牛肠道病毒3D抗体与感染相关性研究

为了研究感染牛肠道病毒后非结构蛋白3D的抗体消长规律,试验从牛肠道病毒HLJ-3531株中扩增3D基因,将其克隆至表达载体pET-30a并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,以Ni-NTA柱亲和层析法纯化得到的重组3D蛋白为抗原制备3D多克隆抗体,随后建立3D-ELISA方法用于检测HLJ-3531毒株感染小鼠后的3D抗体消长规律,同时用RT-PCR方法检测感染时期小鼠体内病毒核酸。结果表明:RT-PCR技术可检测出病毒出现的时间范围与3D抗体存在的时间范围符合性良好。说明3D-ELISA配合核酸检测方法有很高的概率检测出病毒感染活动期动物。     

副结核病诊断和防控研究进展

副结核病是世界范围流行的以危害反刍动物为主的动物疫病,严重威胁畜牧业发展和人类公共卫生安全,我国将其列为二类动物疫病。由于该病病原感染机体的免疫反应复杂,需要根据不同感染时期施以不同的诊断方法;目前对于该病没有理想的疫苗可用,现有疫苗对预防感染无效;需要根据不同目标采取不同防控策略,国际通用策略为"大缸奶质量保证措施"(BMPAQ)和"密集副结核程序"(IPP)。未来需要研究更加方便、高效、快捷的诊断方法,加快新型疫苗研发、减少疫苗副作用及检测干扰,进一步强化多部门联动及防控宣传。     

牛布鲁菌病奶液PCR检测方法的建立及初步应用

为探讨以牛奶为材料检测牛布鲁菌感染的可行性,本试验建立了可鉴定布鲁菌属的单重PCR以及可鉴定布鲁菌种的多重PCR.结果显示,单重PCR方法的特异性强,只特异性的扩增布鲁菌DNA,对照菌株大肠杆菌、牛败血性波氏杆菌、根瘤农杆菌和苍白杆菌的扩增结果均为阴性;奶液中细菌检测灵敏度为1.08×104CFU/mL.用建立的多重PCR对7株不同种的布鲁菌体和基因组进行鉴定,表明该方法可以区分不同种布鲁菌.本试验中建立的PCR方法能够鉴定所有致病性布鲁菌并对疫苗株和野生毒株加以区分,适用于实验室布鲁菌的快速鉴定.     

牛IFN-γ基因的原核表达及其产物卵黄抗体的制备

γ-干扰素(IFN-γ)主要是由活化的T细胞和NK细胞产生,具有广谱抗病毒、抑制细胞增殖和免疫调节等多种生物学活性的细胞因子,它对动物机体的免疫应答、疾病的发生发展具有十分重要的作用.     

利用定格动画技术制作《兽医微生物学》教学用视频资源

本研究详细介绍了利用定格动画技术制作MOOC视频资源的过程。结果表明通过让学生自己制作定格动画视频,可以克服学习实验过程中经常出现的单调感,让学生觉得这个活动很有趣,比起用传统方法学习,他们更喜欢这个活动,制作这个视频可以帮助他们理解实验过程。     

Asia1型FMDV非结构蛋白3A基因的克隆、表达与抗原性鉴定

为了研究Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3A的抗原性,试验对Asia1型口蹄疫病毒非结构蛋白3A基因进行扩增、亚克隆及测序,将3A克隆至表达载体pET-32a(+)中,选取阳性克隆转化Rosetta(DE3)pLysS大肠杆菌感受态细胞,用IPTG诱导表达和纯化3A蛋白,并进行SDS-PAGE鉴定与Western-blot分析。结果表明:在大肠杆菌中成功地表达了3A蛋白,表达的目的蛋白能与Asia1型FMDV阳性血清发生特异性反应。说明非结构蛋白3A具有较好的抗原活性。     

外源重组蛋白制备鹅免疫球蛋白轻链特异性多克隆抗体

采用RT-PCR方法扩增鹅免疫球蛋白轻链恒定区编码序列(GoIgCL),构建原核表达载体pET30a-IgCL,在RosettaTM(DE3)pLysS宿主菌中表达鹅免疫球蛋白轻链恒定区重组蛋白rGoCL,以纯化后rGoCL作为免疫原制备兔抗GoIgL多克隆抗体,对多抗进行鉴定分析.结果表明,rGoCL在大肠杆菌中获得可溶性表达,可代替天然分离的轻链作为免疫原制备轻链特异性抗体,多抗效价为1 204800.研究为鹅免疫球蛋白的蛋白结构、功能分析以及鹅免疫诊断试剂研发奠定基础.     

IFN-γ真核质粒对口蹄疫病毒生长激素环多肽免疫小鼠的佐剂效应

随着合成抗原和重组抗原的日渐增多,发展合适的佐剂以确保疫苗的最大活性及对接种者的保护作用成为科研工作者的重要任务.目前,细胞因子作为疫苗佐剂已成为免疫佐剂研究的热点和新方向.     

Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中共表达及免疫效果评价

为研究Asia1型口蹄疫病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中共表达及其免疫原性,本研究基于酵母细胞内表达载体pPICZA,利用独立编码三个衣壳蛋白表达盒构建质粒pPICZA-vp031,重组质粒经BglⅡ线性化后进行电转化,获得重组有三个独立表达盒重组酵母菌。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明衣壳蛋白均得到正确表达且具有良好抗原性。重组酵母菌经口服免疫小鼠后,机体能够产生血清特异性IgG抗体和黏膜sIgA抗体,淋巴细胞增殖结果显示免疫小鼠淋巴细胞特异性增殖指数显著高于灭活疫苗组,细胞因子检测结果显示经特异性抗原刺激免疫小鼠淋巴细胞分泌IL-4和IL-10与灭活疫苗组无显著差异,显著高于PBS对照组,表明重组菌能够刺激机体产生特异性细胞免疫应答。本研究为口蹄疫基因工程疫苗研制奠定基础。     

流产布鲁菌BP26蛋白B细胞线性表位的鉴定

为了对流产布鲁菌BP26蛋白进行抗原表位研究,设计了3个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个BP26蛋白的重叠短肽,经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用流产型布鲁菌感染血清对3个融合蛋白进行免疫印迹分析,结果初步鉴定出BP26蛋白B细胞线性抗原表位位于第51-165氨基酸区域。在此基础上,针对BP26 2(51-165aa)短肽,设计了5个相互重叠10个氨基酸的短肽片段,进一步鉴定出了BP26蛋白B细胞线性表位位于第109-141氨基酸区域。该结果为进一步探索BP26蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。