瘦肉型猪(PIC344)精液碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseFF和SephacrylS 200柱层系,从瘦肉型猪(PIC344)精液中提取出碱性磷酸酶。纯化倍数11 46,比活为81 23U/mg蛋白。提取液经PAGE和SDS PAGE检测,呈现一条带。该酶相对分子质量为90 12KD,亚基分子质量为48 41KD,该酶为两个相同亚基组成。等电点为8 19,最适pH值9 5,最适温度为40℃,以磷酸苯二钠为底物测得Km值为3 98×10-4mol/L。经分析,Cu2 、Cd2 为酶的抑制剂,Ni2 、Ca2 、Mg2 为该酶的激活剂。选用CuSO4、Cd(NO3)2作酶的抑制类型判断,结果表明,CuSO4为非竞争性抑制,抑制常数为1 32×10-3mol/L,Cd(NO3)2为竞争性抑制,抑制常数为3 33×10-4mol/L。     

小鼠腔前卵泡的分离采集和体外成熟研究

采用机械法和酶法结合机械法分离采集小鼠卵巢 ,每只小鼠可获腔前卵泡 5 3 2 5和 5 7 2 9枚 (P <0 0 5 )。成年小鼠腔前卵泡在体外培养 9d ,换用成熟培养液继续培养 2 4～ 2 8h后 ,3种不同培养系统中卵泡的成熟分裂率分别为 5 47%、3 85 %和 9 31%。表明EMEM +5 %FCS +0 2 3mmol/mL丙酮酸钠 +2 0 μg/mLFSH +0 0 5mmol/mL次黄嘌呤 +2 0 0IU/mL青 -链霉素培养系统可以使小鼠腔前卵泡卵母细胞在体外发育达到成熟     

繁殖期雌性大熊猫尿中激素变化的研究

用ELISA法对39只次发情雌性大熊猫尿中雌酮(E1G)和19只次产前大熊猫、6只次假孕大熊猫尿中孕酮(P4)的含量进行测定、统计分析,结果表明:(1)雌性成体大熊猫,发情期多在2—5月份,尿中E1G/Cr由基础值<12ng/mg开始上升,达峰值需8—15d,平均12d。E1G/Cr峰值>60ng/mg,峰值下降12h内进行首次本交、人工授精或两者交替配种,受孕率达100%;峰值下降12—24h内进行首次本交、人工授精或两者交替配种,受孕率达83 3%;峰值下降24h后进行首次配种,受孕率为0。E1G/Cr峰值<60ng/mg的发情雌性大熊猫,无论在峰前、峰值下降时或峰后进行首次配种,受孕率都为0。(2)大熊猫产仔季节一般多在7—9月份,妊娠期多为108—184d,平均150d。有妊娠行为表现时P4/Cr由基础值<12ng/mg开始上升,达峰值时平均需30d,P4/Cr峰值>60ng/mg。大熊猫产前9—18d出现P4/Cr峰值,然后急剧下降,达产仔平均需14d。(3)假孕大熊猫由配种到假孕结束所需时间与真孕无显著性差异。在整个假孕期间,P4/Cr波动性大,峰值不太明显,假孕行为表现持续时间平均为41d。