集了粪样、水样等28份样品进行芽孢杆菌资源调查。经分离和纯化培养,共分离出疑似芽孢杆菌35株,并通过16S r RNA及17项生化鉴定对其作进一步的确认和属种鉴定。经16S r RNA分析,有15株为芽孢杆菌属;再经染色镜检,生化试验结果与《常见细菌系统鉴定手册》对比,有枯草芽孢杆菌4株(占26.7%)、蜡状芽孢杆菌5株(占33.3%)、泛酸芽孢杆菌3株(占20.0%)、环状芽孢杆菌2株(占13.3%)、球形芽孢杆菌1株(占6.7%)。说明呼和浩特市郊区健康牛羊养殖场芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌为主,占60%。