新疆哈萨克羊和阿勒泰羊多脊椎性状分析

动物的脊椎变异尤其是多脊椎变异是一个与生产性能相关的重要性状。为给选育优质高产的新疆特色的多脊椎绵羊新品系做参考,本研究统计了屠宰后的569只哈萨克羊和218只阿勒泰羊的胸椎(T)和腰椎(L)的数量和比例。在哈萨克羊中共发现T13L7、T14L6、T14L5、T12L6、T12L7、T14L7这6种脊椎变异现象,在阿勒泰羊中发现T13L7、T14L6、T14L5、T12L6、T12L7这5种脊椎变异现象。其中T13L7、T14L6和T14L7为多脊椎性状,在哈萨克羊和阿勒泰羊中分别占26.01%和23.39%。对哈萨克羊的生产性能分析显示,胸椎或腰椎增加一个,胴体长度和胴体重量分别平均增加2.86 cm,1.94 kg或1.88 cm,1.56 kg,且多胸椎性状优于多腰椎性状。本研究表明,多脊椎现象广泛存在于新疆哈萨克羊和阿勒泰羊中,且相对于哈萨克羊而言,阿勒泰羊的多脊椎现象更倾向于多胸椎性状。本研究为高产优质的多脊椎的哈萨克羊和阿勒泰羊新品系的选育提供重要的科学参考。     

靶向兔肌肉生长抑制素基因CRISPR/Cas9载体的构建和活性分析

家兔是研究基因功能和疾病模型的重要模式动物,但目前的兔遗传操作体系急需改进,建立成熟高效兔基因敲除平台具有重要意义。为了探究CRISPR/Cas9基因组编辑系统对家兔肌肉生长抑制素(myostatin,简称MSTN)基因的敲除效率,构建了Cas9/gRNA表达质粒p Cas9/gRNA。将Cas9/gRNA质粒转染到兔纤维细胞,经DNA测序发现p Cas9/gRNA诱导MSTN基因发生碱基缺失和点突变,基因突变效率为23%。结果表明,利用CRISPR/Cas9系统可在兔成纤维细胞中高效介导MSTN基因突变,为进一步建立高效的基因敲除兔平台奠定了基础。     

漓江流域传统村落旅游开发现状与对策研究

传统村落是农耕文明的精粹,延续着中华民族的文化基因,具有重要的历史文化价值。本研究选取漓江流域5个代表性的传统村落,结合调查问卷进行实地调研访谈,进而分析漓江流域传统村落旅游开发和保护中普遍存在的问题,并提出村落保护和旅游发展对策,以期为漓江流域传统村落保护和旅游可持续发展提供科学参考。     

发情期和乏情期哈萨克羊垂体差异表达基因筛选及功能预测

垂体是哺乳动物重要的内分泌器官之一,主要通过调控激素合成来调节动物发情。为了研究绵羊垂体系统在发情状态和乏情状态之间的基因表达差异,本研究使用RNA-seq技术分析了发情期和乏情期哈萨克羊垂体前叶的转录组数据。通过比较转录组数据发现:在发情期和乏情期的哈萨克羊垂体中共筛选出了3 211个差异表达的基因,其中包含298个上调的和2 913个下调的基因。利用GO和KEGG富集分析这些差异表达的基因发现:它们被显著地富集在卵母细胞减数分裂和孕酮介导的卵母细胞成熟等调控发情的信号通路上,提示这些基因在调控哈萨克羊发情状态中发挥着不可或缺的作用。本研究丰富了绵羊的转录组资源,为今后深入研究绵羊季节发情机制、提高绵羊繁殖率打下了良好的基础。     

表达靶向牛病毒性腹泻病毒shRNA的绵羊胎儿成纤维细胞的制备和鉴定

为了获得具有抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)能力的绵羊胎儿成纤维细胞,采用组织块和酶消化法分离培养绵羊胎儿成纤维细胞,利用脂质体转染法将shRNA转基因表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经抗性筛选获得抗性细胞克隆,利用PCR方法对获得的细胞克隆进行鉴定,用BVDV侵染转基因细胞,利用real-time PCR和病毒滴定测定法分析不同细胞克隆抑制BVDV复制的能力。结果显示:试验成功构建了靶向BVDV表达shRNA的转基因表达载体pNeo-2loxp-u6-sh BVDV,经抗性筛选共获得22个抗性细胞克隆;22个细胞克隆中12个细胞克隆含有目的基因,为转基因细胞,其中5个转基因细胞克隆具有明显的抗BVDV复制的能力,最高抗病毒效率达到90.7%。结论:在细胞水平能有效抑制BVDV病毒增殖的转基因绵羊胚胎成纤维细胞的获得,为进一步利用体细胞核移植技术制备转基因绵羊提供了合适的供体细胞。     

响应面法优化纤维素降解菌的培养条件和酶活力测定条件

试验旨在优化纤维素降解菌CE41的培养条件和纤维素酶酶促反应的条件,实现菌株的高产和纤维素酶的高效酶促反应。通过单因素试验和响应面法得出CE41的最佳培养条件为温度最适值38.67℃、pH值6.93、接种量6.14 mL,此时酶活力最高,为27.556 U/mL;酶促反应的最佳条件为反应温度58.19℃、pH值5.09、CMC-Na浓度1.42%,此时酶活力最高,为28.402 U/mL。研究表明,试验结果可为后续研究奠定基础。     

利用CRISPR/Cas9技术构建gdf11基因敲除小鼠及其表型鉴定

为了探讨敲除生长分化因子11(gdf11)基因对小鼠生长性状的影响，本试验根据gdf11基因序列设计向导RNA(sgRNA)并利用规律成蔟的短间隔回文重复序列和CRISPR相关蛋白(CRISPR/Cas9)基因编辑系统对该基因进行敲除，利用显微注射的方法获得gdf11敲除型F0代小鼠，通过聚合酶链式反应(PCR)和测序鉴定子代小鼠基因型。繁育后观察F1代小鼠形态，并采用骨架染色方法观察不同基因型小鼠的性状。结果显示，成功构建了gdf11基因敲除小鼠，并且通过繁育得到了野生型(gdf11^+/+)、杂合型(gdf11^+/-)和纯合型(gdf11^-/-)3种基因型的小鼠；形态观察发现，与野生型小鼠相比，纯合型小鼠在围产期死亡且尾巴是截断的，骨架染色显示，野生型小鼠有13个胸椎和6个腰椎，纯合型小鼠有18个胸椎和9个腰椎。结果表明，敲除gdf11基因可能会影响小鼠胚胎和中轴骨发育从而改变小鼠的生长性状。