草鱼LPL基因的表达及饥饿和再投喂对其影响

获得了草鱼脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase, LPL)部分cDNA序列（GenBank注册号为FJ612596），并进行了序列同源性分析；采用半定量反转录聚合酶链式反应（SQ-RT-PCR）方法，检测了LPL基因在草鱼不同组织和不同发育阶段脂肪细胞中的表达状况；研究了饥饿和再投喂对草鱼肝胰脏LPL基因表达的影响。结果显示，所获得的草鱼LPL部分cDNA序列长度为360 bp，与其它物种的同源性为70%~89%； LPL基因在肝胰脏、肌肉、心脏、鳃、腹腔脂肪组织中均表达，其中在腹腔脂肪组织中表达丰度最高，在鳃中表达丰度最低；在成熟脂肪细胞中的表达丰度显著高于基质脉管组分（stromal vascular fraction,SVF）细胞；草鱼LPL基因表达水平在饥饿48 h后显著升高，再次投喂后12 h，回复到0 h的表达水平。研究表明，草鱼LPL在不同组织及脂肪细胞分化的起始和终末阶段均有表达，显示其在草鱼不同组织和脂肪细胞分化中具有重要作用，同时，其表达水平受营养状况的调控。论文首次克隆得到草鱼LPL基因部分cDNA序列，并对其进行了表达分析，研究结果可为LPL在鱼类脂质代谢中的作用研究提供参考和依据。     

水产饲料环保特性评价体系的初步构建

利用筛绢吊篓、烧杯、水浴锅等,于实验室内模拟水产养殖生产条件,分别测定了20℃和30℃水温下豆粕、鱼粉入水后的干物质溶失率、粗蛋白溶失量以及水质化学耗氧量、氨氮含量,对这两种蛋白饲料原料的环保特性进行了比较和评估,进而以设备条件、测定方法、测定指标等为主要内容,初步构建了水产饲料环保特性的评价体系。     

斑马鱼PGC-1β基因部分cDNA的克隆及其表达的初步研究

设计斑马鱼过氧化物酶体增殖物受体γ辅助活化因子-1β(PGC-1β)引物,扩增斑马鱼PGC-1β部分cDNA序列,并进行同源性分析.同时研究饥饿对斑马鱼PGC-1β基因mRNA表达的影响.结果表明:克隆得到斑马鱼PGC-1β部分cDNA序列长度为466bp,获得GenBank序列号为EU433886.同源性分析显示,斑马鱼PGC-1β基因同人、大鼠、小鼠、狗、鸡、金鱼同源性较低,分别为59.4%、57.5%、56.6%、59.0%、53.3%和59.0%.饥饿后,斑马鱼PGC-1βmRNA表达量显著升高.研究表明,PGC-1β在斑马鱼的能量代谢过程中可能发挥重要的作用.     

草鱼脂肪细胞提取与保存的研究

无菌条件下取草鱼腹腔脂肪组织,经胶原蛋白酶消化后获取脂肪细胞,通过台盼兰染液染色测定细胞活力以及统计学的方法,对脂肪细胞提取所涉及的消化时间、钢筛规格、离心速度、离心时间等4个重要因素以及脂肪细胞提取后的保存条件进行研究。结果表明,提取草鱼脂肪细胞的最佳条件为:消化时间30min、200目钢筛过滤脂肪细胞液、离心速度为1 000 r/min、离心时间为10 min。草鱼脂肪细胞在室温(25℃)下保存2 d内细胞活率在94.7%以上,而4℃下保存10min后活率已下降至71.1%。     

猪PGC-1β和PRC基因的部分cDNA克隆及表达分析

以猪心脏组织为材料,克隆猪PGC-1β(PPARγcoactivator-1β)和PRC(PGC-1-related coactivator)基因的cDNA序列,并进行生物信息学分析,同时明确其组织表达特征。根据人PGC-1β和PRC基因的已知mRNA序列和在猪ESTs数据库中搜索得到的同源序列,利用RT-PCR技术克隆猪PGC-1β和PRC基因的部分cDNA序列,并用SQ-RT-PCR和Western blot方法检测其在猪心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏、小肠、脂肪组织中的表达。结果,获得长度分别为1251和1254bp的猪PGC-1β和PRC基因的部分序列,分别编码415和417个氨基酸(GenBank登录号分别为:FJ377680和FJ479791),其核苷酸序列和氨基酸序列与其它物种的同源性均达到80%左右,并包含有TPPT-TPP和DHDY2个保守性序列,以及RNA识别基序(RRM)的保守性结构域。PGC-1β在8个组织中均有表达,而PRC主要在心脏、肝脏、肾脏和骨骼肌中表达,在脾脏和小肠中未检测到。本研究成功获取了猪PGC-1β和PRC基因部分序列,且组织表达存在差异,所获得的结果为研究PGC-1家族的生理功能及调节机制积累了资料。     

水产饲料环保特性评价体系的初步构建

利用筛绢吊篓、烧杯、水浴锅等，于实验室内模拟水产养殖生产条件，分别测定了20℃-30℃水温下豆粕、鱼粉入水后的干物质溶失率、粗蛋白溶失量以及水质化学耗氧量、氨氮含量，对这两种蛋白饲料原料的环保特性进行了比较和评估，进而以设备条件、测定方法、测定指标等为主要内容，初步构建了水产饲料环保特性的评价体系。