抗菌肽天蚕素B基因的克隆及其在山羊乳腺中的暂态表达

根据已发表的天蚕素B的cDNA序列化学合成4务引物,以重叠延伸PCR的方法合成了真核细胞偏爱密码子编码的抗菌肽天蚕素B基因,将其克隆于pMD18-T栽体,DNA序列分析证实合成的抗菌肽基因的碱基序列与设计的序列完全一致.利用山羊-β酪蛋白基因5'侧翼调控序列和真核基因表达栽体plRES1-neo,构建抗菌肽天蚕素B的乳腺组织特异性表达载体pbCP-cpin,将该载体溶于生理盐水,注入处于泌乳期的成年母山羊乳腺组织进行暂时表达.通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验确定了抗菌肽天蚕素B基因在山羊乳腺中的表达和抗菌活性.本试验建立了抗菌肽天蚕素B的乳腺瞬时表达系统,为验证各调控元件以及抗菌肽基因在转基因动物乳汁中分泌表达的有效性和可行性提供了一个快速检测系统.     

发酵床养猪垫料饲喂育肥牛效果观察

利用发酵床进行生态养猪，经过一个饲养周期，生猪出栏后发酵床垫料和粪便在微生物的作用下降解，外形松软，无霉变，醇香味浓厚，质地优良，无发霉变质现象。笔者根据反刍动物消化特点，将发酵床垫料利用转化为牛的粗饲料，进行育肥牛喂饲试验，收到良好的效果。这为反刍动物饲养开辟了新的饲料资源，也为生态循环经济型养殖提供参考依据。     

猎豹与虎猫杯状病毒的分离及其超变区基因比较研究

用F81细胞从上海某动物园患口腔溃疡的猎豹和虎的唾液病料中分离获得两株杯状病毒，经形态学、理化学、生物学鉴定和病毒核酸超变区基因RT-PCR扩增与序列测定证明两株病毒均为猫杯状病毒(FCV)，分别命名为FCV/cheetah/Shanghai/02/2002与FCV／tiger/Shanghai／03/2002。人工感染猫可引起体温升高，口腔溃疡，食欲下降等症状。两株病毒的超变区序列520bp长片段问的同源性为99.2％，与国内桂林虎分离株(TFCV9710)的同源性为74．0％，与国外分离株的总体同源性为58．1％，说明不同宿主或同种不同个体间杯状病毒分离株超变区核酸差异十分显著，符合猫杯状病毒的分子生物学特征。     

猪伪狂犬病病毒LA株的分离鉴定

从辽宁省某猪场大批死亡的新生仔猪脑及内脏中分离到多株病毒 ,通过初步验证后选择其中一代表毒株进行了鉴定。该病毒株在PK -1 5细胞上连续传 1 2代均出现典型的细胞病变 ,用适应PK -1 5细胞的病毒接种Vero细胞、猪肾传代细胞IBRS -2及SPF鸡胚成纤维细胞均出现典型的细胞病变。在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子。该病毒对氯仿、乙醚敏感 ,在pH5 0～ 9 0下稳定 ,5 6℃ 3 0分钟即可灭活该病毒。该病毒能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和。取处理后的病料上清液和传代病毒接种家兔均出现典型的伪狂犬病症状。用所分离病毒提取的DNA及培养病毒液经简单的预处理后作为模板 ,应用特异性引物进行PCR能扩增出伪狂犬病病毒 1 2 40bp的gD基因的特异性片段。结果表明 ,所分离病毒为伪狂犬病病毒 ,并将该毒株命名为猪伪狂犬病病毒LA株。     

养殖欧洲鳗鲡"狂游病"外周血细胞的病理变化

近年来 ,在欧洲鳗鲡 (Ａｎｇｕｉｌｌａａｎｇｕｉｌｌａ)的养殖过程中常发生“狂游病”。发病前 ,出现食欲极为旺盛 ,异常抢食现象。数日后离群、不摄食、旋转式游动、侧游或在水面上呈挣扎状急游 ,数秒后沉入水中 ,再上浮挣扎状游动 ,往复进行。 2～ 3天后病鳗出现呼吸困难 ,对外界剌激反应迟钝 ,继而随水流集于排污口。死亡数急剧增加。流行季节为 5月 - 1 0月份 ,7月 - 8月份为发病高峰 ,死亡率达 90 %以上。当年欧洲鳗鲡 ( 1 0 0～ 2 0 0ｇ)和 2龄欧洲鳗鲡 ( 4 0 0ｇ以上 )均易发病死亡 ,从开始发病到死亡一般只需 2周左右 ,目前尚无良…     

养殖欧洲鳗鲡"狂游病"外周血细胞的病理变化

近年来 ,在欧洲鳗鲡 (Ａｎｇｕｉｌｌａａｎｇｕｉｌｌａ)的养殖过程中常发生“狂游病”。发病前 ,出现食欲极为旺盛 ,异常抢食现象。数日后离群、不摄食、旋转式游动、侧游或在水面上呈挣扎状急游 ,数秒后沉入水中 ,再上浮挣扎状游动 ,往复进行。 2～ 3天后病鳗出现呼吸困难 ,对外界剌激反应迟钝 ,继而随水流集于排污口。死亡数急剧增加。流行季节为 5月 - 1 0月份 ,7月 - 8月份为发病高峰 ,死亡率达 90 %以上。当年欧洲鳗鲡 ( 1 0 0～ 2 0 0ｇ)和 2龄欧洲鳗鲡 ( 4 0 0ｇ以上 )均易发病死亡 ,从开始发病到死亡一般只需 2周左右 ,目前尚无良…     

hiTAIL-PCR技术鉴定转基因猪整合位点的研究

采用高效热不对称交互式PCR(hiTAIL-PCR)的方法,取转基因克隆猪血液,提取基因组作为模板,扩增目的片段,将扩增获得的特异性产物,连接到PGEM-T载体上,送测序公司测序.测序结果与载体序列经比对后,获得侧翼序列.将获得的侧翼序列提交GenBank与猪的基因组数据库比对确定了在基因组上的位置.结果表明目标序列整合到猪的15号染色体的基因组克隆(nw_00188566P4)中.该方法可以有效、快捷的鉴定外源基因在基因组中的整合的具体位置,具有良好的应用前景.     

应用中草药添加剂防治鹅球虫病效果观察

为避免机体药物残留和有效防治鹅球虫病,试验应用具有清热燥湿、泻火解毒、杀菌灭虫的苦参、仙鹤草、白头翁、贯众、青蒿、大蒜等药物组成的中草药饲料添加剂为试验组,以球痢灵为对照组,以不添加任何药物为空白组,进行防治鹅球虫病试验。应用中草药添加剂,药效较快,无毒、无副作用,机体内不残留、不复发,治疗鹅球虫病效果较为理想,为畜禽广泛应用中草药添加剂提供依据。     

高效抗猪瘟病毒shRNA的筛选

为降低RNAi技术的毒副作用，筛选高效抑制猪瘟病毒复制的shRNA序列，根据有关报道构建了荧光报告系统shRNA筛选平台。该平台以9种抑制效率分别为强、中、弱的shRNA筛选载体作为参照，结合荧光报告系统进一步量化shRNA的抑制效率。根据2种已知体外有效抑制猪瘟病毒复制的siRNA-N2、siRNA-NSSB，分别设计得到shRNA-N2、shRNA-NS5B表达栽体，继而采用高效、高灵敏度的shRNA筛选平台对这2种shRNA进行了检测，结果显示单拷贝情况下，shRNA-N2抑制靶序列效率较强，shRNA-NSSB抑制效率弱。本试验通过新策略大大提高了shRNA干扰效率检测的灵敏度，为采用shRNA转基因克隆动物进行抗病育种的研究提供了保障。     

新生长白仔猪尾尖成纤维细胞的分离培养及其对猪瘟病毒的易感性分析

以出生2日龄的正常长白仔猪尾尖组织为材料,通过组织消化法培养获得原代尾尖成纤维细胞.并通过间接免疫荧光法,梯度10倍倍比稀释猪瘟病毒石门株(105.2 TCID50/mL)感染在猪尾尖成纤维细胞,确定尾尖成纤维细胞最佳病毒感染滴度.结果显示,运用组织块消化法能够获得生长状态的原代猪尾尖成纤维细胞,并且细胞对10-3稀释倍数的猪瘟病毒石门株具有适中的感染力.