瘦肉型猪(PIC344)精液碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseFF和SephacrylS 200柱层系,从瘦肉型猪(PIC344)精液中提取出碱性磷酸酶。纯化倍数11 46,比活为81 23U/mg蛋白。提取液经PAGE和SDS PAGE检测,呈现一条带。该酶相对分子质量为90 12KD,亚基分子质量为48 41KD,该酶为两个相同亚基组成。等电点为8 19,最适pH值9 5,最适温度为40℃,以磷酸苯二钠为底物测得Km值为3 98×10-4mol/L。经分析,Cu2 、Cd2 为酶的抑制剂,Ni2 、Ca2 、Mg2 为该酶的激活剂。选用CuSO4、Cd(NO3)2作酶的抑制类型判断,结果表明,CuSO4为非竞争性抑制,抑制常数为1 32×10-3mol/L,Cd(NO3)2为竞争性抑制,抑制常数为3 33×10-4mol/L。     

部分金属离子及EDTA对瘦肉型猪(PIC344)精液酸性磷酸酶活性与荧光光谱的影响

研究了K+、Mg2+、Ni2+、Zn2+、Mn2+、Fe2+、Cd2+、Ca2+、Cu2+9种金属离子及EDTA对瘦肉型猪(PIC344)精液酸性磷酸酶(ACPase)活力的影响,发现K+、Mg2+、Ca2+、Ni2+、Mn2+对ACPase有不同程度的激活作用。Cu2+、Cd2+、Fe2+、Zn2+对ACPase有不同程度的抑制作用。同一浓度范围内的金属离子对ACPase的激活作用强弱依次为Mg2+>Ni2+>Mn2+>K+>Ca2+,对ACPase的抑制作用强弱依次为Cu2+>Cd2+>Fe2+>Zn2+。利用双倒数作图法研究了Cu2+、Cd2+对酶的作用,结果表明这2种抑制剂对酶的抑制作用为非竞争性抑制,用Dixon作图法求得其抑制常数Ki值分别为0.58×103mol/L、9.44×103mol/L。研究了Mg2+、Ca2+、Cd2+、Cu2+对酶荧光光谱的影响,结果表明:Mg2+、Ca2+、Cd2+、Cu2+引起酶荧光发射光谱强度降低,最大发射波长不变,说明这些金属离子对酶的构象有不同程度的影响。     

瘦肉型猪(PIC344)精液碱性磷酸酶功能基团的化学修饰

经正醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-SepharoseFF和SephacrylS-200柱层系，从瘦肉型猪(PIC344)精液中提取出电泳纯碱性磷酸酶。用NBS，PMSF，TNBS，DTT及AcBr在一定条件下分别选择性的作用于PIC344AKP的Trp，Set，Lys，His及巯基，并对酶活力的变化和吸收光谱的变化作了测定，结果表明，NBS，TNBS，PMSF，DTT的修饰能显著的抑制AKP的活力，活力的降低与修饰剂的浓度呈正相关；AcBr的修饰对AKP的活力没有明显的影响。作者认为Trp，Ser，Lys及巯基可能是AKP活力的必须基团。     

微波消解-石墨炉原子吸收法测定川芎镉含量方法学研究

[目的]建立准确测定川芎中镉含量的分析方法。[方法]微波消解法消化经粉碎混匀的川芎块根样品0.1 g,消解总时间25 min,消化液赶酸后稀释定容100 m L,以石墨炉原子吸收法测定总镉浓度。选择1.0 g/L磷酸作基体改进剂提高灰化温度至550℃。[结果]方法检出限为0.08 mg/kg,线性范围为0.08~2.00μg/L,日内精密度的RSD为0.2%~6.5%。测定5个种植区域的川芎样品共48份的加标样品回收率为96.0%~109.6%。[结论]该方法测定川芎中镉含量灵敏、准确、高效、易普及,为准确掌握川芎镉含量分布提供了可靠的定量方法。     

川芎主产区药材中镉含量调查研究

[目的]准确掌握道地产区川芎中镉元素含量.[方法]采集道地产区内彭山、彭州、邛崃、崇州、都江堰5个区域的川芎样品,采用微波消解-石墨炉原子吸收法测定其块状根部镉含量,通过计算和评价镉含量,分析不同种植区域间是否存在差异.[结果]5个种植区域的川芎镉含量背景值平均分别为邛崃0.302 mg/kg、彭山0.404 mg/kg、都江堰0.555mg/kg、彭州0.974 mg/kg、崇州1.025mg/kg;采自同一种植区域的川芎镉含量相同.[结论]通过初步调查认为道地产区川芎镉含量普遍超出我国限量标准,需要采取措施降低其中镉含量;种植区域土壤镉元素含量与川芎镉含量有一定相关性.