猪hnRNPUL1基因克隆及变异剪接体鉴定

旨在克隆民猪hnRNPUL1基因全长编码区（complete coding sequence，CDS）序列并进行可变剪接分析，研究其组织表达和亚细胞定位情况。本研究以3头3月龄民猪为试验材料，利用RT-PCR技术克隆hnRNPUL1基因CDS及可变剪接体，应用qRT-PCR检测其在心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、背肌、腿肌等组织中的表达情况，同时，在生物信息学预测的基础上，通过融合表达绿色荧光蛋白的方法鉴定核定位序列。研究结果表明，猪hnRNPUL1基因（GenBank accession No.：MN399154）CDS全长2 580 bp，预期编码的多肽链存在着hnRNPs家族的特征性结构域——SAP、SPRY和AAA；猪hnRNPUL1普遍表达于所检测的各组织中，其中在脾脏中表达量最高，在腿肌中表达量最低；核定位序列（NLS）位于多肽链的133~430 aa处，与生物学信息学预测的结果存在着偏差；同时获得了2个变异剪接体和11种可变剪接片段。本研究结果对进一步揭示猪hnRNPUL1基因功能及转录调控机制提供了基础。     

猪外周血单核细胞来源的树突状细胞体外诱导培养

[目的]建立猪外周血单核细胞来源的树突状细胞(MoDC)体外培养模型.[方法]从猪外周新鲜血液中分离外周血单核细胞(PBMC),通过贴壁法获得树突状细胞前体细胞,采用重组猪的集落共刺激因子(rpGM-SCF)和重组猪的白细胞介素4(rpIL-4)双因子诱导及脂多糖(LPS)刺激成熟法,收集不同时间段的细胞,利用扫描电子显微镜观察其形态,流式细胞分析仪检测表面分子表达率及其对FITC-dextran的吞噬能力,混合淋巴细胞反应检测细胞对同种异体T细胞的刺激能力.[结果]经体外诱导的DC具有典型的树突状形态;LPS刺激的DC表型分子CDla、CD80、CD86、SLAⅡ、CD172a与LPS未刺激的DC有明显增高,其吞噬能力有所下降,刺激同种异体T淋巴细胞的能力有所增强.[结论]该试验成功建立了猪MoDC的体外诱导培养方法,为进一步研究猪MoDC在机体免疫调节和抗病毒感染中的作用奠定了基础.     

三熟制模式下冬季作物对早稻返青缓苗期植株生长的抑制作用

设置3种稻田三熟制模式与“冬闲+早稻+晚稻”模式对比,研究了冬季作物对早稻返青缓苗期植株生长的影响。结果表明：三熟制模式下水稻返青期推迟2~3 d、缓苗期推迟1~3 d,期间水稻株高、叶龄、叶绿素含量（SPAD）、根茎叶干物质下降;在移栽至缓苗期内,三熟制模式下水稻植株根冠比比对照的小;移栽至返青期,三熟制模式下水稻生长速率均比对照处理低,在返青至缓苗期表现则相反。本研究结果表明,三熟制模式下冬季作物明显抑制了早稻返青缓苗期植株生长,其抑制作用在水稻返青后变小。     

硫酸新霉素可溶性粉引发SD大鼠肝肾损伤模型的建立

为建立硫酸新霉素引发SD大鼠肝肾损伤模型,将SpF级SD大鼠随机分为D30、D20、D10、L10、L5、L2、空白组7组,对D30、D20和D10组一次性灌胃不同剂量的硫酸新霉素溶液,对L10、L5、L2组连续7 d灌胃不同剂量的硫酸新霉素溶液;于试验第5、7、14天进行采血、采尿,检测血清中丙氨酸转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、血肌酐、尿酸的含量和尿液中尿液总蛋白的含量,在第14天测大鼠的肝肾脏器指数。结果显示,与对照组相比,一次性用药组检测结果肝肾损伤不如连续用药组,连续用药组用药5 d后L5组出现明显肝肾损伤(P<0.05),第14天L2和L5组仍有肝肾损伤(P<0.05),L5组较为严重。因此,用硫酸新霉素建立SD大鼠肝肾损伤模型以连续7 d用药5倍剂量为佳。     

松针对雏鸡免疫功能和血清胆固醇的影响

试验旨在研究松针对雏鸡免疫功能和血清胆固醇的影响。选用1日龄健康罗曼公鸡240只,随机分为4组,每组3个重复,每个重复20只鸡,对照组直接饲喂基础日粮和正常饮水,Ⅰ、Ⅱ组分别在基础日粮中以0.5、1.0 g/只剂量的松针粉拌料饲喂,Ⅲ组以0.5 g/只剂量的松针水煎液饮服。预试期4 d,正试期70 d。结果表明,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组CD3⁺CD4⁺T淋巴细胞百分率在首免后第15天时高于对照组,但Ⅰ、Ⅱ组CD3⁺CD4⁺T淋巴细胞百分率在首免后第30、45、60天时则低于对照组,Ⅲ组在首免后第45天时则低于对照组;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞百分率在首免后第15、30、45天时高于对照组,但Ⅰ、Ⅲ组在首免后第60天则低于对照组。Ⅰ、Ⅱ组新城疫抗体水平在首免后第14和21天时低于对照组,但在第28、35天时则高于对照组;Ⅲ组新城疫抗体水平在首免后第7、35天时低于对照组,但在第14、21天时则高于对照组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清总胆固醇和甘油三酯水平与对照组相比均有降低趋势,其中Ⅰ、Ⅱ组血清甘油三酯水平显著低于对照组和Ⅲ组（P<0.05）;Ⅱ、Ⅲ组血清低密度脂蛋白水平低于对照组,Ⅱ组血清高密度脂蛋白水平高于对照组,但差异均不显著（P>0.05）。综上所述,松针粉和水煎剂可促进T淋巴细胞的增殖与分化,提高CD3⁺CD4⁺和CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞含量,协同疫苗增强特异性免疫,不同程度的降低血清胆固醇水平。     

大口黑鲈POU1F1启动子区域SNPs对生长的影响

采用基因组步移技术克隆了大口黑鲈垂体特异性转录因子POU1F1启动子序列,该序列全长1 629 bp,预测存在4个八聚体转录因子1(Oct-1)结合位点和TATA框等基本转录元件,1个Homeobox转录因子结合位点和2个cAMP反应元件结合蛋白(CREB)结合位点。采用直接测序法研究发现,大口黑鲈POU1F1启动子序列的-18和-183两个位点存在SNPs,该两个突变位点只检测到A、B两种单倍型。对养殖群体进行不同单倍型的基因频率和生长关联分析,结果表明,单倍型A的等位基因频率为0.246,单倍型B的等位基因频率为0.754;群体关联分析表明,基因型为AA型和AB型的个体在体质量、体长、全长、体高和体宽等方面明显高于BB型个体,但基因型为AB型和AA型的个体之间在体质量方面没有明显差异。该研究结果为下一步进行分子标记辅助选择提供了基础。     

中药复方板青可溶性粉防治鸡传染性支气管炎的效果研究

为研究复方板青可溶性粉防治传染性支气管炎病毒感染雏鸡的功效与影响，本试验将鸡随机分为预防组、治疗组、双黄连治疗对照组、麻杏石甘治疗对照组、模型对照组和空白对照组。其中预防组和治疗组分别设高、中、低剂量组。除空白对照组不做处理外，预防组从12日龄起连续3 d通过饮水给药，随后各处理组将0.2 mL/只剂量的传染性支气管炎病毒通过滴鼻使15日龄的雏鸡染毒，染毒后治疗组连续6 d饮水给药。试验期间统计鸡发病数和治愈数，计算其发病率、保护率和治愈率；并检测各组鸡只的免疫器官指数、淋巴细胞增殖能力、血清中细胞因子IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-α水平，探究复方板青可溶性粉对IBV感染雏鸡的防治效果。试验结果显示，复方板青可溶性粉预防高剂量组保护率可达66.67%，治疗中剂量组治愈率可达83.33%，另一方面提高了感染雏鸡的免疫器官指数，增强了淋巴细胞增殖能力，在染毒后4和10 d，各给药组的T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力显著高于模型对照组（P<0.05）；还可以调节血清中IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-α水平，使其维持动态平衡，其中在攻毒后5和11 d，治疗中剂量组的IL-4和IFN-α水平显著高于模型对照组（P<0.05）。综合试验数据，复方板青可溶性粉具有较好的预防和治疗传染性支气管炎的作用，且治疗作用优于预防作用，其中预防高剂量组及治疗中剂量组效果最为显著。     

大口黑鲈生长激素促分泌素cDNA结构和早期发育阶段表达谱分析

研究采用RT-PCR、RACE和PCR技术从大口黑鲈胃组织中克隆得到ghrelin基因的cDNA。该基因全长434bp,其中开放阅读框(open reading frame,ORF)321bp,编码107个氨基酸的前肽,20个氨基酸的成熟肽位于第27位到第46位氨基酸处。前肽和成熟肽的氨基酸与已报导的舌齿鲈进行同源性分析,相似性分别为85%和90%。为进一步了解ghrelin基因在鱼体早期发育阶段的表达,本实验采用实时定量PCR(real-time PCR)方法检测了ghrelin基因在大口黑鲈胚胎和仔鱼发育过程的表达谱。结果显示,ghrelin基因在受精卵时期就有少量表达,但直到体节出现之前表达量均较低。出膜第4天ghrelin基因出现大量表达,第12天ghrelin基因表达量更显著增加,出膜第4天和第12天的表达量分别是受精卵时期表达量的206.77倍和531.20倍。出膜第4天正是大口黑鲈仔鱼开口觅食期,仔鱼消化系统初步发育成型,由完全利用卵黄囊营养转为从外界觅食阶段,到出膜第12天,仔鱼消化系统已发育完善,完全依靠外界营养提供能量,由ghrelin基因的表达量变化可推测其可能参与了鱼类早期发育阶段的摄...     

甘草酸体外抗PRRSV的作用机制

为了研究甘草酸体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的作用及机制,本试验确定了甘草酸的抗PRRSV作用,并通过检测甘草酸对病毒的吸附侵入、核酸复制等环节对病毒的结构蛋白、非结构蛋白以及宿主细胞受体和IFN-α表达的影响确定甘草酸体外抗PRRSV的作用机制。结果显示,甘草酸阻断PRRSV感染时减少了GP4的表达,并降低CD163和CD151的表达;抑制PRRSV吸附时抑制了PRRSV GP4和细胞CD163的表达;抑制PRRSV侵入时抑制了GP4的表达,并显著提升细胞CD163和CD151的表达;抑制增殖的作用机制是抑制细胞内PRRSV nsp9和nsp10的表达,前期抑制病毒引起的TLR3表达升高的趋势,后期促进TLR3的表达;中后期降低、末期促进IFN-α的表达。结果表明,甘草酸能通过调节PRRSV的蛋白、宿主细胞受体和细胞因子的表达来抑制PRRSV体外感染Marc-145细胞。     

甘肃省干旱气候成因分析

根据甘肃省近几十年的水文、气象资料,分析了甘肃省干旱多发的成因。结果表明,甘肃省干旱的发生不仅与其处于青藏高原东北部受季风影响有关,而且与该省的地形地貌、气象、降水、地表、地下和冰川水资源分布及水质,还有省内河川径流有关,尤其与人类社会经济活动有直接关系。