多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌

猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌.笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一PCR条件进行系统优化后建立5重PCR方法.该多重PCR方法能对同一样品中5种病原菌的DNA模板进行扩增,且在5种病原菌之间没有交叉反应;对大肠杆菌等其它6种常见猪细菌性病原的榆测结果均为阴性;对5种病原菌DNA模板检出的最小最均低于160 Pg,且能从攻毒小鼠(App、Hps、Bb和T+Pm)肺脏组织8 h增菌的培养物中快速检测出相应的病原菌.对中国华中地区269份临床样本的检测结果表明,5种呼吸道病原菌在华中地区猪群中普遍存在,且混合感染情况十分严重.这些试验结果表明该多重PCR方法可用于猪呼吸道病原菌App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的单一或混合感染的鉴别诊断及病原流行病学调查.     

伪狂犬病毒中和抗体与gB-ELISA抗体阻断率之间的相关性

为了测定伪狂犬病毒中和抗体与gB抗体之间的相关性,本试验用216份伪狂犬病毒中和抗体阳性血清,对每一份样本作4种不同的稀释(1:1、1:20、1:40、1:80),用Idexx公司的gB-ELISA试剂盒检测.试验结果表明:216份中和抗体阳性血清样品中,有7份gB抗体阴性,阳性检出率为97.8%(209/216);随着中和抗体效价的增高gB-ELISA OD650值降低;gB抗体阻断率随中和抗体效价的增高而增加;对同一份血清样本作1:1、1:20、1:40、1:80稀释,测定结果发现,随着稀释度的增加,gB抗体阻断率逐渐降低,而gB-ELISA OD650值逐渐升高.     

猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT-PCR检测方法的建立

根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp、430 bp和1 015 bp目的片段.以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR.CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性.以β-actin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%.同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒.结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测.     

美国高等职业教育办学模式的借鉴研究

我国的职业教育发展已经迈入新的历史阶段,文章从美国高等职业教育现状出发,提出了美国职业教育办学模式可供我国高等职业教育借鉴的经验,对我国高等职业教育发展具有一定的启示作用。     

黑龙江省公路交通应急保障体系初探

针对黑龙江省公路交通突发事件，结合应急工作各环节的特点，通过对公路交通突发事件的事前预防、事中救援、事后处理等相关内容的分析，确定黑龙江省公路交通应急保障体系的研究范畴，初步对黑龙江省公路交通应急保障体系进行研究。