萝卜遗传转化体系的建立

系统研究了影响根癌农杆菌介导的萝卜(Raphanus sativus L.)遗传转化的若干因素,建立了萝卜遗传转化体系:即切取萝卜带柄子叶外植体,先进行2 d预培养,用OD600为0.3~0.5的EHA105农杆菌菌液侵染5~7 min后,再进行5 d共培养,然后将外植体转接到MS+6-BA 6 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1+Cef 500 mg.L-1的培养基上进行7 d延迟筛选,再将外植体转接到MS+6-BA 6 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1+Cef 500 mg.L-1+Hyg 5 mg.L-1的培养基上进行10 d的抗性筛选。结果共获得126个抗性芽,其中8个抗性芽经PCR检测扩增出目的基因的启动子BcA9,约850bp,阳性率为6.3%,初步验证目的基因已经转入萝卜再生芽中。     

番茄离体培养及快繁殖技术研究

以番茄种子为试材,采用正交实验方法配制不同的培养基,研究不同浓度的6-BA、NAA、IBA对不定芽诱导及丛生芽增殖的影响.结果表明:愈伤组织诱导的适宜培养基为:MS+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L;不定芽诱导适宜培养基为:MS+6-BA3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L;丛生芽增殖的适宜培养基为:MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.01 mg/L+蔗糖30 g/L;生根培养基为:1/2 MS+NAA 0.6mg/L+蔗糖30 g/L.     

红芽芋脱毒试管芋诱导及植株再生

为解决红芽芋脱毒苗移栽成活率低、种苗易分化等问题，以江西地方名优芋品种‘铅山红芽芋’为材料，开展茎尖脱毒、试管芋诱导及植株再生的研究。结果表明，芋芽剥取0.2 ~ 1.0 mm茎尖接种于MS + 2.0 mg • L-1 6-BA + 0.5 mg • L-1 NAA + 3%蔗糖培养基中可诱导成苗；通过RT-PCR分子检测，0.3 mm以下茎尖培养的试管苗中未发现芋花叶病毒（DsMV）；脱毒苗继代增殖最佳诱导培养基为MS + 3.0 mg • L-1 6-BA + 0.5 mg • L-1 NAA + 3%蔗糖，脱毒苗试管芋诱导的最佳培养基为MS + 1.0 mg • L-1 6-BA + 0.5 mg • L-1 NAA + 8%蔗糖，最佳培养条件为温度25 ℃，光照54 μmol • m-2 • s-1，光周期14 h • d-1；脱毒试管芋的最佳移栽驯化基质为草炭︰蛭石 = 2︰1；脱毒试管芋移栽后，成活率达97.71%，生长中未出现分化现象。脱毒芋相比未脱毒芋增产43.14%，营养品质指标存在显著差异。脱毒试管芋的诱导形成及植株再生体系的建立为红芽芋健康种苗的快速繁殖提供了一条新途径。     

反义AcInv基因导入马铃薯遗传转化体系的优势

以马铃薯品种陇薯3号的茎段和微型薯为受体材料,对其再生和农杆菌介导的遗传转化体系进行了研究。结果表明,茎段愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA2.5mg.L-1+NAA0.5mg.L-1+GA35.0mg.L-1+2,4-D1.0mg.L-1,分化培养基为MS+6-BA3.5mg.L-1+NAA1.0mg.L-1+GA310.0mg.L-1,微型薯薯片再生培养基为MS+ZT2.0mg.L-1+IAA1.0mg.L-1;愈伤组织诱导和生根阶段的选择压分别为Kan50和75mg.L-1,转化时不经过预培养,茎段农杆菌侵染10min,共培养3d;微型薯薄片侵染5min,共培养2d;共培养基中加入50μmol.L-1乙酰丁香酮,茎段抗性愈伤率和分化率分别提高14.29%和6.77%。通过该体系将反义AcInv基因导入马铃薯中,获得了具卡那霉素抗性的转化植株。经PCR检测,外源基因已导入马铃薯基因组中。     

微型月季腋芽诱导及增殖培养基配方的优化

以微型月季1年生健壮枝条为材料,在(25±2)℃,24~30μmol·m2·s-1,每天光照10 h条件下,采用2因素随机区组设计方法研究6-BA、NAA对微型月季腋芽诱导的影响,采用正交试验设计方法研究6-BA、NAA、KT、蔗糖配比对微型月季不定芽增殖的影响,提出高度(长度)指数概念,并用以评价不定芽增殖效果,优化不定芽增殖配方。结果表明:①MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1有利于腋芽的诱导,腋芽诱导率90%,平均芽数1.61个,芽长0.45 cm;②蔗糖和KT是影响微型月季不定芽增殖的主要因子,增殖率随蔗糖浓度的升高而增加,随KT浓度的增加而降低;③MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+蔗糖40 g·L-1不定芽增殖率最高(3.45)。④MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+KT 0.25 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1有利于不定芽长高,高度指数54.45,侧枝长度指数73.28。     

红姜花体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以红姜花（Hedychium coccineum）的花丝和花药为外植体,通过体细胞胚胎发生途径建立了植株再生体系。结果表明：外植体在MS + 4 mg ? L-1 2,4-D + 4 mg ? L-1 NAA + 1 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1 琼脂的培养基上经过120 d诱导出愈伤组织,愈伤组织在MS + 1 mg ? L-1 2,4-D + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0.25 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的培养基上经过继代筛选,获得浅黄色松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + B5维生素+ 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1 脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.02 mg ? L-1 NAA + 0.02 mg ? L-1 TDZ + 0.5 ~ 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 45 g ? L-1蔗糖的培养基中通过3个月的悬浮培养,可得到均质稳定的胚性细胞悬浮系（ECS）。胚性悬浮细胞在SH无机盐 + B5维生素 + 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0 ~ 0.20 mg ? L-1 TDZ + 45 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚诱导培养基中培养10 d,可见到白色半透明体胚发生,20 d后体胚发育成熟。当TDZ浓度为0.15 mg ? L-1时,体胚诱导率高达4 500个 ? mL-1 PCV ECS（PCV：细胞密实体积）。在SH无机盐 + B5维生素 + 0.20 mg ? L-1 IAA + 0.25 ~ 1.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚萌发培养基上,体胚萌发率高达100%。将萌发的体胚转移到1/2MS + 1 g ? L-1活性炭成苗培养基中,进一步发育成正常的再生植株,植株室外栽培成活率达90%。     

一品红的组织培养研究

以一品红腋芽、顶芽、茎段、嫩叶为初次诱导外植体,对一品红的组织培养途径进行研究,建立了一品红植株再生体系.结果表明:组织培养的取材部位为腋芽、顶芽和茎段.诱导愈伤组织外植体为茎段,培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+蔗糖30 g/L.诱导丛生芽的外植体为腋芽、顶芽和愈伤组织,培养基配方为腋芽、顶芽:MS+6-BA 0.6mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖30 g/L;愈伤组织:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L.丛生芽继代增殖的培养基配方为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30 g/L.生根培养基配方1/2MS+NAA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L.     

广西金银花再生体系的建立

以广西金银花的带腋芽茎段为外植体,MS、1/2MS为基本培养基,加入适量的6-BA、NAA,按照不同的组合配制出诱导培养基、分化培养基、生根培养基,构建高效的金银花再生体系。结果表明,诱导腋芽较理想的培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1及MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1,最适的继代培养基为Ms培养基+0.5mg·L-16-BA+0.01 mg·L-1NAA,最适生根培养基为1/2Ms培养基+0.5 mg·L-1NAA,为广西的金银花规模化种植提供了技术支撑。     

铁皮石斛增殖培养培养基配方的优化

以铁皮石斛不定芽为材料,采用单因素随机区组试验和正交试验设计方法,在25℃,2 000 lx,12 h·d-1条件下,研究基本培养基、NAA、6-BA、BR、蔗糖对铁皮石斛不定芽增殖的影响。结果表明:1/2 MS为铁皮石斛不定芽增殖的最佳基本培养基;NAA是影响铁皮石斛增殖有效芽倍增率和生根有效芽倍增率的主要因素;组合1/2 MS+花宝1号3 g·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 1.5 mg·L-1+BR 0.001 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+水解络蛋白0.25 g·L-1有利于不定芽增殖,增殖有效芽倍增率(17.31±0.09)、生根有效芽倍增率(5.68±0.03)均极显著高于其他处理。     

发根农杆菌介导山定子遗传转化及发根再生植株

为了提高山定子的生根能力,用发根农杆菌转化山定子,诱导产生发根,并由发根诱导出再生植株。通过对不同发根农杆菌株系、培养基、共培养时间以及添加乙酰丁香酮（AS）的研究,优化了发根农杆菌转化体系。当用添加AS（100μmol﹒L-1）的菌液侵染植株切段30 min,共培养3 d,在无植物生长调节剂的固体1/4MS培养基上诱导产生发根时,发根诱导率最高,达到88.89%。将发根根段在MS+BA 2.0 mg﹒L-1 +IBA 0.1 mg﹒L-1+GA3 0.1 mg﹒L-1的再生培养基上,通过愈伤组织的诱导得到再生植株,再生率3%。     

褪黑素对‘无核白’葡萄体细胞胚的诱导作用

以欧洲葡萄‘无核白’（Vitis vinifera‘Thompson Seedless’）未开放的小花蕾为外植体，研究0、1.0、2.0、3.0 mg ? L-1褪黑素（Melatonin）对其体细胞胚的诱导效果。结果表明：‘无核白’小花蕾在 MS + 1.0 ~ 3.0 mg ? L-1 褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 3 g ? L-1植物凝胶的培养基上继代培养30 d时愈伤组织诱导率较好，为73.67% ~ 89.10%，显著高于2,4-D处理，愈伤组织形成所用时间较2,4-D处理缩短了14 d。愈伤组织诱导120 d时，不同浓度褪黑素均出现体细胞胚，其中，以MS + 1.0 mg ? L-1褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖的培养基体细胞胚的发生率最高，180 d时达12.05%。体胚在 MS + 60 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的X6培养基中萌发30 d后，将萌发的子叶胚转移至MS + 0.2 mg ? L-1 6-BA + 0.1 mg ? L-1 NOA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的成苗培养基上，其中，1.0 mg ? L-1褪黑素诱导产生的体胚发育正常的数量较多，为14.84%。不同浓度褪黑素处理的体胚诱导率均于180 d后增长较快，且低浓度的褪黑素有利于体胚萌发与正常发育，2,4-D诱导的愈伤组织无体胚形成。     

黄瓜未授粉子房离体培养获得胚囊再生植株

7 种 F1 代黄瓜（Cucumis sativus L.）未授粉子房为试材进行再生植株培养，通过石蜡切片观察、激素含量测定探究胚囊再生植株形成过程及相关生理变化。结果表明：在 MS + 0.06 mg · L-1 TDZ培养基中有 3 个供体黄瓜材料未授粉子房获得再生植株，经流式细胞检测、染色体计数、SSR 验证分别为单倍体、双单倍体和同源四倍体。MS + 0.04 mg · L-1 TDZ + 1.0 mg · L-1 6-BA + 0.1 mg · L-1 NAA + 12 mg · L-1 AgNO3 培养基中子房产生大量胚状结构，但分化培养后没有获得再生植株。石蜡切片观察到在MS 和 MS + 0.06 mg · L-1 TDZ 培养基中培养 5 d 和 17 d 时胚囊已经发育。供体黄瓜子房切片中 GA、IAA含量随培养天数增加呈现先降低后升高的趋势，在培养 8 d 时最低，17 d 时 GA 含量比 2 d 时更高，IAA含量无明显变化。     

大丽花‘费罗加’组织培养和块根诱导

以大丽花品种‘费罗加’为试材,茎段作为外植体,探讨了不同基本培养基、激素组合、蔗糖浓度、光照时间等对诱导愈伤组织、不定芽、不定根和块根的影响,以期缩短块根生产周期。结果表明:初代培养在MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂6 g·L-1上愈伤组织诱导率为54.9%,褐化率为44.8%,污染率为26.6%,成活率达69.6%。继代增殖培养最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂6 g·L-1,增殖系数为7.8,愈伤组织诱导率22.9%。生根最佳培养基为WPM+NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 0.1 mg·L-1+蔗糖60 g·L-1+琼脂6 g·L-1+炭粉2 g·L-1,最适宜光照时间为6 h,生根率为98.5%,根系密集健壮。块根诱导最适材料为带根瓶苗,出现初步形态的块根,形成块根率达56.8%。     

小菘菜游离小孢子培养技术研究

以4个引自日本的小菘菜杂交种为试材进行小孢子培养,对影响小菘菜胚状体发生及其成苗的因素进行分析。结果表明：通过游离小孢子培养,获得了大量的小孢子胚状体及再生植株85株;不同基因型间的小孢子胚诱导率差异显著;4 ℃低温预处理24 h对小孢子胚的发生具有促进作用;NLN-13+0.2 mg?L-1 6-BA+0.1 mg?L-1 NAA为适宜的诱胚培养基;50 r?min-1低频振荡培养有利于提高子叶形胚发生的比例;MS+3 %蔗糖+0.75 %琼脂+0.1 g?L-1活性炭是小孢子植株继代和壮苗的适宜培养基;MS+3 %蔗糖+ 0.75 %琼脂+0.1 mg?L-1 NAA是小孢子植株适宜的生根培养基。     

魔芋浅层液体组织培养体系研究

采用不同激素配比的液体和固体培养基对花魔芋进行了组织培养研究。结果表明：浅层液体培养基在花魔芋组织培养时较固体培养基具有褐变率低、愈伤组织生长速度快、平均出芽数高、根粗壮、成本低等优势;初代培养基应选择MS+6-BA 0.5 mg?L-1+NAA 0.5 mg?L-1+蔗糖3.0 %+0.1 % PVP（pH 5.8）,出芽培养基应选择MS+6-BA 2.0 mg?L-1+NAA 0.5 mg?L-1+蔗糖3.0 %+0.1 % PVP（pH 5.8）,待出芽后转入MS+6-BA 1.0 mg?L-1+NAA 0.5 mg?L-1+蔗糖3.0 %+0.1 % PVP（pH 5.8）,二者交替培养可连续批量获取组培苗,生根培养基应选择1/2MS+IAA 0.5 mg?L-1+蔗糖1.5 %+0.1 % PVP（pH 5.8）。花魔芋愈伤组织继代3次后发现了A型、B型、C型3种愈伤组织,三者在外观、组织结构和分化能力上存在差异,试验和生产上选择A型和B型愈伤组织进行分化培养可得到高效稳定的分化体系。     

嘉定白蒜脱毒微鳞茎诱导的快繁技术研究

以嘉定白蒜为试材，研究了不同茎尖脱毒方法与不同外植体启动培养基对嘉定白蒜无菌苗建立与脱毒率的影响、不 同增殖培养基与切割方式对潜伏芽激活与增殖的影响，以及组培苗分株等级标准与培养基配方对诱导组培微鳞茎形成的影 响。结果显示：带1 个叶原基的茎尖，在MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1 的培养基上成苗率高，达76%；采用单株 假茎去顶后，取其基部1.0 cm 假茎茎段，再沿中轴线对半纵切的方式，在MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.10 mg·L^-1 的培养基 上能较好地激活叶腋潜伏芽，增殖倍数达3.22；1 个叶原基包裹的芽原基茎尖脱毒成效最好，达100%；假茎茎粗3 mm 的组 培苗单株，在MS+NAA 0.1 mg·L^-1+ 糖90 g·L^-1、pH 为7.0 的培养基中微鳞茎诱导率最高，达94.8%。茎尖脱毒方式、叶腋 潜伏芽激活切割方式和组培微鳞茎诱导的培养基配方，是嘉定白蒜脱毒与快繁的技术关键。