卷丹转基因体系构建及岷江百合LrCCoAOMT的导入

以卷丹（Lilium lancifolium Thunb.）无菌小鳞片为试材，通过切片处理、优化农杆菌侵染浓度与时间以及重悬液和共培养基成分，构建农杆菌介导的高效遗传转化体系。结果表明，MS + 1.5 mg ? L-1 6-BA + 0.5 mg ? L-1 NAA + 30 g ? L-1蔗糖是切片芽分化的最佳培养基，添加100 mg ? L-1抗坏血酸能有效抑制褐化并促进不定芽增殖。MS + 2.0 mg ? L-1 NAA + 30 g ? L-1蔗糖是生根诱导的最佳培养基。抗生素敏感性测试发现，培养基中添加Kan 100 mg ? L-1或Hyg 75 mg ? L-1 结合Cef 400 mg ? L-1适宜抗性筛选。GUS染色分析表明，以去除大量元素的改良MS + 100 μmol ? L-1 AS和去除大量元素的改良MS + 1.0 mg ? L-1 6-BA + 1.0 mg ? L-1 NAA + 100 μmol ? L-1 AS为重悬液和共培养基，将切片在农杆菌菌液浓度OD600为0.4，侵染15 min，获得81.72% 瞬时转化率和25.2% 稳定遗传转化率。将岷江百合LrCCoAOMT转化卷丹，分子检测和GUS染色分析表明已获得转基因阳性株系。     

板栗铁型超氧化物歧化酶基因(CmFeSOD)的克隆及原核表达

超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是逆境条件下清除细胞内活性氧的关键酶,而铁型超氧化物歧化酶(FeSOD)作为该酶系中的关键酶之一,与植物的抗病性关系密切。根据板栗(Castanea mollissima Bl)转录组数据中分析得到FeSOD基因EST序列设计PCR扩增引物,以板栗幼叶的cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆获得CmFeSOD基因cDNA序列,通过生物信息学方法分析该基因的cDNA序列,并推定其氨基酸序列,同时将该基因片段连接到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行不同条件的诱导表达。结果表明,板栗CmFeSOD基因开放阅读框(ORF)大小为705 bp,共编码234个氨基酸,推测其蛋白分子质量为26.016 5 ku,理论等电点(pI)为6.86,具有FeSOD家族的特征基序和保守结构域,GenBank登录号为KY312852。遗传进化分析表明,板栗CmFeSOD与核桃的亲缘关系最近。SDS-PAGE电泳分析表明,通过原核表达获得CmFeSOD蛋白的分子质量约为29 ku,CmFeSOD蛋白在30℃,添加0.4 mmol/L IPTG,诱导6 h表达量最高,主要以包涵体的形式存在。     

球孢白僵菌原生质体制备和再生条件

球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]经液体培养后,采用酶解方法制备其菌丝原生质体,并采取单因素实验对再生条件进行了研究。结果表明,经纤维素酶制备球孢白僵菌原生质体后,再生的最佳条件是:用L-broth培养基培养球孢白僵菌78h,KCl 0.8mol/L(再生用蔗糖0.6mol/L),柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为缓冲系统,纤维素酶:蜗牛酶:溶菌酶=5:2.5:2.5(mg/mL),在32℃水浴中酶解3h(pH自然)。     

培养条件对栗疫菌毒素产生的影响

本文以中国板栗当年生幼嫩枝条作为栗疫菌粗毒素生物检测材料,对该病菌的产毒条件进行了研究。结果表明：栗疫菌在不同培养液的产毒能力有明显的差异,7种培养液中C（PD＋板栗煎汁）培养液产毒能力最强;栗疫病菌产毒能力以培养温度为26℃,培养基pH值为6的条件下培养18d生物活性最强;最佳氮源为蛋白胨;较好的碳源为糊精。     

竹叶花椒锈病病原重寄生菌的分离鉴定及产孢条件优化

【目的】筛选花椒鞘锈菌重寄生菌,并优化重寄生菌的最适产孢条件,为花椒锈病生物防治提供依据。【方法】利用形态特征及分子生物学对该菌株进行鉴定;采用单因素实验和Box-Behnken响应面法优化菌株HC30的产孢条件。【结果】从花椒叶锈病的夏孢子堆中,筛选获得菌株HC30对花椒鞘锈菌有重寄生作用,经形态学和分子生物学方法鉴定该菌为鞘柄锈柱隔孢菌。菌株HC30产孢条件优化结果显示,PSA培养基为最适培养基,蔗糖为最适碳源,硝酸钾为最适氮源,最佳培养条件为：温度25℃、氮源2.5%、碳源2.1%、pH 7,在此条件下添加花椒鞘锈菌夏孢子粉（0.5 g/L）的重寄生菌产孢量最好,为2.28×108 spores/mL。【结论】从花椒叶锈病的夏孢子堆中筛选的菌株HC30对花椒鞘锈菌有强寄生作用,并得到了鞘柄锈柱隔孢菌的最佳产孢条件,为进一步研制生物菌剂提供理论依据。     

连香树离体快繁初步研究

 连香树为我国珍稀濒危树种, 具有较高的经济价值和观赏价值。本文研究了3年生连香树(Cercidiphyllum japonicum Sieb. et Zucc. ) 带芽茎段的离体培养。筛选出最佳培养基: (1) 腋芽诱导培养基: MS +NAA 0.01 mg·L ^{- 1} ; (2) 丛生芽诱导培养基: MS +BA 1.0 mg·L ^{- 1} ; (3) 丛生芽增殖培养基:MS +BA 2.0 mg·L ^{- 1} + 2,4-D 0.01 mg·L ^{- 1} ; (4) 生根培养基: 1 /2MS + IBA 1.0 mg·L ^{- 1}。     

抗黑斑病核桃SSR标记筛选与应用研究

[目的]通过开发和筛选与核桃黑斑病抗性相关的SSR分子标记实现对不同核桃品种黑斑病高效准确的抗性鉴定.[方法]基于核桃转录组测序(RNA-Seq)结果,开发出可能与抗性相关的SSR标记,在抗感差异材料中验证与核桃黑斑病抗性相关的SSR引物.[结果]以12份抗病株系和感病株系基因组DNA为模板,获得1个与核桃抗黑斑病相关...     

循环加湿工艺对发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的影响

为提高发芽糙米中γ-氨基丁酸(GABA)含量,提出以循环加湿替代浸泡的一种发芽糙米生产新工艺。以东北粳稻为原材料,采用二次正交旋转中心组合设计试验,研究了循环加湿工艺中单次加湿量、间隔时间和温度对发芽糙米中GABA含量的影响规律,建立了GABA含量与各因素之间的数学模型,并以GABA含量为考核指标,将循环加湿工艺与浸泡工艺对比试验。试验结果表明,单次加湿量、间隔时间和温度对GABA含量影响显著(p<0.05),影响主次顺序为单次加湿量、间隔时间、温度,优化工艺参数为单次加湿量1.6%,间隔时间67min,温度31℃,此条件下每100g发芽糙米的GABA含量为27.33mg;循环加湿处理后发芽糙米中GABA含量为浸泡发芽处理的2.09倍。研究结果可为发芽糙米生产新工艺提供依据。     

重庆卷丹病毒检测与脱毒方法研究

为建立一种卷丹（Lilium lancifolium Thunb.）的脱毒快繁技术。以重庆南川种植的卷丹为材料，通过RT-PCR检测表明，其主要含百合斑驳病毒（Lily mottle virus, LMoV）和百合无症病毒（Lily symptomless virus, LSV）。采用38 ℃和4 ℃高低温交替处理卷丹珠芽，通过连续2次直剥1.0~1.5 mm的茎尖接种到10 mg/L病毒唑培养基中培养，检测脱毒效果。结果表明，该方法能有效脱除LMoV和LSV病毒，脱毒率分别为86%和88%，茎尖成苗率均为90%。利用无毒幼苗外层鳞片在培养基（MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖）中进行组培效果最佳，芽诱导系数达6.35；不定芽在培养基（MS +2.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖）中增值最显著，增殖系数为3.39；鳞片在添加50 g/L蔗糖的继代培养基中生根效果最优，生根率为98.72%。可获取大量脱毒幼苗，方法简便，可操作性强，为重庆卷丹产业发展提供技术支持。