蟛蜞菊醇提物对原代鸡胚心肌细胞抗热应激作用研究

为探究蟛蜞菊醇提物对原代鸡胚心肌细胞抗热应激作用的影响。研究选取12胚龄的文昌鸡胚构建原代心肌细胞体外模型。采用MTT法测定蟛蜞菊醇提物对心肌细胞活性和抗热应激损伤的影响。通过研究热应激组(45℃)与常温组(37℃)的心肌细胞上清液中AST和LDH含量变化,并运用Western Blot检测细胞中Hsp70的表达量,分析醇提物对减缓心肌细胞抗热应激损伤的作用。蟛蜞菊醇提物浓度为0.5～50μg/ml时对心肌细胞无毒性并具有促进活性作用。热应激处理下,醇提物浓度为5～20μg/ml时能够极显著提高心肌细胞的活性(P<0.01),并降低AST和LDH酶含量(P<0.01)。同时,蟛蜞菊醇提物促进了Hsp70的表达量,且表现出浓度依赖性作用,并且在蟛蜞菊醇提物浓度为20μg/ml时作用最佳。结果表明,适当浓度的蟛蜞菊醇提物可以有效减缓热应激对原代鸡胚心肌细胞的损伤,并诱导细胞显著提高Hsp70表达。     

猪圆环病毒2型Cap全基因的克隆与原核表达

Cap蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的主要结构蛋白,能诱导免疫保护,是临床上利用血清学诊断PCV2的主要依据。本研究根据PCV2 TJ株全基因核苷酸序列(GenBank登录号:KC751546)设计特异性引物,利用PCR从PCV2 TJ株扩增获得Cap全基因,将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET32a-Cap,经IPTG诱导获得约48 ku的重组融合蛋白,Western blotting分析结果表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体和PCV2阳性猪血清均呈阳性反应。本研究成功克隆Cap全基因,构建原核表达载体,并实现Cap融合蛋白的表达,这为PCV2 Cap蛋白的功能研究及诊断方法的建立和亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

脾虚大鼠胰岛胰多肽免疫阳性物质分布变化

脾虚证的临床表现以消化系统功能障碍为主,其中胰腺外分泌功能减退明显,且伴有食欲与体质量的显著下降.胰多肽(PP)是胰岛周边F细胞分泌的主要胃肠激素,对胰腺外分泌功能与食欲的调节有抑制作用,可导致氧化代谢增强,引起体质量下降.本试验旨在揭示大鼠胰岛胰多肽分泌变化与脾虚证发病之间的关系.笔者以利血平脾虚大鼠模型为研究对象,采用SP染色进行免疫组织化学研究,观察大鼠胰岛中胰多肽免疫阳性物质的分布情况.脾虚组与对照组的大鼠胰岛中胰多肽免疫阳性物质面积与胰岛面积百分比相比,胰头部分未见明显差异(P＞0.05);但脾虚组胰中、胰尾的PP免疫阳性物质所占面积极显著大于对照组(P＜0.01).结果表明,脾虚证大鼠胰岛中胰多肽总分泌量极显著增加.因此,胰多肽的分泌增加是导致脾虚证动物出现胰腺外分泌功能低下、食欲减退以及体质量下降的主要因素.     

装载鸡传染性支气管炎病毒 S1蛋白重组HD11细胞源外体的构建

为了给禽类巨噬细胞源外体在免疫应答的功能研究和家禽外体载体疫苗的研发奠定基础，本研究以鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchins virus, IBV)S1蛋白作为模式抗原，通过慢病毒表达系统技术实现在HD11细胞中稳定表达S1蛋白，再利用超速离心从细胞培养物上清中分离纯化得到外体。蛋白免疫印分析、电镜与粒径分析检测等结果表明，在该重组HD11细胞分泌的外体中可检测到稳定的S1蛋白表达，显示成功构建了装载IBV S1蛋白的重组外体。