沙门菌LAMP可视化检测方法的建立与应用

建立沙门菌病原体的一种可目视化环介导等温扩增技术(LAMP),实现对沙门菌的高效快捷检测。针对沙门菌的invA基因的高度保守区域,设计一套特异性引物,优化LAMP扩增反应体系和条件,并对该方法的特异性、灵敏性和人工污染样品以及临床样品分别进行检测。与传统的细菌分离与鉴定、PCR和real-time PCR方法进行敏感性比较。该方法优化后的最佳反应体系为内外引物浓度比例为3∶1,dNTPs为2.5μL,MgSO_4为1.5μL,2.5μL甜菜碱(10mol/L),1μL Bst 2.0DNA聚合酶,在62℃恒温条件下反应50min,可以特异性检出沙门菌,而对其他非沙门菌病原的检测结果为阴性。该方法的最低检测线为1.0×10~2 CFU/mL,灵敏度是常规PCR检测方法的1 000倍,与real-time PCR方法的灵敏度基本接近;针对人工污染沙门菌的鱼粉其检测灵敏度为5.0×10~2 CFU/mL;对临床样品的检出率为65.4%,与传统检测方法的检出率一致。本研究建立的LAMP检测沙门菌的方法特异性强、灵敏度高、操作简便、效能高和可视化,为基层监管部门和畜牧兽医工作者对于沙门菌病原的监控和初步筛选提供了技术保障。     

结核分枝杆菌蛋白TB9.7间接ELISA方法的建立

为获得新的鉴别诊断结核杆菌感染的候选抗原,根据Gene Bank中登录的结核杆菌H37Rv的TB 9.7基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到TB 9.7基因DNA片段。将该扩增片段克隆于PMD18-T载体中,得到载体PMD18-T-TB9.7。分别将pET32a质粒和PMD18-T-TB 9.7质粒用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,并将纯化的TB 9.7基因亚克隆至pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-TB 9.7。将其转化E.coli BL21 IPTG诱导后,经SDS-PAGE、Western blot分析鉴定,可见约30ku的外源蛋白带。表明TB9.7基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的TB9.7融合蛋白,建立间接ELISA诊断方法,检测了30份结核病人的痰检阳性血清,120份健康人的血清,敏感性为56.6%,特异性为97%,与痰检结果的符合率为84%。     

固原市旱地玉米生产现状及发展对策

分析了固原市旱地玉米生产现状、发展优势、存在的问题,提出了加快品种选育更新、培育龙头企业、加大科技支撑力度和完善服务体系建设的发展对策,以指导旱地玉米的生产。     

拖拉机故障诊断及排除的—般方法

一、故障论断的一般方法1、五官感触法。根据自己的看、听、摸、嗅先等五官感觉,运用自己平常积累的经验来判断可能的原因。例如,通过“看”发动机的排烟,判断发动机燃烧、着火是否正常。通过“听”发动机工作的响声,     

3种死菌悬液制备方法对PMA-qPCR结果的影响

本试验利用热灭活致死法、超声裂解致死法和紫外线照射法3种制备结核分支杆菌死菌悬液的方法,比较不同灭菌方法制备的死菌对PMA-qPCR偶联技术结果的影响,选择结核分支杆菌死菌悬液的最佳制备方法制备后续试验中用到的结核分支杆菌死菌;探索PMA-qPCR偶联技术的适用范围和局限性.结果表明,热灭活法和超声裂解致死法制备的结核分支杆菌死菌悬液影响PMA-qPCR检测的Ct值的变化;紫外线照射法制备的结核分支杆菌死菌悬液对PMA-qPCR检测的Ct值没有影响;热灭活法是制备结核分支杆菌死菌悬液的最佳方法;PMA-qPCR偶联技术不适用于细胞膜无损伤致死法制备死菌的检测.     

结核杆菌多位点环介导等温扩增检测方法的建立

为建立一种快速、高敏感、高特异、鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,本研究根据大多数致病性结核分枝杆菌共有序列esat-6,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌gyrB共有特异性序列,以及结核分枝杆菌种特异序列mtp40设计6对特异性引物对痰液中的结核分枝杆菌进行检测,并与鉴别培养基分离培养结果以及常规PCR鉴定结果进行比较。实验结果表明,建立的LAMP检测方法具有很高的特异性。可区分致病性结核分枝杆菌和非致病结核分枝杆菌,也可鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,可检测到7拷贝/反应。另外,用3种方法同时检测样品发现,LAMP与细菌培养的符合率为90.91%,LAMP与常规PCR检测结果的符合率为100%。LAMP检测方法可以在流行病学调查及现场快速诊断方面广泛应用,并为临床治疗提供依据。     

结核分枝杆菌巢式PCR诊断技术的建立和初步评价

以结核分枝杆菌特有的插入序列IS6110设计巢式PCR引物,对痰样本结核分枝杆菌的基因组DNA进行扩增,建立了检测结核病病原的巢式PCR诊断方法,试验验证有较好的特异性和敏感性,采用此方法扩增结核分枝杆菌可以获得244 bp的目的片段,对常见病原菌金黄色葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、李氏杆菌、布鲁氏菌等以及无结核病史的痰样本检测阴性,通过扩增不同浓度梯度稀释的模拟阳性痰样本确定了其敏感性为4个拷贝/反应.对送检的41份痰样本采用本方法进行检测,阳性率为60.98;.     

台湾食品工业发展经验及借鉴

通过对台湾食品工业发展历程及主要经验的分析,提出加快大陆农产品加工业发展必须在建立“五个体系”方面有所突破。     

奶牛场奶牛乳房保健技术

1科学合理地管理干奶牛,做好干奶牛乳房保健工作干奶期乳房保健管理的目标是,在产犊时有尽可能少的乳区发生感染。因而在干奶时应尽可能减少新的感染的发生。奶牛干奶处理程序:①挤净乳房内所有牛奶;②立即进行乳头药浴;③使乳头药浴液自然干燥;④用浸过酒精液的棉花球擦拭每一     

福建省农产品加工业发展中存在的问题和对策

福建省地处南、中亚热带,资源、区位优势显著,适宜茶叶、水果、食用菌、畜禽等特色农牧业生产,其产量位居全国前茅.近年来,福建省充分发挥其资源优势和区位优势,大力发展农产品加工业,有效地提高了农业和农村经济的运行质量和水平,促进了农业增效和农民增收.农产品加工业已经成为福建省经济发展中最具发展活力和后劲的重要产业之一.