鹿皮胶原蛋白的提取及特性研究

胶原蛋白因具有独特的氨基酸组成和结构,被广泛地应用于医疗、食品及美容等领域。选取鹿皮为原料,通过酸水解和酶水解结合法提取胶原蛋白,其提取率可达32.38%,进一步分离纯化,通过测定原料中羟脯氨酸的含量换算后得出其所含胶原蛋白含量为9.912%。通过SDS-PAGE测定胶原蛋白的分子量为30万,并对其自由基清除能力进行了研究,在测定范围内,随着胶原蛋白浓度的增加,其自由基清除能力均增大,高浓度时其清除能力较强。     

鹿茸超临界CO_2萃取工艺及滴丸制备工艺研究

采用超临界CO2萃取技术进行鹿茸脂溶性成分提取并对制剂中的基质配比、滴制温度、滴速、滴头口径等因素进行研究,以丸重差异、容散时限、综合评分为考察指标,采用正交试验筛选,验证最佳滴丸制备工艺。结果表明:制备滴丸最优工艺为基质m(PEG 10000)∶m(PEG 8000)=54∶6,m(药液)∶m(基质)=1∶3,药液温度为60℃,冷却剂为二甲基硅油,滴速为30滴/min的条件下鹿茸超临界CO2萃取工艺及滴丸制备工艺稳定可行。     

人组织蛋白酶K在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定

在动物和人的骨代谢疾病中,组织蛋白酶K是木瓜蛋白酶家族中的一种半胱氨酸蛋白酶,是负责骨吸收过程中溶骨的主要关键酶,是新药物的分子作用靶点。通过毕赤酵母表达系统表达出重组组织蛋白酶K,进一步用离子交换和分子筛系统进行纯化得到高纯度有活性的重组组织蛋白酶K。运用FluStar荧光酶标仪测定390 nm(激发光)和460 nm(发射光)波长下荧光强度的变化并计算出组织蛋白酶K的酶活力为119.6 U,为进一步筛选骨质疏松等骨代谢疾病的新药提供参考。     

结核分枝杆菌Rv1400c多抗制备及反应原性分析

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;Western-blot分析鹿结核阳性血清的反应情况。SDS-PAGE和Western-blot结果显示:Rv1400c以包涵体形式表达,蛋白分子质量为39 ku;目的蛋白免疫新西兰兔后,ELISA检测血清效价达到1∶51 200。纯化的Rv1400c重组抗原蛋白能与鹿的阳性血清发生体外结合反应。