臭氧对冻虾仁微生物的控制及在生产应用的研究

采用臭氧消毒对冻虾仁中的微生物进行控制，冻虾仁总菌数大大减少，同时有效地抑制了冻虾仁中常见的致病菌的发生率，且感官特性无显著变化。     

对虾病毒 DNA／RNA 的实时荧光定量RT PCR 同步检测方法研究

为建立同步检测对虾DNA/RNA病毒的实时荧光定量反转录PCR（RTPCR）方法,提高检验检疫工作效率,探索了一种新的实时荧光定量PCR扩增反应程序。结果显示,应用优化的实时荧光定量RTPCR检测4种对虾病毒（白斑综合症病毒、传染性皮下及造血器官坏死病毒,桃拉综合征病毒、黄头病毒）DNA/RNA,扩增曲线形态典型,扩增效率理想（E值分别为1.06、1.07、0.92、0.92）,标准曲线线性良好（r＝1）,重复性一致（标准差0.05～0.46,变异系数0.26％～1.62％）,灵敏度高,且与实时荧光定量PCR相比差异不显著（平均Ct值误差0.04～0.40,t值0.53～2.50,P＞0.05）,检测时间约1h。优化的荧光定量RTPCR可以用于4种对虾病毒DNA/RNA的快速定量检测。     

培养液组胺的检测及鲣鱼产组胺菌的生物活性评价

通过直接将培养液中的组胺经丹酰氯衍生化生成稳定的物质,以1,7-二氨基庚烷为内标,建立高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-VWD）方法检测培养液中的组胺;并研究了温度和pH对产组胺菌生长和组胺产生的影响。结果表明,培养液中组胺的检测方法定量限为0.5μg/mL,回收率在100%～107%,满足方法培养液中组胺的检测。经分离得到的2株产组胺菌分别记为J2和J4,2株菌在添加L-组氨酸的胰酶大豆肉汤里均能够产生组胺;菌株J2和J4最适生长温度均为30℃,最适pH分别为7和6,菌株J2和J4产组胺的最适温度分别为25℃和30℃,最适pH均为5,在适宜的实验条件下组胺产生量最大值为12.47 mg/L。     

微生物能力验证样品制备工艺及水产品企业水平测试结果评价

为了提高舟山市水产品企业实验室微生物检测能力,保证企业自检结果准确可靠,根据舟山市进出口检验检疫工作的特点,选取了水产品中3个常规的微生物检测项目,即菌落总数、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌检测,采用了真空冷冻干燥技术制备一系列微生物能力验证样品,对舟山市88家水产品企业的实验室进行微生物能力验证。结果表明采用本工艺制备的能力验证样品具有稳定性好、贮存方便、保存期长等优点。从水产品企业微生物水平测试结果来看,菌落总数项目的满意率为81．8％;副溶血弧菌检测的正确率为93．8％,而金黄色葡萄球菌检测的正确率为82．1％。检测结果存在偏差的主要原因是检测中未使用标准菌株进行参照、试剂在使用前无进行质量核查、对某些生化反应判断失误等。     

离子色谱法测定水产品中亚硫酸盐的含量

采用阴离子色谱-抑制电导检测器测定虾仁等水产品中的亚硫酸盐（二氧化硫）的残留量,样品在碱性条件下经甲醛提取,超滤杯纯化,以KOH溶液为淋洗系统,抑制电流125mA时检测。线性范围为0．1—40mg／kg,相关系数为0．9986,平均回收率范围为80％～98％。该方法检出限（SIN=3）为0．1mg／kg,定量限为4．5mg／kg。本方法快捷、简单、准确,适用于出121水产品中亚硫酸盐的测定。     

水产品中的副溶血弧菌和霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立

针对副溶血弧菌的tlh基因和霍乱弧菌的vcc基因,分别设计特异性引物与TaqMan探针,建立检测水产品中2种细菌的双重荧光定量PCR体系,并进行了特异性与敏感性试验。结果表明,在相同反应条件下,副溶血弧菌和霍乱弧菌得到了特异性扩增,而与其共存于水产品中的其他细菌均未见扩增。将不同比例的DNA混合后检测发现,2种荧光信号的收集不存在相互干扰。副溶血弧菌FJ14和霍乱弧菌H4的敏感性试验结果表明,该体系的最低DNA检测量分别为0.25 pg0、.32 pg,人工染菌样品的最低检测限分别为34 cfu/mL和153 cfu/mL。与传统检测方法相比,该双重荧光定量PCR方法检测水产品中的副溶血弧菌和霍乱弧菌快速准确,结果直观。     

沙门菌19个毒力岛标志性基因的PCR检测

建立沙门菌19个毒力岛标志性基因检测方法,了解沙门菌中毒力岛的分布情况。通过比对验证挑选出45个毒力基因作为19个毒力岛标志性基因,建立PCR检测方法,并对伤寒、肠炎、鼠伤寒及贝坎道夫沙门菌进行分布情况研究。19个毒力岛上45个标志性基因分别在伤寒、肠炎、鼠伤寒及贝坎道夫沙门菌得到验证,PCR扩增产物与预期扩增产物一致,电泳条带典型,无非特异扩增条带及杂带出现。45个标志性基因在伤寒、肠炎、鼠伤寒及贝坎道夫沙门菌检出率分别为75.56%、75.56%、66.67%和42.22%。本研究建立的45个毒力岛标志性基因检测方法具有结果准确、简单快速、费用低廉等优点,适用于沙门菌毒力岛研究及不同来源的沙门菌致病性风险评估。     

海产品中霍乱弧菌实时浊度LAMP 检测方法的建立

为建立一种快速、敏感、特异、有效的检测霍乱弧菌方法,以有效预防及控制霍乱弧菌感染,针对霍乱弧菌 ctxA 基因的保守区域设计引物,应用实时浊度仪进行环介导等温扩增（LAMP）,研究其特异性与灵敏性,并利用该体系检测海产品中的霍乱弧菌。结果显示,含 ctxA 基因的霍乱弧菌可得到特异性扩增,而其他与霍乱弧菌（含 ctxA 基因）共存于海产品中的7种细菌均未得到扩增,DNA 检测下限为81 fg/μL。用建立的实时浊度 LAMP 检测方法对150份海产品进行检测,检出含霍乱弧菌的海产品2份,与荧光定量 PCR 结果一致。表明建立的 LAMP 检测方法可用于海产品中霍乱弧菌的检测。