猪圆环病毒2型Cap全基因的克隆与原核表达

Cap蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的主要结构蛋白,能诱导免疫保护,是临床上利用血清学诊断PCV2的主要依据。本研究根据PCV2 TJ株全基因核苷酸序列(GenBank登录号:KC751546)设计特异性引物,利用PCR从PCV2 TJ株扩增获得Cap全基因,将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET32a-Cap,经IPTG诱导获得约48 ku的重组融合蛋白,Western blotting分析结果表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体和PCV2阳性猪血清均呈阳性反应。本研究成功克隆Cap全基因,构建原核表达载体,并实现Cap融合蛋白的表达,这为PCV2 Cap蛋白的功能研究及诊断方法的建立和亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

猪圆环病毒2型RPA恒温扩增检测方法的建立及初步应用

利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA),以猪圆环病毒2型Cap基因的保守序列为靶序列设计并筛选出一组特异性的引物和探针,建立了快速检测猪圆环病毒2型核酸的RPA方法。试验结果表明,该方法特异性强,猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)核酸检测结果均为阴性,灵敏性高,最低可检出核酸浓度为0. 87×10-4ng/μL,简单快速,且重复性好。利用所建立的RPA方法对183份临床样品进行检测,结果与实时荧光PCR方法符合率为98. 9%。本研究为猪圆环病毒2型核酸的快速检测提供了一种新方法,尤其适合基层实验室或养猪场的快速检测。     

我国农业供给模式分析

本文针对现有文献对于农业保险制度模式的划分很不一致的实际,依据农业保险供给主体的不同,将农业保险制度模式重新划分为三种,即政府供给模式、市场供给模式和合作供给模式,以期为理论研究和实践选择提供参考。     

加强制度创新 推行自主治理——我国小型农田水利设施治理制度变迁分析

当前我国小型农田水利设施的治理制度正处于不断演进状态,然而自主治理作为一种更为理性的制度安排却没有在我国普遍开展。本文对现有制度变迁的原因、条件和路径进行分析,给出了自主治理制度变迁的具体路径。     

我国生态农业发展困境分析

生态农业是农业可持续发展的理性选择,由于生态农业的外部性、推广方式的单调性以及一些宏观环境方面的因素,其发展遇到了极大的障碍。为此政府应加大对生态农业的投入力度,完善农业科技推广服务体系,以绿色食品生产为主,走产业化道路,与高效农业、设施农业、旅游观光农业相结合,提高其经济效益和发展层次。