北柴胡转录因子BcAP2-13的原核表达 和多克隆抗体制备

利用带有促溶标签SUMO和纯化标签6×His的原核表达载体,构建了调控北柴胡皂苷生物合成的转录因子基因BcAP2-13的原核表达载体p13-SUMO-His6。载体热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导培养,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,28℃和37℃不同温度诱导条件下均得到了融合蛋白13-SUMO-His 6。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白为抗原,免疫成年兔4次以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明,所得抗体效价较高。提取北柴胡毛状根及BcAP2-13超表达毛状根的总蛋白,免疫印迹检测结果表明,在2种毛状根蛋白样品中均能检测到与预计13-SUMO-His6蛋白分子量大小一致的条带,BcAP2-13过表达毛状根总蛋白样品的条带强于普通毛状根总蛋白样品的条带,与预期一致。成功制备了北柴胡BcAP2-13的多克隆抗体,为进一步研究北柴胡转录因子BcAP2-13的确切作用位点和调控机制奠定了基础。     

3种柴胡染色体数目测定及基因组大小估测

镜检北柴胡、狭叶柴胡、三岛柴胡染色体数目,利用流式细胞技术测定基因组大小,为柴胡基因组测序奠定基础。采用常规压片及显微镜方法观测柴胡体细胞染色体数目,以柴胡嫩叶为材料,采用LB01解离液和碘化丙啶荧光染料,利用基因组大小已知的番茄(H-1706、潘那利)作为内标,采用流式细胞术对其基因组大小进行测定。结果表明,北柴胡、三岛柴胡体细胞染色体数目分别为12、26条,基因组大小估测分别为989.80 Mb和2.14 Gb;狭叶柴胡群体内存在2种类型:一种类型的叶片窄,成熟植株的根外皮为棕红色,染色体数为12条;另一种叶片较宽,成熟植株的根外皮为浅黄色,染色体数为26条,基因组大小估测分别为782.50 Mb和1.92 Gb。3种柴胡的染色体数目确定和基因组大小估测可为柴胡全基因组测序和细胞学等研究提供依据。     

利用组织培养技术快速繁殖白木香

本研究利用组织培养技术，以白木香(Aquilaria sinensis)种子为材料，建立快速繁殖白木香的方法体系。首先进行种子消毒，播种到MS培养基上，然后将白木香无菌幼苗切成带1 个腋芽的茎段，诱导白木香丛生芽；剪下生长健壮的单个芽苗，诱导生根。白木香腋芽诱导分化的最佳培养基为MS+1 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+0.2 mg/L IBA+30 g/L 蔗糖+5 g/L 植物凝胶，白木香组培苗生根的最佳培养基为MS+30 g/L 蔗糖+5 g/L 植物凝胶。白木香组织培养快速繁殖技术将应用于白木香特异种质的快速大量扩繁中。另外，由于白木香种子随采随种、不易保存的特性，组培快繁技术也可随时为白木香结香机理研究提供遗传背景相对一致的大量新鲜幼嫩的组织材料。