基于BLAST与比较基因组学方法计算鉴定青鳉鱼的microRNA前体

microRNA（miRNA）是一类长度为18～25 nt的单链小分子RNA。它可以调控基因的表达调控。通过与目标mRNA的特定位点的结合,从而抑制蛋白质的翻译或诱导该mRNA的降解。目前鱼类miRNA方面以斑马鱼miRNA的研究较多。为发掘另一种鱼类模式生物——青鳉鱼（Oryzias latipes,medeka）的miRNA,利用BLAST同源搜索方法与比较基因组学方法,并根据成熟miRNA的序列保守性以及miRNA前体（premiRNA）的二级结构的特征,对该模式生物的pre-miRNA进行了计算鉴定与分析。通过与miRBase19中已经发布的miRNA进行比较,在青鳉鱼基因组中共找到了56条新序列。设定miRNA基因间距的阈值为5000nt,新发现的与已知的pre-miRNA共形成31个基因簇。同时,这56条新发现的pre-miRNA可以划分到33个已知的基因家族中,并分析了新发现的、保守miRNA的靶标与功能。     

水牛朊蛋白成熟片段基因的克隆与原核表达

【目的】克隆、分析水牛朊蛋白（prion protein，PrP）成熟片段基因，并获取纯化的表达产物。【方法】将应用PCR技术扩增的水牛成熟PrP的核酸序列克隆到表达载体pET-32a，并分析其序列；把阳性克隆质粒pET-32a-BPrP转化表达菌BL21(DE3)，鉴定纯化的表达产物。【结果】水牛朊蛋白成熟片段核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其他牛科动物的成熟PrP核酸、氨基酸序列间的相似性分别在97.1%和97.2%以上，并且发现水牛成熟PrP有5个重复序列，编码的氨基酸序列其中有2个九肽和3个八肽重复序列。具有较高的表达水平的PrP融合蛋白被纯化后，用Western印迹实验证明该蛋白具有PrP抗原活性。【结论】首次报道了克隆、分析水牛朊蛋白成熟片段基因，发现水牛成熟PrP有5个重复序列，并获得了具PrP抗原活性的水牛成熟PrP融合蛋白。     

复合型生态林业——现代林业的发展趋势探究

从20世纪90年代以后,随着国民经济的发展,林业生产的深度、广度等方面有了突飞猛进的改变,从原来的平面种植逐渐朝向生态、立体空间的方向发展。尤其是在最近几年里,打破土壤、阳光的限制因素,成功地尝试出林养、林棚、林农的生态林业新模式,以此促进现代林业发展的全面提高。     

利用SYBR Green real-time PCR方法监控鸡外周血淋巴细胞中马立克病毒的载量

建立基于SYBR Green Ⅰ的real-time FQ-PCR方法检测并定量鸡外周血淋巴细胞(peripheral blood leukocytes,PBLs)中马立克病毒(Marek's disease virus,MDV)的载量(以meq基因为定量标准),并将此技术的敏感性与标准PCR方法进行对比.应用PCR技术从MDV-1攻毒后的霞烟鸡PBLs中扩增MDV meq基因的部分片段,纯化上述基因的DNA扩增产物,然后克隆到pGM-T载体,重组质粒通过PCR和EcoR Ⅰ酶切及测序分析进行确认；将浓度梯度的meq基因的重组标准品质粒DNA进行real-time FQ-PCR,建立其相应的标准曲线.同样以质粒DNA为模板,real-time FQ-PCR方法的最低检出率为10拷贝,而标准PCR的最低检出率则为32拷贝.结果表明,在检测MDV时,real-time FQ-PCR敏感度比标准PCR要高.     

胰岛素样生长因子系统在动物生产中的研究进展

GH的促生长作用要通过肝脏、软骨等组织产生生长因子，即胰岛紊样生长因子(insulin-like growth factor，IGF)来介导。IGF系统与动物的生长发育、生产关系密切。作者综述了近年来IGF系统在动物生产方面的研究进展。     

金丝楸嫩枝扦插育苗基质选择试验研究

以6种基质开展了金丝楸嫩枝扦插育苗试验。结果表明：金丝楸嫩枝扦插基质以Ⅱ号配方（锯末：腐殖土为3：7）、Ⅳ号配方（锯末：腐熟牛肉为1：1）、Ⅵ号配方（纯草炭）效果最好．苗木地径粗状,高径比小,苗木重量大,根系发达而以Ⅲ号配方（河沙：纯黄土为2：8）育苗效果最差。     

人工诱导湘云金鳙雌核发育的研究

湘云金鳙的卵子经适宜UV剂量灭活处理的异源四倍体鲫鲤精子激活后,在4～6℃下冷休克11～13 min,抑制第二极体排出和第一次卵裂使染色体加倍,成功获得了极体雌核发育(meiG)和有丝分裂雌核发育(mitG)湘云金鳙二倍体个体.结果发现,用异源四倍体鲫鲤精子诱导获得meiG、mitG成活率可达到19.4％±2.3％和7.3％±1.9％.运用形态学测量、染色体计数和微卫星标记技术对雌核发育二倍体个体(meiG、mitG)进行了分析,其染色体数目为48;微卫星分析表明,雌核发育二倍体基因组完全来自于母本,没有受到父本染色体的污染,证实其为雌核发育二倍体.对雌核发育湘云金鳙性腺发育进行连续跟踪观察,所有雌核发育个体全为雌性,其中89％的个体的卵巢发育正常,为证明其雌性的性别决定类型为XX提供了证据.此外,雌核发育湘云金鳙F1的体色较普通湘云金鳙的体色偏红.雌核发育湘云金鳙的获得对其体色的稳定、种质资源的遗传改良和性别决定的研究等具有一定意义.