大鼠肝细胞系BRL-3A细胞Hsp70过表达条件的优化

为了使热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在BRL-3A细胞中过表达,试验以带有标签基因的腺病毒感染BRL-3A细胞,根据感染效率初筛病毒感染的最适浓度和作用时间;然后用初筛出的最适浓度(4×107,2×107,1×107,0.5×107,0.25×107pfu/mL)和时间(24 h和48 h)感染BRL-3A细胞,优化Hsp70重组腺病毒感染BRL-3A细胞的条件,并应用荧光定量RT-PCR和免疫蛋白印记方法检测Hsp70的mRNA和蛋白表达量。结果表明:当用1×107pfu/mL病毒AdCMV-Hsp70按照最佳感染条件的感染复数(MOI)=20感染BRL-3A细胞48 h时,能使Hsp70表达量比病毒空载体感染细胞和无病毒的对照组细胞极显著升高(P0.01)。     

分层次教学与专业分流提高动物医学专业人才培养质量的探讨

针对动物医学的专业特点,结合黑龙江八一农垦大学动物医学专业的教学改革与实践经验,探讨了分层次教学与专业分流教学方式的实施原因、实施措施与效果,并分析了其中存在的问题。认为分层次教学与专业分流有助于提高动物医学专业人才的学习兴趣和培养质量。     

研究性教学在动物生理实验教学中的实践与效果研究

简析了研究性教学的概念与特征，结合黑龙江八一农垦大学动物生理学实验教学的实践，阐述了研究性教学手段的实施内容与实施办法，并简析了实施效果与存在的问题。     

表达α-烯醇化酶重组腺病毒的构建及其在籽鹅卵泡颗粒细胞中的过表达

为构建表达籽鹅α-烯醇化酶(ENO1)基因的重组腺病毒,本研究利用RT-PCR技术,从籽鹅卵巢组织中扩增ENO1基因,克隆至pShuttle-CMV穿梭载体中,并利用I-CeuI与I-SceI将ENO1基因的表达框切下,连接到腺病毒骨架的pAdxsi载体中。采用PacⅠ酶切,将其线性化,并转染至293(R)细胞进行病毒的包装,制备重组腺病毒。实验结果显示,制备的表达ENO1重组腺病毒的滴度达到1.1×1011pfu/mL。将重组腺病毒感染籽鹅卵泡颗粒细胞后,荧光定量RT-PCR与western blot检测显示细胞中ENO1基因和蛋白表达水平显著高于正常细胞(p<0.05),这些结果为研究ENO1生物学活性及功能奠定了基础。     

病毒灵对鸡马立克氏病的治疗试验

取未经马立克氏粕(MD)疫苗免疫接种的1日龄和50～60日龄鸡共1098只,分6批试验,每批均分为试验组和对照组。试验组鸡于接种病毒的同时,以50mg/kg 体重剂量的病毒灵(TMH)治疗2～3个疗程,每疗程6天。经90～150天观察,治疗鸡比未治疗鸡死亡率减少22.7%。且发病时间较迟,病变发生数量少。病变程度轻,病毒血症水平低。证明 TMH 对 MD 有一定疗数。     

过氧化氢诱导BRL细胞凋亡损伤模型的建立

动物冷应激过程中肝脏因发生氧化应激而受损。本试验采用过氧化氢(H2O2)诱导buffalo大鼠肝细胞(BRL)凋亡,建立体外氧化应激的凋亡损伤模型,为深入研究冷应激对肝脏损伤的机理奠定基础。试验采用不同浓度H2O2刺激BRL细胞2h,运用WST-1法检测细胞生长活力、Annexin-V/FITC-PI双染技术检测细胞凋亡率及Western blot方法检测Caspase-3的表达量来筛选BRL细胞凋亡的H2O2作用浓度。结果显示,与空白对照组相比,150μmol/L H2O2作用后,细胞增殖率明显下降,Caspase-3的蛋白表达量增加,流式细胞仪检测的凋亡率升高,同时细胞坏死较其他H2O2处理组低。结果表明,150μmol/L H2O2作用BRL细胞2h可模拟氧化应激造成的凋亡损伤。     

海兰褐蛋鸡卵巢与输卵管FSHR及LHR基因定量的研究

为了研究鸡卵巢、输卵管子宫部、输卵管漏斗部FSHR及LHR基因表达水平差异,实验从海兰褐蛋鸡的子宫部、卵巢、漏斗部中提取总RNA,利用RT-PCR技术获得FSHR、LHR目的基因,并应用实时荧光定量PCR进行定量检测。结果显示卵巢组织FSHR m RNA表达水平显著高于子宫部与漏斗部组织(P0.01),子宫部与漏斗部组织FSHR m RNA表达水平没有显著性差异;子宫部组织LHR m RNA表达水平极显著高于其他两组(P0.01),但卵巢、漏斗部组织LHR m RNA表达水平没有显著性差异。实验通过研究鸡卵巢、输卵管子宫部、输卵管漏斗部FSHR及LHR基因表达水平差异,研究为今后研究禽类生殖生理提供基础数据和科学依据。     

氯化钴诱导HepG2细胞低氧应激模型的建立

探索氯化钴(CoCl_2)诱导人肝癌细胞系HepG2建立低氧应激模型的条件,并评价该模型。不同浓度氯化钴处理HepG2细胞后,PCR法检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、激活转录因子4(ATF4)、腺苷酸激酶4(AK4)基因的表达;细胞计数法绘制对照组细胞和氯化钴处理组细胞的增殖曲线。随着CoCl_2浓度升高和处理时间的延长,HIF-1αm RNA和ATF4 m RNA表达显著升高、AK4 m RNA表达显著下降、HepG2细胞增殖速度显著下降(P0.05)、细胞膜不完整边界不清。氯化钴化学模拟低氧过程中影响了缺氧主要调节因子HIF-1α的水平,因此以氯化钴用于构建模拟HepG2细胞缺氧诱导模型是可行的,ATF4和AK4可能在参与HepG2细胞抗低氧应激反应中起关键作用。此模型的建立为进一步研究AK4基因的生理学功能奠定了基础。