小反刍兽疫病毒及山羊痘病毒N-ITR基因二联实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

Peste des petits ruminants virus (PPRV) and goat pox virus (GTPV) are the causative agents of two kinds of goats’ diseases-peste des petits ruminants and goat pox which can cause disaster economic losses. In order to detect the two viruses simultaneously and quickly, two sets of primers and relative probes were designed based on the nucleoprotein (N) gene of PPRV and the inverted terminal repeat (ITR) segment of GTPV， respectively. In order to work together in the same reaction, the probes were labeled with different fluorescent materials 5′FAM-TAMRA3′and 5′JOE-Eclipse3′，respectively. Results showed that the duplex Real-time RT-PCR assay was identified to be specific for PPRV and GTPV only and specific fluorescent signal could be detected, but the related viruses including fowl pox virus（FPV）and canine distemper virus (CDV) had no specific fluorescent signal. Positive recombinant plasmids (PPRV pMD18-T-N and GTPV pMD18-T-ITR) were built and used for positive quantitative templates to establish duplex standard curves. The developed assay based on the probe N-ITR was found to be highly specific and sensitive with a detection limit of 10² copies/μL cDNA and 10³ copies/μL DNA for PPRV and GTPV， respectively. Finally, the duplex Real-time RT-PCR assay for simultaneous detection of PPRV and GTPV was established preliminarily in the study.     

新常态下完善新疆棉花目标价格补贴政策的思考

新常态下国内棉花产业面临诸多机遇和挑战,特别是2014年以来,国家连续两年在新疆实施棉花目标价格补贴政策,为完善我国农产品市场调控政策体系积累了宝贵的经验。梳理近年来国内棉花产业面临的新常态,分析了目标价格政策的作用机制,总结政策实施效果和问题,并为完善操作办法和措施提出建议。     

小反刍兽疫病毒原核表达体外转录系统的建立

构建了小反刍兽疫病毒(PPRV)辅助质粒和微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。RT-PCR克隆PPRV疫苗株N75/1N、P和L基因,亚克隆至有T7启动子的原核表达载体pGEM3Z构建完成3个辅助质粒,分别命名为pGEM3Z-N、pGEM3Z-P和pGEM3Z-L,并通过全基因合成构建含PPRV病毒5′端启动子序列(AGP)、3′端启动子序列(GP)、T7转录终止信号、丁型肝炎病毒核酶序列HamRZ及氯霉素乙酰转移酶(CAT),获得PPRV微型复制子重组质粒pGEM3Z-CAT。构建完成的微型复制子及辅助质粒在表达T7RNA多聚酶(T7RNP)感染痘病毒VTF7-3后,通过脂质体法优化4种质粒配比,并将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光分析CAT的表达情况,荧光显微镜观察到荧光的表达,并通过免疫印迹分析CAT蛋白的表达,表明构建的PPRV微型复制子具有转录和复制功能,这将有助于进一步开展以PPRV反向遗传操作为基础的免疫学及蛋白功能研究。     

农艺因素对杂交棉浙杂166纤维产量和品质的影响及若干生理性状的杂种优势

在三个地区进行了大田试验和盆栽试验,研究农艺因素对杂交棉浙杂166的纤维产量和品质的影响及杂交种若干生理性状的杂种优势。结果表明,最佳种植密度和氮肥用量因地区而异,金华点要比杭州和慈溪要求较低的种植密度和较高的氮肥用量;播种日期以4月15日播种地膜覆盖的处理铃数最多。从纤维产量和衣指上看,最适密度和氮肥用量分别为每公顷4.5万株和180kg,播种日期为杭州和慈溪为4月15日,金华为4月20日,播种后全部地膜覆盖。不同密度、氮肥用量及播种期之间,纤维品质无显著差异,但慈溪点表现为N1(135kg·hm 2)处理的纤维长度显著低于其它氮肥用量较多的处理。叶绿素含量(以SPAD表示)生育期间变异很大,在初花期和吐絮期,杂交种浙杂166高于其双亲和常规品种泗棉3号,而在盛花期和结铃期恰好相反。杂种及其双亲的MDA含量在生育期间也表现出较大的变化,且杂种的变化模式与不育系相似,表现为蕾期较低,而初花期及此后保持较高。与双亲相比,浙杂166具有明显的SOD杂种优势,生育期间的变化模式也与不育系相似。     

猪PLTP基因的PCR扩增及多态性检测

磷酸脂转运蛋白(PLTP)是脂代谢中重要的转运蛋白之一,在机体脂类代谢中主要介导高密度脂蛋白(HDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)间的磷酸脂转移,具有调控动脉粥样硬化(AS)、降低血浆HDL水平等作用.对云南大河猪85个血样进行了DNA的提取及检测,PCR扩增PLTP基因并进行PCR-RFLP分析(HaeⅢ).结果表明,PLTP基因具有丰富的多态性,为今后研究该基因的生物学功能提供了依据.     

小反刍兽疫病毒H蛋白原核表达的研究

小反刍兽疫病毒属副粘病毒科麻疹病毒属,为一不分节段的负链RNA病毒。本研究以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下栽的序列及载体的需要设计其主要的抗原基因H基因的编码序列的RT—PCIL扩增引物;然后将扩增基因片段与T载体连接克隆测序,再与原核表达载体pET100／D—TOPO连接、诱导表达。结果显示所设计引物对模极有预期扩增,序列测定表明为正确片段;片段经纯化与表达载体连接,已挑到阳性克隆。H基因的表达菌经IPTG诱导,SDS—PAGE电泳。结果显示：H基因有预期分子量大小的蛋白表达;用Anti—His抗体已检测到相应融合蛋白的表达,其原核表达的相应蛋白抗原性状况正在试验研究中,表达产物具有潜在的诊断抗原和免疫原价值。     

金华地区马铃薯品比试验

为筛选适宜金东区种植的马铃薯品种,保证当地马铃薯的高产优质,保障当地种植户的效益。选取了马铃薯新品种及部分推广品种在当地进行品比试验,通过对比产量、商品薯率等性状对参试品进行比对分析,从而筛选出适宜当地种植的马铃薯品种。品比试验结果表明：华颂香早、中薯早30、中薯3号、中薯5号的生育期低于73天,生育期相对较短,适宜金东地区种植。中薯5号产量最高,折合50955.6 kg/hm₂^,商品薯率87.1%,商品性良好,早熟性好;中薯早45产量第二,折合50021.3 kg/hm₂^,商品薯率80.8%,早熟性好;华颂香早产量49039.0 kg/hm₂^,商品薯率78.5%,早熟性好。中薯5号、中薯早45、华颂香早在金东区表现优异,具有一定的推广价值。     

云南省荷斯坦奶牛寄生虫病及其防制建议

寄生虫感染奶牛,消耗饲料营养,降低奶牛生产性能,还有可能引起人兽共患寄生虫病。用药不当,导致耐药性产生,还有引起牛奶及奶制品驱虫药物残留的安全隐患。寄生虫多呈隐性感染,由于奶牛对其的耐受力较其它动物强,饲喂营养较好,危害不易被人察觉和重视。     

云南省土杂鸡球虫病发病特点与防制对策

在鸡的养殖中,土杂鸡球虫病是日常防制工作中处理最多的疾病,其危害性很大。总结云南省土杂鸡的发病特点,同时根据多年来实践中取得的经验提出一些土杂鸡球虫病的防制对策和方法。     

特色甘薯应用简介

甘薯产量高、抗性强、适应性广,是我国主要的粮食作物,在我国栽植面积仅次于水稻、小麦、玉米。近几年来,随着人们生活水平的提高,甘薯在食粮中的地位日益下降,栽植面积也逐渐减少。但是,一些具有特殊用途的甘薯新品种被逐渐开发出来,而且越来越受到消费者的喜爱。金华市农科所