TGFβ3基因多态位点及其与猪脊椎数性状的关联分析

本研究旨在探索转化生长因子β3(transforming growth factor beta 3,TGFβ3)基因在大白猪×民猪构建的F2代资源群体内的多态性,并分析其多态性与猪脊椎数性状的关系。试验采用PCR技术,以F0代个体的DNA为模板,筛选TGFβ3基因外显子区的SNP,并将筛选到的SNP在F2代群体中进行验证,进而分析SNP与猪脊椎数性状的关联性。结果发现,TGFβ3基因在F0代个体中仅筛选到1个SNP位点,即SSC7:105179474GA,表现为两种基因型GG和GA。TGFβ3基因不同基因型与F2代个体脊椎数性状的关联分析表明,SSC7:105179474GA与猪肋骨数、胸腰椎数之和呈极显著相关(P0.01),与猪腰椎数无显著相关(P0.05)。χ2适合性检验发现,该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。综上所述,TGFβ3基因可能是影响猪脊椎数性状的主效基因或与主效基因连锁,SSC7:105179474GA位点有望作为提高猪脊椎数性状的分子遗传标记。     

利用WGCNA方法分析猪胚胎期骨骼肌发育相关共表达网络的研究

为了了解猪胚胎期骨骼肌发育的共表达网络,并进一步揭示造成品种间骨骼肌发育差异的关键基因,试验分别选取大白猪和民猪妊娠第45,70,100天的怀孕母猪各1头,屠宰后采集胎儿的骨骼肌组织24份(大白猪和民猪各12份,即每个品种妊娠第45,70,100天各4份)进行测序,先对所有组织进行聚类分析以排除离群样品,然后采用加权共...     

杜洛克猪HMGA1基因多态位点与生长、饲料利用性状的关联分析

试验对HMGA1基因的两个SNPs位点进行分析,研究了HMGA1基因核苷酸多态性与生长、饲料利用性状的关联性。利用大白猪和民猪重测序结果比较发现了HMGA1基因的两个SNPs位点（g.-543 T > C和g.1356 C > T）,利用Sequenom质谱测序平台对杜洛克猪g.-543 T > C和g.1356 C > T位点进行基因分型,并分析该位点多态性与生长、饲料利用性状的关联性。结果发现,杜洛克猪群体g.-543 T>C位点,CT与CC基因型相比,90日龄体重升高了2.15 kg（P<0.05）,30 kg体重日龄降低了3.21 d（P<0.05）,断奶重升高,剩余采食量降低,100 kg体重日龄减少,30~100 kg平均日增重、40~90 kg平均日采食量、40~90 kg平均日增重均降低。杜洛克猪群体g.1356 C>T位点,CC与TT基因型相比,90日龄体重升高了0.37 kg（P<0.05）;平均日采食量降低0.13 kg/d（P<0.05）,100 kg背膘厚降低0.43 mm（P<0.05）,剩余采食量降低了70.42 g（P<0.05）,30 kg体重日龄降低了0.56 d（P<0.05）;40~90 kg平均日采食量降低了0.17 kg（P<0.05）,断奶重升高,100 kg体重日龄增大,30~100、40~90 kg平均日增重均降低;CT与TT基因型结果与上结果类似。结果初步表明HMGA1基因两个SNPs位点的突变有利于杜洛克猪的生长、饲料利用效率的提高。     

大白猪哺乳期背膘损失对繁殖性能的影响

为了研究大白母猪哺乳期背膘损失对其繁殖性能的影响,试验选取大白母猪1 178头,统计6个胎次的总产仔数、产活仔数、健仔数、断奶窝重、断奶发情间隔、哺乳期背膘损失等性状,根据哺乳期的背膘损失情况将母猪分为6组:0、0~1、1~2、3~4、5~6、6mm,以断奶窝重为协变量,利用最小二乘检验开展组间总产仔数、产活仔数、健仔数、断奶发情间隔等性状的差异显著性分析。结果显示,大白母猪6个胎次平均总产仔数、产活仔数、健仔数、断奶窝重、断奶发情间隔和哺乳期背膘损失分别为13.67头、11.51头、10.32头、65.90kg、4.83d和2.89mm,大白母猪1~6胎产仔数在各组间存在显著差异(P0.05)。综合全部6个胎次的结果可知,第4、5、6组间差异不显著(P0.05),但均显著高于第1、2、3组(P0.05);第4组总产仔数最高,达13.54头,比第1、2、3组分别高出1.90、2.29和1.63头(P0.05)。虽然各胎次中各组间产活仔数和健仔数性状有时也出现显著差异,但综合分析6个胎次组间并未出现显著差异(P0.05)。从断奶发情间隔性状来看,各组间均未出现显著差异(P0.05)。结果表明,在大白猪生产中,将哺乳期母猪的背膘损失控制在3~4mm可以获得更高的总产仔数。     

猪HMGA1基因的组织表达及其多态性与背膘厚的关联分析

旨在探究HMGA1基因在猪不同组织、不同日龄下不同品种中的表达谱,并对该基因编码区及3′UTR区的多态性与猪背膘厚进行关联分析。本研究利用实时荧光定量PCR检测大白猪HMGA1基因在7种组织的表达情况,及其在60、150和210日龄大白猪和民猪背部脂肪中的差异表达。对576头大白猪×民猪F2代资源群体的基因组DNA重测序进行HMGA1序列分析,筛选其编码区及3′UTR区SNPs,并以屠宰体重为协变量与背膘厚(第6～7肋)进行关联分析。结果表明,HMGA1 mRNA在大白猪不同组织中均有表达,且在组织间存在显著差异(P0.05),其中在肺中的表达量最高,而在心和肌肉中微量表达。在60和150日龄时,HMGA1基因在民猪背部脂肪中的表达量显著高于大白猪(P0.05);210日龄时在两个猪种中的表达差异不显著(P0.05)。通过对F2群体HMGA1序列分析,在编码区检测出13个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,其中包含2个错义突变位点:g.3261GA和g.5818GA,且g.3261GA位点与背膘厚显著关联(P0.05)。在3′UTR区检测到3个SNPs,且位于小RNA(microRNA, miRNA)结合靶点,其中g.7217GC和g.7280TC与背膘厚显著关联(P0.05)。研究结果表明,HMGA1作用于猪背部脂肪组织,且该基因g.3261GA、g.7217GC和g.7280TC位点可作为猪背膘厚选育的潜在分子标记,为猪的分子育种奠定基础。     

TGFβ3基因多态位点及其与猪脊椎数性状的关联分析

本研究旨在探索转化生长因子β3（transforming growth factor beta 3，TGFβ3）基因在大白猪×民猪构建的F2代资源群体内的多态性，并分析其多态性与猪脊椎数性状的关系。试验采用PCR技术，以F0代个体的DNA为模板，筛选TGFβ3基因外显子区的SNP，并将筛选到的SNP在F2代群体中进行验证，进而分析SNP与猪脊椎数性状的关联性。结果发现，TGFβ3基因在F0代个体中仅筛选到1个SNP位点，即SSC7：105179474 G > A，表现为两种基因型GG和GA。TGFβ3基因不同基因型与F2代个体脊椎数性状的关联分析表明，SSC7：105179474 G > A与猪肋骨数、胸腰椎数之和呈极显著相关（P < 0.01），与猪腰椎数无显著相关（P > 0.05）。χ²适合性检验发现，该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态（P > 0.05）。综上所述，TGFβ3基因可能是影响猪脊椎数性状的主效基因或与主效基因连锁，SSC7：105179474 G > A位点有望作为提高猪脊椎数性状的分子遗传标记。     

脊椎动物胚胎期脊椎的形成及信号通路调控机制

脊椎是哺乳动物整个躯体的支柱,具有较高的遗传力,且可对胴体长产生重要影响。不同物种之间的脊椎数量互不相同,甚至同一物种如猪、羊等物种内也存在变异。脊椎数主要受胚胎体节发育时期体节数量的影响,为了进一步探究脊椎形成和数量变异的调控机制,本文综述了脊椎的胚胎发育过程、重要中间结构体节的形成和调控因素,旨在阐明脊椎形成和发育的调控机制,进而为经济动物脊椎数的选育改良提供理论依据和研究思路。     

STAT3在介导雌二醇影响卵泡功能中的作用

本研究以猪卵泡为模型,探讨雌二醇(E2)经由STAT3调控生存蛋白(SURVIVIN)转录的非基因组途径,参与调控凋亡的分子机制。根据外观形态将卵泡分类,分别测定优势化卵泡与闭锁卵泡液中E2浓度。结果发现:E2在健康卵泡液中的含量极显著高于早期闭锁和晚期闭锁阶段(P0.01)。通过荧光定量Real time-q PCR和Western Blots检测卵泡不同发育阶段颗粒细胞中STAT3/SURVIVIN m RNA和蛋白水平,结果显示:SURVIVIN和STAT3在健康卵泡的颗粒细胞中的表达量极显著高于闭锁卵泡(P0.01),并随着闭锁程度的加剧呈现出逐渐递减的表达趋势。通过原代培养颗粒细胞中外源添加不同浓度E2(10-5、5×10-5、10-4 mol/L)检测相关基因蛋白表达水平的变化,结果显示:随着E2浓度的增加,STAT3的磷酸化水平也相应增加,其靶基因SURVIVIN的表达量却没有受到活化的STAT3影响。由此可见,E2能够通过上调STAT3的表达参与调控卵泡闭锁的发生。     

杜洛克猪MAP3K5基因多态位点与生长、饲料利用性状的关联分析

试验旨在研究MAP3K5基因多态性与杜洛克猪生长、饲料利用性状的关联性。利用Illumina SNP60芯片测序结果比较发现了MAP3K5基因的4个SNPs位点（Ssc1：30769583 A>C;Ssc1：30781169 A>G;Ssc1：30940839 A>G;Ssc1：30962276 G>A）。统计获得MAP3K5基因的4个SNPs位点的基因型频率及等位基因频率,发现4个SNPs为低度－中度的多态突变位点。对MAP3K5基因多态性与生长、饲料利用性状的关联性进行分析,结果表明,杜洛克猪Ssc1：30769583 A>C位点CC基因型个体与AA基因型个体相比剩余采食量（RFI）性状降低了133.08 g/d（P<0.05）;Ssc1：30781169 A>G位点的GG基因型个体与AG基因型个体相比RFI性状降低了116.18 g/d（P<0.05）,ADFI性状降低了0.23 kg/d（P<0.05）;Ssc1：30940839 A>G位点的GG基因型个体与AG基因型个体相比饲料转化率（FCR）性状降低了0.10%（P<0.05）;Ssc1：30962276 G>A位点的AA基因型个体与GG基因型个体相比ADG性状降低了0.04 kg/d（P<0.05）。试验初步认为MAP3K5基因4个SNPs位点的多态性对杜洛克猪的RFI、ADFI、FCR和ADG具有一定影响。     

拷贝数变异全基因组关联分析及数量性状基因座定位联合鉴定猪体高性状候选基因

旨在利用全基因组拷贝数变异区域（copy number variation regions，CNVRs）关联分析以及全基因组数量性状基因座（quantitative trait locus，QTLs）定位联合筛选出影响猪体高性状的候选基因。本研究利用快速检测基因组拷贝数变异软件CNVcaller对本实验室构建的大白×民猪F2代资源群体的重测序数据进行拷贝数变异检测。利用混合线性模型（mixed-linear model，MLM）将性别和胎次作为固定效应对体高性状进行拷贝数变异全基因组关联分析（CNVR-GWAS）。采用软件R/qtl进行QTL分析，并使用置换检验（permutation test，PT）进行检验。将CNVR-GWAS与QTL结果进行联合注释，结合GO富集和KEGG通路分析，对影响猪体高的位点和基因进行挖掘。利用实时荧光定量PCR（qPCR）方法验证候选基因。结果表明，本群体在全基因组范围内共有3 099个CNVRs，其中有两个CNVRs与体高性状在全基因组范围内显著相关，分别位于7号染色体的25 358 001~26 696 400 bp处（CNVR1）和54 087 201~54 090 000 bp处（CNVR2）。在混合线性模型分析的结果中发现，CNVR1拷贝数增加（P<0.01）和CNVR2拷贝数缺失（P<0.01）对猪的体高性状具有显著影响。基因组显著水平可找到2个显著影响猪体高的QTLs，分别为BH-1和BH-2，其中BH-2对体高性状的影响较大。CNVR1和BH-2重叠区存在1个嗅觉受体基因OR12D3和18个未被注释的基因。qPCR验证OR12D3的拷贝数变异与利用混合线性模型统计推断出的结果一致。初步推测，OR12D3基因的拷贝数变异可能与猪体高性状相关。