人促性腺激素释放激素及其转运肽基因的克隆、表达与纯化

研究根据GenBank中已发表的人GnRH2基因mRNA序列以及转运肽基因核苷酸序列,借助Oli-go4.1设计了一对寡核苷酸引物,以引物3'末端的短互补序列退火形成小段双链,从而互为模板和引物,通过引导合成长达90bp的目的序列GnRH/TRS。将其克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pYC1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC1,进一步的序列分析确认其中GnRH/TRS序列的正确性。pYC1经BamHI和EcoRI酶切得到GnRH/TRS片段,然后将此片段克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组质粒pYC2。经酶切鉴定筛选出阳性克隆pYC2,并转化到大肠杆菌BL21(ED3)plyS实现原核表达。IPTG诱导后成功表达出与预期大小相符的约28ku的融合蛋白,光密度扫描对表达产物进行初步定量,表达产物约占菌体总蛋白的33.3%,表达产物经GlutathioneSepharose4B层析纯化后,得到了纯度较高的GST-GnRH/TRS融合蛋白,为进一步科研和实际应用奠定基础。     

促性腺激素释放激素的研究进展

促性腺激素释放激素 (ＧｎＲＨ) ,又称黄体生成素释放激素(ＬＨＲＨ) ,为下丘脑神经元分泌的十肽激素 ,其化学结构为 :(焦 )谷 -组 -色 -丝 -落 -甘 -亮 -精 -脯 -甘 -ＮＨ2 。迄今还未发现哺乳类动物ＧｎＲＨ的结构有什么不同。下丘脑分泌的ＧｎＲＨ由垂体门脉系统到达垂体前叶 ,作用于垂体前叶的促性腺激素细胞 ,膜上的ＧｎＲＨ受体 ,通过磷脂酰肌醇系导细胞内钙离子浓度增加 ,促进垂体前叶分泌促卵泡素 (ＦＳＨ)和黄体生成素 (ＬＨ)。ＦＳＨ促进卵巢的卵泡生长发育 ,而在ＦＳＨ和ＬＨ共同作用下 ,使成熟的卵泡分泌雌激素和孕激素。下丘脑…     

GST-GnRH/TRS融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究

以人工合成的促性腺激素释放激素(Gonadotropin releasing hormone,GnRH)/转运肽(TRS)基因与表达载体pGEX-6p-1相连的重组子(pGE-G)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(ED3)plyS。本文对GST-GnRH/TRS/BL21(DE3)plyS工程菌的GST-GnRH/TRS重组产物进行了诱导表达和分离纯化的研究,结果表明,该工程菌用LB培养基在30℃扩增至OD590为0.6左右,加IPTG(终浓度为0.2 mmol/L)诱导3.5h,此时GST-GnRH/TRS的表达量可占菌体总蛋白的33.3%。重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中。工程菌经溶菌酶破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再用8 mL 1%(V/V)Triton X-100变性溶解IBs,离心取上清,进行Glutathione Sepharose 4B柱一步法亲和层析,得到了纯度较高的GST-GnRH/TRS融合蛋白,为进一步研究和实际应用奠定基础。     

基于BLAST与比较基因组学方法计算鉴定青鳉鱼的microRNA前体

microRNA（miRNA）是一类长度为18～25 nt的单链小分子RNA。它可以调控基因的表达调控。通过与目标mRNA的特定位点的结合,从而抑制蛋白质的翻译或诱导该mRNA的降解。目前鱼类miRNA方面以斑马鱼miRNA的研究较多。为发掘另一种鱼类模式生物——青鳉鱼（Oryzias latipes,medeka）的miRNA,利用BLAST同源搜索方法与比较基因组学方法,并根据成熟miRNA的序列保守性以及miRNA前体（premiRNA）的二级结构的特征,对该模式生物的pre-miRNA进行了计算鉴定与分析。通过与miRBase19中已经发布的miRNA进行比较,在青鳉鱼基因组中共找到了56条新序列。设定miRNA基因间距的阈值为5000nt,新发现的与已知的pre-miRNA共形成31个基因簇。同时,这56条新发现的pre-miRNA可以划分到33个已知的基因家族中,并分析了新发现的、保守miRNA的靶标与功能。     

响应面法优化单酶复配酶解辐照玉米秸秆的研究

[目的]优化单酶复配酶解纤维素的条件。[方法]以经1 200 kGy~(60)Coγ-射线辐照处理过的玉米秸秆为原料,采用响应面分析法,对外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶等酶进行优化。[结果]4个因素对酶解产还原糖的影响主次顺序依次为木聚糖酶、外切葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶。得到最优酶添加量为外切葡聚糖酶1.07 U/g、内切葡聚糖酶31.53 U/g、β-葡萄糖苷酶20.81 U/g和木聚糖酶81.96 U/g。在上述条件下,试验验证还原糖产量372.624 mg/g与预测值能够很好地吻合。[结论]该中心组合设计响应面优化单酶复配酶解辐照玉米秸秆的方法可靠,可为单酶复配提供参考。     

GFP与GnRH/TRS融合基因表达载体的构建及表达

应用基因工程技术构建GnRH/TRS与绿色荧光蛋白的融合基因,核酸序列测定和Western boltting印迹分析基因表达;激光共聚焦荧光显微镜观察活细胞内荧光布局。结果融合基因获得了正确表达,GnRH/TRS-GFP融合基因的瞬间和稳定表达均获得了相同结果。GnRH/TRS-GFP融合蛋白具有绿色荧光蛋白的自发荧光特性,且不影响Gn-RH/TRS分子在细胞内的正确表达,为低促性腺激素性功能减退综合征治疗的进一步研究奠定了基础。     

禽流感病毒分子生物学研究进展

禽流感 ( Avian Influenza,AI)是严重危害畜牧业和人类健康的一种传染性疾病 ,该病以引起禽类的呼吸系统以及全身性败血症为特征。多年来在世界上许多国家和地区都发生过此病 ,危害严重 ,经济损失巨大。世界各国都非常重视 ,对其进行了大量研究工作。现在从基因组、毒力及其变异、病毒蛋白、基因疫苗等角度对禽流感病毒的分子生物学研究进行综述。     

实时荧光PCR检测鸡GAPDH基因方法的建立

根据GenBank上鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因的序列,在保守区域设计并合成一对引物,采用SYBR Green Ⅰ染料建立了荧光定量PCR法.采用梯度浓度的GAPDH基因重组标准品质粒DNA进行荧光定量PCR并建立了标准曲线,经分析显示标准曲线的Ct值与标准品浓度的对数值之间存在良好的线性关系;动力学曲线分析表明,在本研究所建立的反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度都达到10拷贝/反应.实时荧光定量PCR检测GAPDH基因表达水平标准品质粒和标准曲线的建立,为GAPDH基因作为内参基因进行鸡功能基因与病原基因表达的定量分析奠定了基础.     

鸡抗马立克氏病遗传机制的研究进展

鸡的马立克氏病(MD)遗传抗性是由多个基因控制着,其中主要组织相容性复合体(MHC)基因是最确定的抗性影响因素.遗传抗病性研究根据病毒的生活史可分为抗感染和抗发病两个阶段,鸡抗MD的遗传机制研究目前主要集中在抗发病阶段,主要包括抗性基因的选择、抗性基因的表达水平、抗病性的遗传力.文章对上述与鸡马立克氏病遗传抗性相关的各个因素的研究进展进行了综述.     

不同马立克氏病抗性鸡攻毒后IL-18基因的差异表达

本试验致力于评价鸡白细胞介素-18(IL-18)基因的表达模式与马立克氏病抗性遗传性状的相关性。MDV-1分别感染7日龄普通品系和抗性品系的霞烟鸡,攻毒后第4、7、10、14、21、28、35天采集外周血并分离外周血淋巴细胞,利用实时定量PCR技术对外周血淋巴细胞中IL-18转录水平进行相对定量分析。结果表明,普通霞烟鸡外周血淋巴细胞中具有相对高水平的IL-18mRNA,而马立克氏病抗性霞烟鸡外周血淋巴细胞中则具有相对低水平的IL-18mRNA。结果显示,鸡IL-18基因的表达模式与马立克氏病(MD)抗性遗传性状可能相关。