干制羊肉基因组DNA不同提取方法的比较

为了研究干制加工羊肉基因组DNA的最佳提取方法,本试验采用传统酚-氯仿法、磁珠法、改良CTAB法、离心柱法分别提取干制处理后的羊肉基因组DNA,并对4种方法提取的羊肉基因组DNA浓度、纯度、完整性以及提取所需时间、PCR扩增效果等进行比较。结果表明,采用磁珠法提取DNA的效果更好,DNA浓度为118.87 ng·μL^-1,A₂₆₀/A₂₈₀值为1.89,而且此方法具有提取时间短、效率高、污染小等特点。本研究结果为干制加工羊肉基因组DNA的大批量提取和检测提供了参考依据。     

可移动遗传元件相关的ESBLs基因传播机制研究

超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrum betalactamases,ESBLs)是一类能够赋予细菌对多种β-内酰胺类抗生素和单酰环类抗生素耐药的酶类,许多革兰氏阴性菌,如肠杆菌科、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌等均可以产生不同类型的ESBLs,如TEM、SHV、CTX-M等类型,还有一些较少报道的VEB、GES和PER型[1]。细菌可以通过多种途径获得这些ESBLs基因,其中转座子、整合子、接合性质粒等可移动遗传元件在捕获和转移这些     

致病性大肠杆菌毒力因子和耐药性研究进展

大肠杆菌(Escerichia coli是重要的肠道菌群,致病性大肠杆菌也是引起许多肠内、肠外疾病的罪魁祸首.近些年大肠杆菌耐药现象尤为严重,尤其是多重耐药菌株的出现,在致病性大肠杆菌的预防、控制和治疗上带来巨大困难,给我国养殖业带来巨大的经济损失,同时也对人类的健康造成潜在的威胁.因此,大肠杆菌毒力因子和耐药基因之间关系的研究也是近年来研究的重点问题之一.文章将从毒力因子和细菌耐药性方面阐述研究进展,探讨有效的预防和控制该细菌引起疾病的方法.     

牛腺病毒5型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

建立针对牛腺病毒5型六邻体(Hexon)基因的实时荧光定量TaqMan PCR检测方法。根据牛腺病毒5型Hexon基因高度保守区设计引物和TaqMan探针,绘制标准曲线,对其灵敏度、特异性、重复性进行验证,建立牛腺病毒5型实时荧光定量TaqMan PCR快速检测方法。结果显示,构建的重组质粒pUC57-BAV5,标准曲线在10~2～10~7拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.975 2,建立检测方法的最低检测限为32拷贝/μL;应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒、牛呼吸道合胞体病毒无交叉反应;重复性试验表明,同一浓度的20个平行样品的变异系数为1.4%。牛腺病毒5型TaqMan探针荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可以用于牛腺病毒5型的快速、准确的检测。     

发展产业集群 打造家禽强市

宣城养殖家禽的传统由来已久，靠长三角地区旺盛的市场需求拉动，九十年代初，我市家禽业开始异军突起．并逐步呈现出一枝独秀的良好局面。发展家禽产业集群，做好禽业文章，打造家禽强市．已在全市上下形成了共识，并作为重点特色板块经济正合力加以推进。     

哈尔滨地区猪源多重耐药大肠杆菌接合性质粒和整合子检测

为调查哈尔滨周边地区猪源多重耐药大肠杆菌流行情况,检测与水平转移密切相关接合性质粒traA、trbC及Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型整合子分布状况。对哈尔滨周边地区发病猪场采样处理,得到24株大肠杆菌。采用Kirby-Bauer法对24株大肠杆菌进行14种药物药敏试验,并采用聚合酶链式反应(PCR)法分析接合性质粒遗传标记traA、trbC及Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型整合子。结果显示大多数猪源大肠杆菌对14种抗菌药物均表现出较高耐药性,有些细菌甚至对其中12种药物产生耐药性。试验细菌对氟苯尼考、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶(SXT)和多西环素(DOX)耐药率最高,分别可达100%、95.83%和83.33%。traA和trbC检出率分别为91.67%(22/24)、62.5%(15/24),Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型整合子检出率分别为91.67(22/24)、12.5(3/24)和0。结果表明哈尔滨周边地区猪源大肠杆菌耐药现象十分严重,接合性质粒和整合子检出提示可能存在耐药性水平转移现象。     

猴D型反转录病毒Ⅰ型抗体免疫梳检测方法的建立及应用

为建立猴D型反转录病毒Ⅰ型抗体(SRV1)的快速检测方法,本试验采用基因工程技术制备SRV1的SRV1-30基因原核表达产物重组SRV1-30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法用于特异性检测实验猴血清中抗SRV1的抗体IgG。结果显示,最佳抗原包被量为100 mg/L;制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的猴SRV1病毒阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应,表明该检测方法特异性强;敏感性分析结果表明,SRV1-30蛋白能够敏感地检测到1∶200倍稀释的SRV1阳性血清;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对12份可疑猴血清样品进行检测,免疫梳方法与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。     

1株圆环病毒3型美国毒株全基因组克隆与遗传演化分析

为了解进口美国种猪中获取的猪圆环病毒3型(PCV3)毒株全基因组序列及遗传变异情况,根据GenBank中收录的PCV3基因组序列,设计2对特异性引物,对确诊感染PCV3的病死猪组织进行全基因组序列扩增、拼接、测序和序列分析。结果显示,获得的PCV3美国毒株(命名为PCV3_USA2021,GenBank登录号OL799306)全基因组序列长度约为2000 bp,与国内外不同地区的38个PCV3参考毒株同源性为98.7%~99.8%。其中,PCV3_USA2021株开放阅读框ORF1和ORF2与国内外38个参考毒株同源性分别为99.1%~99.9%和98.0%~100%。构建的全基因组系统进化树显示,该毒株为PCV3a亚型,与美国毒株(PCV3-US_SD2016)亲缘关系最近。本研究为PCV3的遗传变异、流行病学分析提供了参考,也为相关疫苗的研制打下了基础。     

恒河猴源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性和致病性

为了查明引起海口市某进境实验动物隔离场3例恒河猴死亡的原因，本试验分别采集3只恒河猴的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和淋巴结样本，进行细菌分离，通过细菌形态特征、显微镜镜检、生化鉴定、16S核糖体RNA(16S rRNA)序列分析对分离菌进行病原学鉴定；采用纸片扩散法(K-B法)测定分离菌的耐药表型；采用玻片凝集法测定分离菌的血清型；采用动物回归试验分析分离菌的致病性。结果显示，从3只恒河猴上各分离鉴定出1株大肠杆菌，命名为H01株(分离自脾脏)、H02株(分离自淋巴结)和H03株(分离自肝脏);3株大肠杆菌对12种常用抗菌药物产生不同程度耐药，并且都呈现多重耐药，其中对阿莫西林、庆大霉素、氯霉素、氟苯尼考和复方新诺明表现为耐药，仅对阿莫西林-克拉维酸钾、阿米卡星和多黏菌素B表现敏感；玻片凝集试验显示，H01株的血清型为O8,H02株的血清型为O3,H03株的血清型为O9;动物回归试验显示，3株分离菌都是强毒株。本试验为实验动物恒河猴源大肠杆菌病的防治提供参考依据。     

犬冠状病毒病的流行病学、症状、诊断与防治

犬冠状病毒在世界范围内多有流行，其潜伏期1～8d。本病传染迅速，数日内可蔓延全群。且随着日龄的增长，死亡率降低，是威胁犬类健康的重大传染性疾病之一。本文探讨犬冠状病毒的流行病学、临床症状、诊断及有效防治。旨在为犬冠状病毒的综合防治提供一些参考思路。