SPF蛋鸡人工感染鸡杆菌的病理形态学观察

采用鸡杆菌自然病例分离纯化的鸡杆菌人工感染开产前(105日龄)和开产后(163日龄)的SPF蛋鸡,运用组织学的方法对鸡杆菌自然病例和试验病例进行比较病理学观察。结果表明,自然病例和试验病例均可引起蛋鸡产蛋高峰推迟,产蛋量下降,且多产畸形蛋;病变主要在呼吸道和生殖道,主要表现为呼吸道和生殖道黏膜层严重充血、水肿、浆液性及炎性渗出等反应。但是试验病例未出现自然病例中常见的腹膜炎和输卵管炎症状。输卵管的病变主要在膨大部和子宫部,这种特征性病变可作为该病病理诊断的重要指征之一。这表明鸡杆菌单因子感染可引起SPF开产蛋鸡生产性能明显降低以及呼吸道和生殖道的病理变化。     

河南不同临床型鸡支气管炎病毒流行毒株的分离鉴定及其S1基因变异分析

经鸡胚接种、RT-PCR、气管环培养等方法从河南地区发病鸡群中分离、鉴定出2株鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitic virus,IBV),分别命名为HN/HL株和HN/SG株。应用RT-PCR方法对尿囊液中HN/HL株和HN/SG株以及本室保存的H120株的S1基因全序列进行了扩增,并对其进行克隆测序。结果显示,3株IBV目的片段全长分别为1828、1825、1819bp,3个序列相互之间存在多位点的变异,同时存在插入和缺失现象;对推导的氨基酸序列进行分析表明,HN/HL株S蛋白裂解识别位点序列为HRRRR,而HN/SG株和H120株S蛋白裂解识别位点同为RRFRR。将测序结果同GenBank上登录的其他IBVS1基因相比较,发现本试验的HN/HL株与疫苗H120株的同源性仅为78.1%,HN/SG株与H120株的同源性仅为81.1%,而HN/HL株与HN/SG株的同源性为87.9%。同源性及遗传进化分析还发现,已报道的腺胃型ZJ971株和QX株在分子水平上应该分别属于呼吸型和肾型IBV。     

鸡卡氏杆菌的分子鉴定及其16S rRNA基因序列分析(英文)

Two strains of Gallibacterium, isolated from one laying hen flock in Zhengzhou City of Henan Province, were identified by the morphological observation, genus-specific PCR, and analysis of 16S rRNA gene, which was used to generate the phylogenetic tree, with the 21 members of the 12 genera belonging to Pasteurellaceae to analyze the homology. Two strains were named Yu-ZZ-HL-I-SLG and Yu-ZZ-HL-II-GZ. The comparative result of the 16S rDNA sequence shows that the 2 isolated strains are identical in sequence; the highest identity (99.9%) was observed between the isolated strain and one of the strains of Gallibacterium anatis (AF228002), the homologies between the isolated strain and 3 strains of gallibacterium accessed in NCBI (AF228016, Gallibacterium genomosp.1, AF228017, Gallibacterium genomosp.2, AF228018, Gallibacterium genomosp.1) were above 97.1%, higher than that of the isolated strain and the other strains of the other 11 genera which were between 90.7%-93.2%. It can be seen from the phylogenetic tree that the 2 isolated strains and the other 4 strain of gallibacterium fell into the same branch, furthermore the 2 isolated strains and the strain of Gallibacterium anatis locate in an internal branch, indicating that the 2 isolated strains belong to Gallibacterium anatis.     

河南省非洲猪瘟感染情况筛查

目的：对河南省猪瘟（CSF）流行区的猪群进行非洲猪瘟（ASF）感染的排查;方法：利用猪瘟抗原捕获ELISA试剂盒对27个猪场的猪瘟疑似病料进行CSFV鉴定,并用区别猪瘟强弱毒的RT-PCR检测方法鉴定猪瘟疑似病料。与此同时针对ASFV VP73蛋白基因设计一对引物利用PCR方法对ASFV进行排查;结果：河南省CSFV流行区没有ASFV的感染;且RT-PCR对CSFV的检出率高于ELISA ,两者差异显著。结果表明,尽管目前中国作为俄罗斯的邻国存在ASFV的威胁,但中国河南仍没有ASFV感染。     

蛋鸡群卡氏杆菌感染情况的初步研究

首次报道了我国鸡场中鸭卡氏杆菌的感染情况。利用流行病学、临床观察、病理剖检、微生物学、分子生物学及血清学等方法研究表明,所调查的12个鸡场均有卡氏杆菌感染,平均抗体阳性率为48.4%,发病期为26~101周龄,典型症状是产蛋下降,病鸡腹部下垂、着地,行走如企鹅状,触之有波动感。剖检变化主要为卵黄性腹膜炎、输卵管炎或输卵管囊肿。从病鸡的卵巢、输卵管、肝脏等分离的细菌经鉴定为鸭卡氏杆菌,药敏试验显示,所有菌株仅对头孢类、阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考等药物高度敏感,而对其余大多数抗生素均不敏感。同时也分离到大肠杆菌和沙门氏菌。结果提示:我国鸡群中的卡氏杆菌感染可能已相当普遍,有必要对其影响做出客观评价。     

鸡马立克病疫苗株CVI988/Rispens meq基因编辑及缺失毒株的构建与鉴定

meq是鸡马立克病病毒（MDV）最重要的致瘤基因，在马立克病（MD）肿瘤发生中发挥关键作用。同时，它在疫苗株和强毒株之间具有明显的序列差异性。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，以MDV疫苗株CVI988/Rispens meq基因为靶点，设计合成gRNA，克隆构建pX459-gRNA质粒，转染CEF并感染CVI988/Rispens，然后对meq基因编辑的病毒噬斑进行克隆纯化，经过PCR扩增、测序分析及IFA鉴定，成功构建1株meq基因编辑的缺失毒株CVI988Δmeq-C7，为后续筛选和鉴定抗MD疫苗株MEQ单抗及鉴别诊断研究奠定了基础。     

H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白S145N变异株致病性及抗原特性

为确定近年来H9N2亚型禽流感病毒(AIV) HA蛋白S145N点突变对病毒毒力变化和抗原性变异的影响,笔者对从全国不同地区分离的12株H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株和HP疫苗参考株进行了半数鸡胚感染量(EID50)、半数鸡胚致死量(ELD50)、平均鸡胚致死时间(MDT)、雏鸡脑内致病指数(ICPI)、鸡静脉致病指数(IVPI)和8周龄SPF鸡感染排毒试验,并与抗H9N2亚型AIV HP参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制(HI)和中和反应特性进行测定.结果发现,H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株毒力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长.单抗2A4和F6不能抑制H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞.研究结果表明,H9N2亚型AIV呈现变异趋势,有毒力增强和抗原性变异毒株出现.S145为H9N2亚型AIV HA蛋白的1个抗原位点,是血凝抑制抗体结合的位点,但有该位点漂变导致抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用.这提示该病的防控面临着新的挑战.     

豫北地区猪瘟流行病学调查及分析

为了掌握豫北地区猪瘟的免疫和野毒感染状况,更好地为开展相应的免疫预防工作提供依据,试验分别应用猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒以及RT-PCR方法分别对豫北6地市送检的血清及病料进行了猪瘟抗体、猪瘟抗原的检测,结果显示,所检测的血清总阳性率为74.96%,提示该地区猪瘟疫苗免疫效果较差;猪瘟抗原阳性率为30.09%,说明目前豫北地区的猪场普遍存在猪瘟野毒感染,RT-PCR的结果有力地佐证了这一点。     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

为对猪瘟病毒(CSFV)建立更加有效的临床检测方法.用纯化的猪瘟兔化弱毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/O骨髓瘤细胞融合.经ELISA方法筛选和3次亚克隆,最终获得了5株能稳定传代并分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为:C7,C9,G9,G10和4E8,其分泌的单克隆抗体(McAb)为IgG1(G9,4E8)和IgG2a(C7.C9,G10)亚类.经鉴定,5株单抗细胞培养上清效价为1:1 600～1:3200,腹水效价为1:51200～1:102400.交叉试验及特异性抗原阻断试验表明,所制备的McAb与其他抗原无交叉反应性,均完全针对猪瘟病毒(CSFV)抗原决定簇,具有高度特异性.稳定性试验表明,制备的杂交瘤细胞株经连续传代25代和经3次冻存复苏后,仍能稳定分泌特异性抗体.抗CSFV McAb的成功制备,为进一步研究CSFV的生物学特性及其快速诊断方法的建立奠定了基础.     

鸡杆菌感染研究进展

鸡杆菌(Gallibacterium)是由Christensen等[1]于2003年在巴氏杆菌科中重新组合的一个属,包括原来的鸭巴氏杆菌、输卵管炎放线杆菌和溶血性巴氏杆菌.鸡杆菌是健康鸡体的1种常在菌,但大量研究表明,其与蛋鸡输卵管炎和输卵管囊肿等关系密切,并具有条件致病性[2-4],人工感染可引起鸡的输卵管炎、腹膜炎和败血症等[2,5].