棕色棉类黄酮3'-羟化酶基因(F3'H)的克隆及色素合成途径中相关基因表达特性研究

为探讨花色苷途径在彩棉色素形成中的作用及彩棉色素形成规律,本研究根据葡萄(Vitis vinifera)的类黄酮3'-羟化酶(flavonoid3'-hydroxylase,F3'H)基因全长cDNA序列blast所得棉花(Gossypium hirsutum)的EST序列(GenBank登录号:DT545210,CO071403和BG447485)设计引物,以开花后16d的新彩棉5号(XC-5)纤维为材料,采用RACE(rapid amplification of cDNA ends)和RT-PCR方法分离得到了2个类黄酮3'-羟化酶基因的全长cDNA序列,长度为1761和1892bp,均含有一个97~1629bp、长度为1533bp的开放阅读框,编码510个氨基酸,将这两个序列命名为GhF3'H-1和GhF3'H-2,分别提交GenBank,登录号为HM598123和HM598124,此2个序列编码区完全相同,仅在3'非翻译区(UTR)存在片段长短的差异。半定量RT-PCR检测花色苷合成途径中查尔酮合成酶(chalcone synathase,CHS)基因、F3'H、类黄酮3',5'-羟化酶(flavon...     

荒漠植物PCR模板3种制备方法的初步研究

采用2×CTAB法、NaOH法及直接PCR扩增法,以准噶尔无叶豆[Eremosparton songoricum(Litv.)Vass.]为例,对沙生植物PCR模板制备方法进行了比较研究.结果表明:2×CTAB法提取的DNA产量及质量较高,PCR扩增谱带稳定、清晰,但方法繁琐,单个样品处理时间长,耗时耗力;NaOH法制备模板DNA简单快速、经济高效,在1～2 h可提取10～20个样品,比常规方法快3～5倍,并可产生稳定、可靠、重复性好的PCR扩增谱带;直接扩增法是一种更加快速、简便、廉价的制备方法,适宜制备大批量的PCR模板.研究结果对其他荒漠植物,尤其是叶片极端退化或珍稀濒危植物的PCR模板制备具有指导意义.     

荒漠拟步甲科昆虫总RNA的有效提取及电泳图谱分析

[目的]获得高质量的总RNA是开展分子生物学研究的重要一步,由于不同生物的机体组成成分有较大差异,需要针对不同类型的物种建立各自有效的RNA提取方法.鞘翅目昆虫富含几丁质的外壳,常规方法难以获得高质量的RNA.[方法]以鞘翅目拟步甲科昆虫小胸鳖甲(Microdera punctipennis)为例,采用TRIzol试剂提取分离总RNA,方法略有改进,并对总RNA的电泳谱带特征进行鉴定.[结果]利用该方法从小胸鳖甲成虫中所获得的总RNA纯度较高完整性好,进一步实验证明提取的总RNA可满足RT-PCR等多种后续实验.琼脂糖凝胶电泳分析表明,其总RNA电泳谱带主要以18S带为主,28S则很弱.[结论]该提取方法对其他荒漠拟步甲科昆虫,尤其是含几丁质外壳的甲虫总RNA提取具有指导作用,小胸鳖甲总RAN的电泳谱带与哺乳动物肿瘤细胞的不同.