靶向兔肌肉生长抑制素基因CRISPR/Cas9载体的构建和活性分析

家兔是研究基因功能和疾病模型的重要模式动物,但目前的兔遗传操作体系急需改进,建立成熟高效兔基因敲除平台具有重要意义。为了探究CRISPR/Cas9基因组编辑系统对家兔肌肉生长抑制素(myostatin,简称MSTN)基因的敲除效率,构建了Cas9/gRNA表达质粒p Cas9/gRNA。将Cas9/gRNA质粒转染到兔纤维细胞,经DNA测序发现p Cas9/gRNA诱导MSTN基因发生碱基缺失和点突变,基因突变效率为23%。结果表明,利用CRISPR/Cas9系统可在兔成纤维细胞中高效介导MSTN基因突变,为进一步建立高效的基因敲除兔平台奠定了基础。     

金刚烷胺抑制牛病毒性腹泻病毒复制的研究

为了在细胞水平测试金刚烷胺对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的抑制作用,试验采用细胞培养技术和CCK8法测定不同浓度金刚烷胺对牛肾原代(MDBK)细胞的毒性作用,确定药物的安全浓度。将感染BVDV的MDBK细胞用金刚烷胺处理,通过荧光定量PCR方法检测金刚烷胺对BVDV的抑制作用。结果表明:金刚烷胺的浓度为500μmol/L时,对MDBK细胞有很强的毒性;当浓度低于125μmol/L时,基本对细胞无明显毒性作用。BVDV的半数致细胞病变量(TCID_(50))为1×10~(-2.5)/mL。在浓度为250,166,125,100μmol/L的金刚烷胺的作用下,病毒的相对表达量分别为4.17%、4.19%、7.51%、21.69%。说明金刚烷胺在合理浓度下对动物体细胞无显著毒性,且具有抑制BVDV复制的作用。