AA肉鸡补体C3d基因eDNA的克隆及鉴定

为获得鸡C3d基因的eDNA,从鸡肝细胞提取总RNA,通过RT—PCR扩增出C3d基因的eDNA,脂糖凝胶电泳鉴定后直接克隆到pMD18-T载体,构建C3d—pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。通过琼脂糖凝胶电泳证明有1．0kb左右的PCR扩增片段,序列测定表明为C3d基因的cDNA。通过RT—PCR法从鸡肝细胞RNA中成功地扩增到鸡C3d基因的cDNA,为进一步构建基于C3d基因内佐剂的疫苗奠定了基础。     

三种常见鸡胚胎性疫病病原人工共感染的试验检测

近几年,家禽发生多种病原共感染的现象非常普遍,多种病原共感染常常引起非典型的病变,并进而导致重大的经济损失.细菌性胚胎性疫病病原种类较多,且大多是条件性致病菌,由不同的细菌多重感染诱发的疾病越来越常见,鸡毒性支原体(Mycoplasma gallisepricum, MG)、鸡沙门氏菌(Salmonella Avium)、禽波氏杆菌(Bordetella Avium)为三种常见鸡胚胎细菌性疫病的病原.因此,本研究针对这三种常见鸡胚胎细菌性疫病的病原进行了共感染的分析与检测.目的在于研究这三种微生物的共感染的发病情况、病理变化、病原微生物的分布及其消长规律,以及与单独感染的差别.通过本研究为鸡场中此类疾病提供理论依据.方法:分别对1日龄SPF雏鸡(10只/组)和11日龄SPF鸡胚(10枚/组)进行3种病原、2种病原、1种病原的感染.随时进行生长情况的观察,对死亡雏鸡、鸡胚进行剖检.结果,无论通过肉眼观察和还是病理学观察,3种病原共感染的雏鸡和鸡胚病变最严重,出现死亡时间最早,并且死亡率最高,两种病原共感染次之,但是多种病原共感染情况都比一种病原单独感染严重.为了进一步研究发生共感染之后,病原的分布及其随时间的消长规律,分别对剖检雏鸡与鸡胚取样,进行IFA与PCR的检测,结果表明,支原体的侵袭,气囊感染最严重,肾脏次之,其后是肝脏.波氏杆菌与沙门氏菌在肝脏和法氏囊感染最严重,肾脏和肺脏次之,另外,对于波氏杆菌感染鸡,从皮下也有大量病原菌存在.雏鸡在感染24 h内各病原含量呈快速增长趋势,36 h之后达到高峰,然后下降,在三种病原共感染的雏鸡的组织中,每种病原的含量与单独感染、双重感染的含量相差不大.鸡胚在感染24 h内各病原含量呈增长趋势,24 h之后下降,多种病原共感染的鸡胚分离得到的单独一种病原的含量略低于单独感染的鸡胚.本研究通过较为系统的分析与检测,为进一步认识与防治多重感染在禽类胚胎细菌性疫病的发生提供了依据,对控制多种微生物引起的胚胎细菌性疫病所造成的经济损失具有一定意义.     

传染性法氏囊病超强病毒株VP2基因原核表达及其免疫原性检测

为检测传染性法氏囊病超强毒株(vvIBDV)重组VP2蛋白的免疫原性,本研究利用RT-PCR方法扩增vvIBDV的结构蛋白VP2基因,并将其克隆到表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-VP2。将其转化受体菌E.coli BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和western blot分析表明,表达的重组蛋白约69 ku,并以包涵体形式存在。表达的重组蛋白经纯化后,免疫6周龄BALB/c小鼠制备免疫血清,ELISA分析表明制备的血清效价在1∶5 120以上,表明vvIBDV VP2具有良好的免疫原性,为建立vvIBDV的ELISA检测方法提供了试验依据。     

降低父母代肉种鸡双黄蛋率的光照、喂料方法探索

<正>ROSS308父母代肉种鸡商品代具有高成活率、低料肉比、肉质鲜美等特点,因此备受养殖者青睐。但是由于育雏、育成及加光加料模式的不当,经常造成种蛋双黄率过高,高的可达7%-8%。高双黄率降低了种蛋的利用率,同时种鸡因脱肛引起的死淘也会增加,大大降低了饲养效益。本文就如何通过改进加光、加料模式来降低双黄率进行了探讨。     

支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立和应用

根据支气管败血波氏杆菌ptxA基因设计1对引物,扩增特异的872 bp核酸片段,建立了应用PCR检测支气管败血波氏杆菌的方法.特异性试验结果表明,3株支气管败血波氏杆菌参考菌株均能扩增出872 bp特异性的核酸片段,兔源性的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄菌的扩增结果均为阴性.敏感性试验结果表明,PCR的最低检出限量为210个支气管败血波氏杆菌.利用建立的PCR检测方法对22株从山东省泰安地区某兔场采集的疑似兔支气管败血波氏杆菌病病兔鼻黏液棉拭子进行检测,结果19株为阳性.并同时进行普通血清学方法和细菌学方法,对检测结果进行了比较,结果显示,PCR方法阳性检出率高于其他检测方法.     

AA肉鸡补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定

为获得鸡C3d基因的cDNA,从鸡肝细胞提取总RNA,通过RT-PCR扩增出C3d基因的cDNA,脂糖凝胶电泳鉴定后直接克隆到pMD18-T载体,构建C3d-pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。通过琼脂糖凝胶电泳证明有1.0 kb左右的PCR扩增片段,序列测定表明为C3d基因的cDNA。通过RT-PCR法从鸡肝细胞RNA中成功地扩增到鸡C3d基因的cDNA,为进一步构建基于C3d基因内佐剂的疫苗奠定了基础。     

种鸭不明原因产蛋下降的病原分离与免疫防控

2016年,山东多地樱桃谷父母代种鸭发生不明原因产蛋下降,造成了很大的经济损失。通过采集病料进行检测,分离到3株鸭肝炎Ⅰ型病毒。通过动物回归试验证明了该病毒对种鸭的致病性。用此分离株制备的灭活疫苗免疫35周龄种鸭,表明灭活疫苗和市售的鸭肝炎活疫苗联合免疫能够很好地抵抗鸭肝炎Ⅰ型病毒的攻击。