| 北柴胡转录因子BcAP2-13的原核表达 和多克隆抗体制备 |
| |
| 引用本文： | 徐娇,朱楚然,都明理,王丽红,隋春,魏建和.北柴胡转录因子BcAP2-13的原核表达 和多克隆抗体制备[J].江苏农业科学,2019,47(10). |
| |
| 作者姓名： | 徐娇 朱楚然 都明理 王丽红 隋春 魏建和 |
| |
| 作者单位： | 中国医学科学院 & 北京协和医学院药用植物研究所/ 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室/ 濒危药材繁育国家工程实验室,北京,100193;中国医学科学院 & 北京协和医学院药用植物研究所/ 中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室/ 濒危药材繁育国家工程实验室,北京 100193;佳木斯大学,黑龙江佳木斯 154007;佳木斯大学,黑龙江佳木斯,154007 |
| |
| 摘 要： | 利用带有促溶标签SUMO和纯化标签6×His的原核表达载体,构建了调控北柴胡皂苷生物合成的转录因子基因BcAP2-13的原核表达载体p13-SUMO-His6。载体热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导培养,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,28℃和37℃不同温度诱导条件下均得到了融合蛋白13-SUMO-His 6。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白为抗原,免疫成年兔4次以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明,所得抗体效价较高。提取北柴胡毛状根及BcAP2-13超表达毛状根的总蛋白,免疫印迹检测结果表明,在2种毛状根蛋白样品中均能检测到与预计13-SUMO-His6蛋白分子量大小一致的条带,BcAP2-13过表达毛状根总蛋白样品的条带强于普通毛状根总蛋白样品的条带,与预期一致。成功制备了北柴胡BcAP2-13的多克隆抗体,为进一步研究北柴胡转录因子BcAP2-13的确切作用位点和调控机制奠定了基础。
|
| 关 键 词： | 北柴胡 转录因子 原核表达 多克隆抗体制备 免疫印迹 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
