瘦肉型猪(PIC344)精液碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseFF和SephacrylS 200柱层系,从瘦肉型猪(PIC344)精液中提取出碱性磷酸酶。纯化倍数11 46,比活为81 23U/mg蛋白。提取液经PAGE和SDS PAGE检测,呈现一条带。该酶相对分子质量为90 12KD,亚基分子质量为48 41KD,该酶为两个相同亚基组成。等电点为8 19,最适pH值9 5,最适温度为40℃,以磷酸苯二钠为底物测得Km值为3 98×10-4mol/L。经分析,Cu2 、Cd2 为酶的抑制剂,Ni2 、Ca2 、Mg2 为该酶的激活剂。选用CuSO4、Cd(NO3)2作酶的抑制类型判断,结果表明,CuSO4为非竞争性抑制,抑制常数为1 32×10-3mol/L,Cd(NO3)2为竞争性抑制,抑制常数为3 33×10-4mol/L。     

高原草地杀蝗菌株嗜烟碱节杆菌Arthrobacter nicotinovorans的分离鉴定及发酵条件优化

从青藏高原采集的土壤中筛选到一株具有杀蝗虫活性的细菌，根据菌株形态和生理生化特征，结合16S rRNA序列分析，鉴定为嗜烟碱节杆菌Arthrobacter nicotinovorans，编号GZ1-6。室内测定了菌株GZ1-6对东亚飞蝗若虫的致病力，结果显示菌株GZ1-6菌悬液对若虫的校正死亡率达到75.56%。测定了碳氮源、温度、初始pH、装液量以及培养时间对菌株GZ1-6生长和杀虫活性的影响，得到菌株GZ1-6分别在以蔗糖和酵母浸膏为碳氮源，pH 7.5、恒温35℃的条件下生长最好，培养2 d，杀蝗活性较优化前提高了7.77%。菌株GZ1-6能够有效侵染东亚飞蝗并将其致死，可作为优良菌株进行杀蝗虫生物农药的进一步研发。     

瘦肉型猪(PIC344)精液碱性磷酸酶功能基团的化学修饰

经正醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-SepharoseFF和SephacrylS-200柱层系，从瘦肉型猪(PIC344)精液中提取出电泳纯碱性磷酸酶。用NBS，PMSF，TNBS，DTT及AcBr在一定条件下分别选择性的作用于PIC344AKP的Trp，Set，Lys，His及巯基，并对酶活力的变化和吸收光谱的变化作了测定，结果表明，NBS，TNBS，PMSF，DTT的修饰能显著的抑制AKP的活力，活力的降低与修饰剂的浓度呈正相关；AcBr的修饰对AKP的活力没有明显的影响。作者认为Trp，Ser，Lys及巯基可能是AKP活力的必须基团。     

紫花苜蓿根腐病生防菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

【目的】筛选获得对紫花苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株,并对其发酵条件进行优化,为紫花苜蓿根腐病生物防治提供菌株资源。【方法】以青藏高原的紫花苜蓿根际土壤为研究对象,以紫花苜蓿根腐病5种病原菌为靶标,利用稀释涂布法分离细菌;利用平板对峙法筛选对苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株;利用平板对峙法和菌丝生长速率法测定拮抗菌株对5种苜蓿根腐病病原菌的抑菌活性;通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析确定拮抗菌株的分类地位;利用单因素试验和正交试验对拮抗菌株发酵条件进行优化。【结果】从紫花苜蓿根际土壤中共分离纯化出92株细菌,从中筛选出16株对供试病原菌具有较强拮抗作用的菌株,其中菌株LJ3-1的抑菌效果最强,且具有广谱抑菌活性。对菌株LJ3-1发酵滤液的抑菌活性测定结果显示,其发酵滤液对供试病原菌的抑制率为44.9%~77.4%。结合菌落形态特征、生理生化测定和16S rDNA序列分析结果,将菌株LJ3-1鉴定为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。对菌株LJ3-1的发酵条件优化结果显示,其最适发酵培养基组分为3%葡萄糖、 1%酵母浸粉和0.5% NaCl;最适发酵条件为初始pH 6.5~7.0、培养温度35 ℃、 250 mL锥形瓶装液量80 mL、接种量3%、培养时间36 h、转速180 r/min。在优化后的发酵培养条件下,菌株LJ3-1对燕麦镰刀菌 （Fusarium avenaceum）的抑菌活性由76.5%提高至89.3%。【结论】菌株LJ3-1对紫花苜蓿根腐病5种病原菌均具有良好的拮抗作用,可作为研制苜蓿根腐病生物防治菌剂的候选菌株。     

5种植物乙醇提取物抑菌杀虫活性

【目的】研究5种植物乙醇提取物的抑菌杀虫活性,并对杀蝗活性最高的闹羊花提取物进行活性物质的分离,为进一步研究其杀蝗活性物质的结构和其作用机理提供参考。【方法】筛选铁棒锤Aconitum Pendulum、肉豆蔻Myristica fragrans Houtt、(紫丱子)紫铆Butea monosperma (Lan.)Kuntze、翼首草Pterocephalus hookeri和闹羊花Rhododendron mole 5种植物乙醇提取物,分别测定其对植物病原真菌的抑制活性,对蚜虫和东亚飞蝗的毒力;采用连续分级萃取法和柱层析法分离闹羊花的杀蝗活性物质。【结果】肉豆蔻提取物在1 000mg·L~(-1)质量浓度下对番茄绵腐病菌、苹果轮纹病菌和水稻纹枯病菌的抑制率分别为75.23%、77.78%和88.85%;48h后闹羊花提取物在2 000mg·L~(-1)质量浓度下对蚜虫的致死率为55.38%,10 000mg·L~(-1)下的致死率为100%;闹羊花提取物在10 000mg·L~(-1)质量浓度下,24h后对蝗虫的致死率为44.83%,96h后的致死率为86.96%。从闹羊花提取物中分离得到的活性物质流分Ⅲ-2-2,在1 000mg·L~(-1)质量浓度下,24h后对蝗虫的致死率为53.57%,120h后的致死率为90.48%。【结论】肉豆蔻提取物的抑菌活性最高;闹羊花提取物对蚜虫和蝗虫的毒杀活性最高;闹羊花提取物中杀蝗活性物质集中在石油醚萃取物和二氯甲烷萃取物,从二氯甲烷萃取物中分离得到对蝗虫毒杀活性最高的流分Ⅲ-2-2。