哺乳动物原始卵泡形成与发育的研究进展

在大多数雌性哺乳动物中,早期原始卵泡的形成主要包括3个过程：原始生殖细胞的迁移、生殖细胞减数分裂和生殖细胞巢破裂。原始卵泡形成与发育过程涉及到诸多因子和信号通路的调节作用,且原始卵泡库的大小及储备能力将决定雌性动物终生生殖能力。本文就参与原始卵泡形成和发育过程中的因子和信号通路作一综述,旨在深入了解参与原始卵泡形成与发育的细胞和分子机制,为维持原始卵泡库及促进原始卵泡激活提供研究思路。     

海兰褐蛋鸡卵巢与输卵管ESR基因定量研究

为了研究海兰褐蛋鸡卵巢、输卵管漏斗部(以下简称漏斗部)与输卵管子宫部(以下简称子宫部)雌激素受体基因表达水平,试验采用荧光定量PCR技术检测蛋鸡的卵巢、漏斗部与子宫部的雌激素受体表达情况。结果表明:漏斗部组织ESR1 mRNA表达水平与其他两组相比差异极显著(P0.01);子宫部、卵巢组织ESR1 mRNA表达水平差异不显著(P0.05)。说明雌激素受体与漏斗部功能可能存在着密切的关系。     

发酵中草药复合物对奶牛抗氧化和繁殖性能的影响

利用酿酒酵母菌和枯草芽孢杆菌发酵淫羊藿、肉苁蓉、阳起石等9种中草药,制备中草药复合物,选用24头健康的荷斯坦青年奶牛,随机分为3组(8头/组),分别为对照组(饲喂基础日粮)、1%试验组(饲喂基础日粮+1%中草药复合物)和2%试验组(饲喂基础日粮+2%中草药复合物),测定和记录各组奶牛的采食量、血清相关指标及繁殖功能指标,分析中草药复合物对奶牛采食量、抗氧化能力和繁殖性能的影响。结果表明：除产前第14~7天的2%试验组外,基础日粮中添加中草药复合物可极显著提高奶牛干物质采食量(P<0.01);抗氧化能力方面,与对照组相比,1%试验组奶牛血清过氧化氢酶活力在产前第14天、产后第21天显著下降(P<0.05),1%试验组奶牛血清丙二醛含量在产前第7天、产犊当天极显著下降(P<0.01),产后第14天显著下降(P<0.05),2%试验组奶牛血清丙二醛含量在产前第7天显著下降(P<0.05),在产犊当天、产后第14天极显著下降(P<0.01);生殖激素方面,与对照组相比,2%试验组奶牛血清雌二醇含量在产前第21天显著下降(P<0.05)、产前第14天极显著下降(P<0.01)、产前第7天极显著上升(P<0.01);奶牛繁殖方面,与对照组相比,2%试验组奶牛的子宫内膜炎、胎衣不下发生率低且无乳房炎发生,产后首次配种时间提前15 d。可见,在基础日粮中添加益生菌发酵中草药复合物能明显提高奶牛采食量,降低产后疾病发生率,促进母牛产后发情,从而使首次配种时间提前。以基础日粮中添加2%中草药复合物的效果较好。     

海兰褐蛋鸡卵巢与输卵管FSHR及LHR基因定量的研究

为了研究鸡卵巢、输卵管子宫部、输卵管漏斗部FSHR及LHR基因表达水平差异,实验从海兰褐蛋鸡的子宫部、卵巢、漏斗部中提取总RNA,利用RT-PCR技术获得FSHR、LHR目的基因,并应用实时荧光定量PCR进行定量检测。结果显示卵巢组织FSHR m RNA表达水平显著高于子宫部与漏斗部组织(P0.01),子宫部与漏斗部组织FSHR m RNA表达水平没有显著性差异;子宫部组织LHR m RNA表达水平极显著高于其他两组(P0.01),但卵巢、漏斗部组织LHR m RNA表达水平没有显著性差异。实验通过研究鸡卵巢、输卵管子宫部、输卵管漏斗部FSHR及LHR基因表达水平差异,研究为今后研究禽类生殖生理提供基础数据和科学依据。     

含CpG-ODN基序重组抑制素质粒的构建及其对小鼠颗粒细胞相关凋亡基因表达的影响

旨在构建含免疫基序CpG-ODN片段的重组抑制素质粒pEGISI-CpG-ODN,并研究其对小鼠颗粒细胞中相关凋亡基因mRNA表达水平的影响,以探讨免疫佐剂CpG-ODN对小鼠卵巢颗粒细胞的作用。采集21~23日龄雌性ICR小鼠卵巢颗粒细胞,试验分为3组:空载体组(pEGFP)、抑制素重组质粒组(pEGISI)和含CpG-ODN基序的重组抑制素质粒组(pEGISI-CpG-ODN)。采用普通PCR扩增目的片段CpG-ODN,荧光定量RT-PCR(qRTPCR)检测转染后细胞中CpG及死亡受体通路相关基因(Fas、FasL、DR4/5、TRAIL、Caspase8和Caspase3)mRNA的表达水平。结果表明:重组抑制素质粒pEGISI-CpG-ODN构建成功;重组抑制素质粒(pEGISI-CpG-ODN)转染颗粒细胞后,CpG基因能在细胞中高表达;与pEGISI组相比,pEGISI-CpG-ODN组转染颗粒细胞后,能极显著降低细胞中促凋亡基因Fas、FasL、DR4/5、TRAIL、Caspase8和Caspase3mRNA的表达水平(P0.01)。综上表明,CpG-ODN可拮抗抑制素的作用,下调小鼠颗粒细胞中凋亡基因的表达,进而影响卵泡发育。     

抑制素免疫对动物卵泡发育的影响

抑制素主要是由卵巢颗粒细胞和睾丸支持细胞分泌的一类异二聚体蛋白质激素,具有反馈性抑制垂体前叶释放促卵泡激素的作用。抑制素免疫能通过中和内源性抑制素,降低其对垂体的负反馈,增加促卵泡激素的分泌,促进卵泡发育的作用。本文综述了抑制素免疫对卵泡数目与直径、颗粒细胞增殖和卵母细胞成熟的影响,为抑制素免疫的研究和临床应用提供理论依据。     

GnIH过表达载体构建及其对小鼠睾丸间质细胞的作用研究

本试验通过构建GnIH过表达载体,探究其对小鼠睾丸间质细胞（TM3细胞系）的凋亡效应及睾酮合成的调节作用。从6~8周雄性小鼠睾丸组织中提取RNA,反转录获得cDNA样本,利用PCR扩增并纯化GnIH基因,应用T4连接酶将其连入PLVX-IRES-ZsGreen1载体,进一步转化到感受态菌中,通过PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染TM3细胞系72 h,分为空质粒组和GnIH过表达组,通过显微镜观察细胞荧光、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法、ELISA法和流式细胞术检测GnIH表达水平、细胞凋亡率及相关凋亡基因表达变化、睾酮分泌水平和睾酮合成酶基因表达水平。结果显示,GnIH扩增片段序列与参考序列一致,将GnIH过表达质粒转染至TM3细胞系72 h后,可见高强度绿色荧光,过表达组中GnIH基因水平极显著升高（P<0.01）,表明GnIH过表达载体构建成功且在TM3细胞系中高表达。转染72 h后,与空质粒组相比,过表达组中细胞凋亡率极显著升高（P<0.01）,凋亡基因P53和Bax/Bcl-2表达量比值也极显著升高（P<0.01）。与空质粒组相比,过表达组中睾酮浓度极显著降低（P<0.01）。与此同时,睾酮合成相关酶基因P450 scc mRNA表达量极显著降低（P<0.01）,StAR、3β-HSD和P450c17 mRNA表达量显著降低（P<0.05）,17β-HSD mRNA表达量在两组间无显著性差异（P>0.05）。综上所述,在体外培养的TM3细胞中过表达GnIH能诱导TM3细胞凋亡、抑制睾酮分泌且降低睾酮合成相关酶的基因表达水平,推断GnIH在小鼠睾丸间质细胞生长和睾酮合成过程中发挥负调控作用。本研究可为揭示GnIH在雄性哺乳动物生殖调控过程中的作用提供科学理论依据。     

RFRP-3对猪卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究RFRP-3对猪卵母细胞体外成熟的影响。本研究采用从屠宰场收集健康母猪的卵巢中挑取的GV期卵母细胞，随机分为3组，在培养基中分别添加0、10^-6和10^-8mol·L^-1 RFRP-3培养猪卵母细胞44 h后统计各组卵母细胞的成熟率；在后续试验中将收集到的卵母细胞随机分为2组，在培养基中分别添加0和10^-8 mol·L^-1 RFRP-3培养猪卵母细胞44 h，观察猪卵母细胞的卵丘扩展情况并计算各组的卵丘扩展指数和各组卵母细胞的成熟率；利用qRT-PCR检测卵丘扩展因子(PTGS2、HAS2、PTX3)、卵母细胞分泌因子(GDF9、BMP15)和周期蛋白相关基因(CCNB1和CDK1)的表达变化；利用ELISA试剂盒检测MPF和cAMP的含量；采用放射免疫法检测孕酮和雌激素的浓度，每组卵母细胞量不少于100枚，每个试验重复3次。结果表明，与对照组相比，添加10^-8mol·L^-1 RFRP-3培养猪卵母细胞可极显著降低卵母细胞的成熟率(P<0.01)；通过显微镜观察并计算卵丘扩展指数发现，试验组中卵丘扩展无明显变化(P>0.05)，但卵丘扩展因子(PTGS2、HAS2、PTX3)的表达极显著下降(P<0.01)；RFRP-3可以极显著降低猪卵母细胞MPF的含量(P<0.01)，对cAMP的含量无显著影响(P>0.05)；添加RFRP-3可促进GDF9(P<0.01)和BMP15(P<0.05)的表达，抑制CCNB1(P<0.05)和CDK1(P<0.05)的表达；同时试验组培养基中孕酮、雌激素的浓度也极显著下降(P<0.01)。综上，RFRP-3通过调控猪卵母细胞成熟相关因子和卵丘扩展因子的表达以及类固醇激素的分泌，从而抑制卵母细胞的体外成熟。本研究为阐明RFRP-3对哺乳动物卵母细胞的调控作用奠定理论基础。