新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合征三联灭活油乳剂疫苗的攻毒保护试验

用新支减三联灭活油乳剂疫苗皮下注射健康鸡，免疫3周后，分别用NDVF48E9株、IBVM41株、EDSVHE02株进行攻毒，检验新支减三联灭活油乳剂疫苗的免疫保护能力。结果显示，免疫组的攻毒保护率为：新城疫100％保护，传染性支气管炎书0％保护，减蛋综合征90％保护；对照组攻毒保护率为：新城疫0％保护，传染性支气管炎2...     

人β2微球蛋白成熟肽基因克隆及其原核表达载体的构建

根据GenBank基因库中人β2微球蛋白(β2m)成熟肽基因序列设计2对引物,使用RT-PCR法从健康人血液中扩增人β2m成熟肽基因,扩增产物进行T-A克隆和测序.结果表明,获得的人β2m成熟肽基因为297 bp,与模板序列的同源性为100%.利用基因重组技术,将β2m成熟肽基因亚克隆入pET-28a(+)载体中,经PCR、酶切和测序鉴定,证实所获重组表达质粒pET-28/Humβ2m中含有目的片段,且连接、构建正确,表明成功构建了重组表达质粒pET-28/Ham β2m.     

鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因的克隆、序列分析及表达载体构建

【目的】克隆鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pET/DuMHC-Ⅰ。【方法】依据GenBank/DDBJ/EMBL基因库中公布的鸭MHC-Ⅰ基因序列设计1对引物,采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织中扩增MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA,T-A克隆到pGEM-T Easy载体中,并进行测序。通过PCR和酶切的方法,将鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因亚克隆入pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET/Du MHC-Ⅰ,并进行PCR、NcoⅠ和NotⅠ双酶切及测序鉴定。【结果】测序结果表明,获得了MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因,其长度为813 bp,编码271个氨基酸。MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因与GenBank中登录的鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因序列的同源性为89.4%~91.7%,氨基酸同源性为78.2%~83.7%;与鸡、鹅、鹌鹑、草鱼、狗、猪、鼠和人的MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽氨基酸序列的同源性分别为64.6%,79.3%,59.4%,41.0%,26.6%,45.0%,12.5%和22.1%,这表明MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因存在着种属多样性,且亲缘关系越近,同源性越高。所获重组表达质粒pET/Du MHC-Ⅰ经PCR、酶切、测序鉴定,证实鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因cDNA已正确克隆入pET-28a(+)表达载体。【结论】成功克隆出鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因,并构建了重组表达质粒pET/Du MHC-Ⅰ。     

感染巴氏杆菌的兔蚓突、圆小囊组织病理学观察

试验应用常规石蜡切片,HE染色,对感染兔多杀性巴氏杆菌的蚓突、圆小囊这两个兔所特有的肠道淋巴组织进行组织病理学观察。结果表明：蚓突的病变主要在黏膜层,黏膜上皮细胞脱落、淋巴细胞增生、固有层毛细血管充血、肠腺内有细胞分化增生;间区内血管充血。圆小囊的病变主要也是在黏膜层,黏膜上皮细胞脱落、淋巴细胞增生、固有层毛细血管充血严重、肠腺大量增生、肠腺内有细胞分化增生;间区内血管充血。这些病变对研究兔巴氏杆菌病有重要意义。     

新城疫病毒—减蛋综合征病毒抗原液与抗原浓缩液的HA效价关系

采用Millipore CogentTM超滤系统对新城疫病毒抗原液和减蛋综合征病毒抗原液进行浓缩试验。结果显示,新城疫病毒浓缩抗原液的HA效价按浓缩比率相应上升,而超滤液的HA效价为阴性;减蛋综合征病毒浓缩病毒液的HA效价均比未浓缩病毒液相应增高,而超滤液的HA效价均为零。     

白来航鸡MHC-I重链基因克隆与序列分析

参照GenBank发表的鸡MHC-Ⅰ重链(BF2)基因序列,设计并合成1对引物,无菌采取纯系来航SPF鸡抗凝静脉血,直接提取总RNA,采用RT-PCR技术,PCR扩增BF2基因,并进行克隆和序列测定。测序结果表明,获得了来航鸡BF2基因,其大小为1 035 bp,包含一个完整阅读框,共编码345个氨基酸。与GenBank上鸡BF2基因序列进行比较,其核苷酸同源性在93.0%~97.6%之间,氨基酸同源性在83.2%~97.1%之间。来航鸡与人和其他种动物的MHC-Ⅰ重链基因核苷酸同源性在12.9%~83.6%之间。     

鸳鸯鸭MHC-Ⅰ α链基因的克隆与分子进化分析

根据GenBank中登录（登录号：AB115244）的鸭MHC-Iα链序列设计并合成1对引物,采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织中克隆出鸳鸯鸭MHC-Iα链基因,并进行T-A克隆和序列测定。结果表明,所获得的鸳鸯鸭MHC-Iα链基因长909 bp,编码303个氨基酸的多肽,含一个完整的鸳鸯鸭MHC-Iα链胞外区成熟肽基因。序列比较发现,鸳鸯鸭MHC-Iα链基因与GenBank登录的其它品种的鸭MHC-Iα链核苷酸同源性为89.4%～91.0%,与人和其他动物的MHC-Iα链胞外区成熟肽基因的氨基酸同源性为11.1%～79.3%,表明MHC-Iα链胞外区成熟肽基因存在着种的多样性,且亲缘关系越近,同源性越高。鸳鸯鸭MHC-Iα链胞外区成熟肽基因的成功克隆为进一步研究鸭MHC-I基因表达、生物学活性和应用奠定基础。     

鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因的克隆与分子进化分析

根据GenBank中登录(登录号:AB115244)的鸭MHC-Ⅰα链序列设计并合成1对引物,采用RT-PCR技术从鸳鸯鸭脾脏组织中克隆出鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因,并进行T-A克隆和序列测定.结果表明,所获得的鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基凶长909bp,编码303个氨基酸的多肽,含一个完整的鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因.序列比较发现.鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链基因与GenBank登录的其它品种的鸭MHC-Ⅰα链核苷酸同源性为89.4%～91.0%,与人和其他动物的MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因的氨基酸同源性为11.1%～79.3%,表明MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因存在着种的多样性,且亲缘关系越近,同源性越高.鸳鸯鸭MHC-Ⅰα链胞外区成熟肽基因的成功克隆为进一步研究鸭MHC-Ⅰ基因表达、生物学活性和应用奠定基础.     

鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株的血清交叉血凝抑制试验

本试验用系统血凝抑制(HI)交叉试验,对鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株进行抗体区分。结果表明,M41株和Conn株标准抗原与M41阳性血清HI抗体效价在免疫后21 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2;免疫后28 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2;免疫后35 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2。M41株和Conn株标准抗原与Conn阳性血清HI抗体效价在免疫后21 d分别为4 log2、8 log2,相差4;免疫后28 d分别为4 log2、8 log2,相差4 log2;免疫后35 d分别为4 log2、9 log2,相差5 log2。因此,用血清HI交叉试验能够将抗M41株和Conn株抗体区分开来。