棉铃虫磷脂酰乙醇胺结合蛋白的克隆及表达分析

【目的】克隆获得棉铃虫(Helicoverpa armigera)磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine binding protein,PEBP)的c DNA序列,分析Ha PEBP在棉铃虫体内的表达规律,检测2-十三烷酮处理条件下棉铃虫体内Ha PEBP的变化情况,为进一步明确棉铃虫PEBP的功能和选择该基因作为调控棉铃虫种群数量的分子靶标提供依据。【方法】利用RACE技术从棉铃虫6龄幼虫的中肠组织中扩增得到Ha PEBP的c DNA序列,并对其氨基酸序列和蛋白结构进行分析。将Ha PEBP的ORF序列连接至p ET32a载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后检测目的蛋白的表达形式,并通过镍柱的亲和层析纯化融合蛋白。最后通过实时荧光定量PCR检测棉铃虫幼虫不同时期和6龄幼虫不同组织中Ha PEBP的表达规律,以及2-十三烷酮处理棉铃虫6龄幼虫后中肠内Ha PEBP的变化规律。【结果】获得的Ha PEBP c DNA序列长760 bp,其中ORF为588 bp,编码195个氨基酸,蛋白质分子量和等电点分别为21.76 k D和5.93。氨基酸序列分析表明Ha PEBP无信号肽、跨膜结构域和二硫键,是一个由4个α螺旋和9个β折叠片组成的胞质单体蛋白。将BL21(DE3)-p ET32a-Ha PEBP重组菌用1 mmol·L-1的IPTG在37℃条件下诱导4 h,约40 k D的融合蛋白His-Ha PEBP能以可溶的形式存在于重组菌中。按照同样的方法诱导1 L的重组菌,将超声处理后的上清液与Ni-NTA柱结合,进行咪唑缓冲液梯度洗涤,200 mmol·L-1的咪唑洗涤两次后得到约40 k D的单一蛋白,与融合蛋白的大小一致。将此流出液超滤浓缩,获得183.3 ng·μL-1的融合蛋白,能被抗His-Tag的单克隆抗体识别发生免疫反应。Ha PEBP在棉铃虫幼虫的1—6龄期和预蛹期均表达,且6龄幼虫的表达量最高。该基因在6龄幼虫的脂肪体、中肠、头部和体壁中也均有表达,且脂肪体内的表达量最高。不同浓度的2-十三烷酮处理后,棉铃虫6龄幼虫中肠内Ha PEBP的表达量均有所降低;低浓度(2.5和5 mg·g-1)在6 h就能降低Ha PEBP的表达量,其m RNA含量随着时间的延长逐渐增加;而高浓度(10和15 mg·g-1)在12 h才会降低Ha PEBP的表达量,其m RNA含量随着时间的延长先下降后上升。【结论】克隆分析了Ha PEBP,利用大肠杆菌系统表达出可溶的融合蛋白His-Ha PEBP,并通过镍柱-咪唑纯化法得到了高纯度的融合蛋白,时空表达分析显示Ha PEBP在棉铃虫6龄幼虫和脂肪体中表达量最高,2-十三烷酮处理6龄幼虫后中肠内Ha PEBP的表达量显著降低。     

基于文献计量学的昆虫细胞色素P450研究发展态势分析

利用文献计量法和关键词词频法,对1999年至2012年间,国内外在昆虫细胞色素P450研究领域的研究成果进行梳理和研究,结果显示:昆虫细胞色素P450文献数量在此期间呈现出明显的增长趋势,说明昆虫细胞色素P450日益得到学者的广泛关注。关键词词频法说明对模式昆虫果蝇P450的研究依然是热点,而卫生害虫、农业害虫以及经济昆虫P450的研究已逐渐成为新的研究热点;而研究方向上正向昆虫P450调控表达的理论研究及其实践应用拓展。     

苏氏宽漠甲Sternoplax souvorowiana卵的形态和卵壳超微结构

【目的】研究苏氏宽漠甲Sternoplax souvorowiana卵的形态和卵壳超微结构,为分类等提供依据。【方法】首次利用光镜和扫描电镜对苏氏宽漠甲的卵进行了观察和侧量。【结果】苏氏宽漠甲卵长、卵宽数据和卵壳的细微结构,尤其是卵前极的受精孔区、卵壳层数、表面纹饰等特征与其他荒漠昆虫有明显区别。【结论】苏氏宽漠甲卵的形态尺寸和卵壳超微结构等特征可以作为其分类的依据。     

抗冻蛋白基因提高植物耐寒性研究

综述了转抗冻蛋白基因植物的转化体系及研究现状，并提出了目前存在的问题及展望。     

叶绿体型转昆虫抗冻蛋白基因烟草的耐寒性

根据已构建的大豆叶绿体表达载体pJY01，设计特异性引物，将昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149插入此载体中构成叶绿体表达载体pJY01-MpAFP149，利用基因枪轰击法转化烟草，经壮观霉素筛选获得4株叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草株系。PCR和PCR-Southern结果显示外源基因已整合至烟草叶绿体基因组中但同质化水平不高，RT-PCR结果也表明昆虫抗冻蛋白基因已发生了转录。将野生型烟草、叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草及核转化T₁代转抗冻蛋白基因烟草(pCAMBIA1302- MpAFP149)于–1℃低温处理3 d，观察耐寒表型及测定相对电导率。结果表明, 叶绿体型转基因烟草的耐寒表型优于野生型烟草，但与核转化的T₁代转抗冻蛋白基因烟草无显著差异。处理3 d时，叶绿体型转基因烟草和T₁代转抗冻蛋白基因烟草的电导率分别为39.2%和38.2%，而野生型烟草已达73.7%。本实验获得的异质化转叶绿体抗冻蛋白基因烟草与转核基因烟草的耐寒力无差异。     

光滑鳖甲抗冻蛋白基因(AP-AFP060116)表达规律的研究

研究以克隆的光滑鳖甲抗冻蛋白基因(AP-AFP060116,Apafp)为目的基因,采用半定量RT-PCR技术,首次探讨了该基因在不同低温处理下的表达规律。半定量RT-PCR实验结果表明光滑鳖甲成虫经历长时间冷驯化后,体内Apafp基因的表达水平增高。计算半定量RT-PCR产物电泳图像的灰度值,结果显示在低温处理的第5 d,昆虫体内Apafp基因的表达水平与对照组相比差异显著(P<0.05)。快速冷驯化实验结果显示,处理组与对照组昆虫体内Apafp基因的表达水平没有明显的差异。同时使用Southern blot技术证明光滑鳖甲抗冻蛋白基因家族的存在。     

企业级气象与地质灾害预警服务定制技术

在实际生产中,气象和地质灾害预报预警暴露出信息无权威性、信息分散、预报信息无针对性、信息获取和发送人工化等问题。分析了中国石油各企业的预报需求,提出服务定制模式,自主研发了气象与地质灾害预报预警平台。该平台以保障企业安全生产为目标,及时获取权威预报预警信息,经系统自动分析后,通过多种渠道快速发布专业的气象、地质灾害预报信息,实现提前12h乃至更长时间为各级管理人员提供针对本企业的预报预警信息,为企业减灾防灾和辅助生产调度等提供科学依据,从而最大限度地减少因气候变化和地质灾害带来的损失。     

黑龙江省马铃薯产业发展现状

黑龙江省马铃薯产业长期以来在全国都占有重要地位，尤其是种薯生产方面，得益于黑龙江省特殊的地理、气候条件。近年来，我国马铃薯产业受到空前重视，发展迅速，成为第四位主要农作物，在黑龙江主要农作物中马铃薯也排在第四位，在我省农村种植结构调整中发挥重要作用。从黑龙江省马铃薯产业现状分析，马铃薯在我省有广阔的发展空间。     

鸡PPARγ和C/EBPα的蛋白表达及其对肉鸡腹脂含量的影响

利用IPTG诱导含有原核表达质粒pGEX-4T-1/PPARγ和pGEX-4T-1/C/EBPα的大肠杆菌BL21(DE3)菌株,表达GST-PPARγ和GST-C/EBPα融合蛋白,表达产物用Glutathione Sepharose 4B纯化,将纯化后的重组蛋白免疫肉仔鸡,检测其产生抗体情况及其对肉鸡腹脂含量的影响。SDS-PAGE结果显示融合蛋白GST-PPARγ在大肠杆菌胞内主要以包涵体的形式表达,分子量大约80ku;融合蛋白GST-C/EBPα在大肠杆菌胞内主要以可溶性蛋白形式表达,分子量大约62ku。主动免疫肉鸡结果表明PPARγ、C/EBPα及混合组鸡只均产生了较高水平的抗体,且PPARγ组肉鸡腹脂含量显著低于对照组。     

昆虫过冷却点的影响因素概述

昆虫体液可以耐受0℃以下的低温仍不结冰,这种现象称为“过冷却”.当外界温度继续下降到一定温度时,虫体开始结冰,此时的虫体温度即为过冷却点.过冷却点可被用来代表昆虫的耐寒性,因此在昆虫耐寒性研究中常常需要测定过冷却点.有多种因素影响过冷却点,笔者从环境因素与食物、昆虫发育阶段与生物学状态、含水量与生化物质以及冰核物质4个方面综述了昆虫过冷却点的影响因素,这些影响因素相互关联共同发挥作用.研究昆虫的过冷却点对于认识其抗冻耐寒特性与机理、保护益虫、防治害虫都具有重要的意义.