小尾寒羊溶菌酶基因的克隆与差异表达分析

本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770 bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交GenBank,登录号为JX263305。经荧光定量PCR分析,与正常组羊相比,在S2免疫14和30 d的羊白细胞层中该溶菌酶基因表达轻微上调,但差异不显著(P>0.05);在免疫40 d时恢复到正常水平。这也进一步说明溶菌酶是一种存在机体内必不可少的天然免疫因子,为布鲁氏菌病有效防控方面的研究奠定了基础。     

肺炎克雷伯菌环介导等温扩增技术检测方法的建立

本研究旨在建立一种环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）检测食品中的肺炎克雷伯菌。选取肺炎克雷伯菌特有的毒力基因区域，设计2对引物（1对内引物、1对外引物），进行体外恒温扩增反应。对反应体系内的甜菜碱、核酸原料（dNTPs）、内外引物比例、Mg²⁺浓度、反应时间和温度进行优化和选择，并进行特异性和灵敏性试验检测。应用建立的LAMP方法对灭菌鸡肉人工污染加标样品进行检测。结果表明，通过优化试验，筛选到最优反应体系和反应条件；应用优化后的LAMP反应体系对包括肺炎克雷伯菌在内的18种常见微生物进行特异性检测试验，特异性良好。肺炎克雷伯菌LAMP反应体系对基因组的最低检测限是0.875 pg/μL，比传统PCR方法灵敏性高100倍。对人工鸡肉阳性样品进行检测，检测限为30 CFU/mL。本试验成功建立了一种能检测食物中致病肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法，该方法利用2对引物针对肺炎克雷伯菌目的基因6个区域进行体外恒温核酸阶梯性扩增，灵敏性更高，反应时间更短，检测成本更低。     

不同饲喂程序对种鸡繁殖性能和蛋品质的影响

文章旨在研究不同时间点饲喂种鸡对其繁殖性能和蛋品质的影响。试验选择健康、体重一致的雌性Cobb种鸡375只和雄性种鸡150只,随机分为3组,每组5个重复,每个重复35只(25只雌性和10只雄性)。各组分别在上午8点(处理1组,饲喂1次),8点和15点(处理2组,饲喂2次)和15点(处理3组,饲喂1次)饲喂相同的日粮,试验共进行13周。结果显示:处理3组产蛋率在同一周显著低于其他各组(0.05);处理1组较其他两组显著提高鸡蛋比重(P 0.05);处理3组较处理1组显著提高了蛋黄和蛋壳的重量(P 0.05)。一天饲喂两次(处理2组)鸡蛋蛋壳大肠杆菌数量(36周)较其他各组和周龄最高(P 0.05)。处理1组较处理2组显著提高了受精蛋孵化率(P 0.05)。处理2组和处理3组较处理1组显著提高了胚胎死亡率(P 0.05)。结论 :上午8点饲喂一次可以降低胚胎死亡率,下午3点饲喂1次降低种鸡产蛋率,但可以提高鸡蛋的比重、蛋黄、蛋壳重量及蛋壳厚度。     

不同养殖模式对三黄鸡生长发育和屠宰性能的影响

为了验证半野生散养状态对三黄鸡生长、器官发育和屠宰性能的影响,选择12日龄脱温三黄鸡,分别采用散养和精养,养至42日龄屠宰。结果表明:精养组肉鸡42日龄活重、褪毛重、半净膛、全净膛、体斜长、胸宽、胸深、龙骨长等指标都极显著高于散养组(P0.01)。精养组42日龄心脏重、肝脏重、脾脏重、肌胃+腺胃重、腿肌重、爪重、翅膀重等指标也极显著高于散养组(P0.01)。在指数测量中肌胃+腺胃指数、胸肌指数两组差异极显著(P0.01),肝脏指数差异显著(P0.05),其它指数差异均不显著(P0.05)。     

花绒寄甲防治桃红颈天牛的效果及其与气象因子的关系

2018年,于江苏句容研究了释放花绒寄甲卵对桃园桃红颈天牛的防治效果。结果表明：释放比例为20:1～25:1、25:1～30:1的花绒寄甲释放处理对桃园桃红颈天牛均有明显抑制作用,释放初期湿度是影响其防效的主要气象因子。防治后20d,花绒寄甲释放区释放比例25:1～30:1的处理防效达87.8%。从防治效果和经济成本角度综合考虑,建议加强春秋两季虫情监测,通过分阶段多次释放来提升防效,春季发现少量桃红颈天牛排粪孔时按照20:1～25:1比例释放花绒寄甲,桃红颈天牛虫量较多时按照25:1～30:1的比例释放花绒寄甲;秋季排粪孔有少许虫粪可进行人工捕杀,排粪孔虫粪较多时按照20:1～25:1比例释放花绒寄甲。     

镉、汞、铅污染及其微生物修复研究进展

随着人类活动的增强,重金属的应用越来越广,同时造成的环境污染问题愈发严重,特别是重金属镉、汞、铅。利用微生物技术修复环境污染中的重金属,以其成本低、效率高等特点,已经成为环境污染修复领域的研究热点。作者综述镉、汞、铅污染及其微生物修复的研究进展,并提出利用微生物细胞表面展示技术构建高效吸附重金属的基因工程菌,在微生物修复方面应用的重要价值。     

肠炎沙门菌avrA蛋白的原核表达及其生物信息学分析

【目的】 表达具有生物学活性的肠炎沙门菌（Salmonella Enteritidis） avrA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究肠炎沙门菌avrA蛋白对猪肠道细胞免疫功能的影响提供参考。【方法】 根据GenBank中肠炎沙门菌avrA蛋白全基因序列（基因ID：1254388）设计引物扩增avrA基因,回收的目的片段与表达载体pGEX-4T-1进行重组、克隆,用限制性内切酶和基因测序验证重组表达质粒的正确性。将验证后的重组表达质粒转化大肠杆菌Rosetta 2（DE3）感受态细胞,并在不同条件下对重组表达菌进行诱导表达。应用SDS-PAGE和Western blotting检测avrA蛋白的表达情况。将酶切测序后目的基因序列进行BLAST比对分析,并用ExPASy-Translate Tool软件预测avrA蛋白的氨基酸组成。应用生物信息学软件预测avrA蛋白的跨膜结构域、二级结构、三级结构及抗原性。【结果】 肠炎沙门菌avrA基因CDS序列全长为909 bp,编码302个氨基酸。限制性内切酶及基因测序分析结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-avrA构建成功。SDS-PAGE和Western-blotting结果表明,重组菌所表达的avrA蛋白为可溶性蛋白。重组菌在15 ℃诱导16 h表达的蛋白量为10 mg/L,蛋白溶解度为40%。生物信息学分析表明,avrA蛋白为膜外蛋白,该蛋白的16―301位氨基酸具有来自超家族YopJ丝氨酸/苏氨酸乙酰转移酶的保守结构域;avrA蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链分别占43.71%、39.40%和16.89%;avrA蛋白三级结构预测结果与二级结构一致;avrA蛋白有9个与B细胞结合的抗原表位,分别在第5―40、51―68、80―92、94、101―109、146―157、160―168、199―231和236―298位氨基酸处。【结论】 试验成功克隆出肠炎沙门菌avrA基因,并成功构建重组表达质粒和表达菌,诱导表达的avrA蛋白为可溶性表达;avrA蛋白为膜外蛋白,有9个能与B细胞结合的抗原表位。本研究结果为进一步制备检测肠炎沙门菌感染的抗体提供参考。