牛坏死杆菌溶血素基因克隆、表达和抗原性分析

为了研制新型有效安全的牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂,试验利用PCR扩增技术获得了牛坏死杆菌H05菌株hly基因的全长及5个相互重叠的截短片段的核苷酸序列,并利用原核表达载体p ET-32a对hly基因的5个截短片段进行了表达和抗原性分析。结果表明:hly-2、hly-3和hly-4片段获得了成功表达,且hly-2(aa 278~567)、hly-3(aa 566~888)和hly-4(aa 887~1163)重组蛋白能够与牛坏死杆菌多克隆抗体反应。说明hly-2、hly-3和hly-4可以用于研制新型牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂。     

治疗奶牛乳房炎中药凝胶剂的制备及质量控制

奶牛乳房炎是兽医临床常见疾病,目前常以乳房灌注给药方式治疗此病。中药以毒副作用小、不易产生耐药性等特点在治疗奶牛乳房炎上得到了广泛应用并取得了较好效果。本试验结合临床实践,     

胞壁酰二肽对体外奶牛乳腺上皮细胞生长及胞内NOD2 mRNA表达的影响

【目的】奶牛乳房炎是奶牛养殖业中最为常见,同时也是带来经济损失最为严重的疾病之一,其主要病因是细菌感染。奶牛乳腺的固有免疫是抵抗病原菌入侵的第一道防线。NOD2是机体固有免疫模式识别受体核苷酸结合寡聚域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)蛋白家族中的重要一员,通过识别其特异性配体胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)——一种广泛存在于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁中的成分,而参与抵抗多种病原菌入侵。奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)除泌乳以外,还是奶牛乳腺的免疫屏障。本试验欲探究MDP对BMEC体外生长状态及胞内NOD2表达量的影响。【方法】选取健康泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺腺泡为组织原材料,采用胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离BMEC;使用上皮细胞特异性表达的角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)及成纤维细胞特异性表达的波形蛋白(Vimentin)抗体,通过免疫荧光技术对纯化后获得的细胞进行鉴定;将BMEC设为6个处理组,分别添加浓度为0(空白对照组)、1、5、10、15及20μg·mL~(-1)的MDP,24 h后显微镜下观察细胞状态,同时提取细胞RNA并反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR方法检测BMEC中NOD2的表达量。【结果】(1)胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离得到的细胞CK-18免疫荧光结果为阳性,而Vimentin反应为阴性;细胞生长状态良好。(2)空白对照组、1、5及10μg·mL~(-1) MDP刺激组的BMEC生长状态良好,无任何肉眼可见变化;15μg·mL~(-1) MDP刺激组可见少量的BMEC脱落;而20μg·mL~(-1)MDP刺激组可见大量BMEC脱落,漂浮,且即使仍贴壁的细胞,其形态也发生了变化。(3)与空白对照组相比,各刺激组细胞NOD2 mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,即刺激时间为24 h时,随着MDP浓度的增加,BMEC中NOD2受体mRNA的表达量逐渐增加(P0.05)。【结论】成功获得了纯度较好的BMEC,该细胞生长状态良好,可以用于后续试验;虽然BMEC中NOD2受体mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,但在保持BMEC生长状态正常的前提下,MDP体外刺激浓度应控制在10μg·mL~(-1)以下。这些结果提示我们:当病原菌入侵乳腺时,BMEC可以通过NOD2受体途径参与免疫防御反应,但这种防御能力受细菌数量或毒力强度的影响。即在一定的细菌数量或毒力范围内,随着细菌数量的增加或毒力的增强,奶牛乳腺的免疫防御反应也增强,进而清除外来病原菌;而当细菌数量或毒力强度超过一定范围时,乳腺组织受到严重损伤,免疫防御屏障也随之崩溃,奶牛乳腺局部甚至全身将呈现出明显的临床症状。     

鸡呼吸道病主要病原多重检测技术研究进展

鸡呼吸道病是一系列复杂因素对机体综合作用的结果，引起此类疾病的主要病原体包括新城疫病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、禽肺病毒、鸡毒支原体、大肠杆菌及巴氏杆菌等。随着养禽业集约化程度的不断提高，鸡呼吸系统疾病的发病率呈逐年上升趋势，而且大多数病例常是由多种病原混合感染或因免疫抑制而发生继发感染，     

苯甲酸新用途

苯甲酸在我国一直被用于饲料防霉剂和青贮防霉剂,但关于苯甲酸作为饲料酸化剂,提高生长育肥猪生产性能的作用还未有报道。饲料酸化剂与防霉剂使用的最大区别是添加量的问题,我国应用苯甲酸作为防霉剂的常用剂量为0.0005%～0.0025%(每吨饲料添加0.5～2.5千克),而作为酸化剂的使用量通常在0.5%～1.5%之间,在这个剂量范围内苯甲酸才能发挥抗胃肠道细菌、提高饲料转化率的作用。     

奶牛乳头消毒剂的现状及研发思路

奶牛乳房炎的综合防制是一个极为复杂的系统工程,但是只要采用有效的乳头药浴剂,按照相关挤奶规程及奶牛饲养管理规范进行操作,就能降低奶牛乳房炎的发病率。本文在阐明乳房炎发病机理的基础上,深入分析奶牛乳头专用消毒剂的研发思路,为此类药物的开发提供参考。     

新型兽用抗菌药沃尼妙林

沃尼妙林是20世纪90年代中期国外批准新上市的一种动物专用抗生素,用于治疗猪、牛、羊、家禽等霉形体病及细菌性疾病。作为一种新型抗菌药物,沃尼妙林具有抗菌活性强、低残留、休药期短等特点。     

避免传统抗原虫药物毒性及抑虫不杀虫的情况 新型抗原虫药：硝唑尼特

硝唑尼特（nitazoxanid,NTZ）是一种新的抗原虫药,由Romark实验室创制,首次报道于1976年,化学名称[N-（5-硝基噻唑-2-基）氨基甲酰1苯酚乙酸酯。     

植物血凝素的研究应用

<正>植物血凝素(植物血细胞凝集素,PHA)是一种从红芸豆中提取的有丝分裂原,作为一种低聚糖与蛋白质的复合物,植物血凝素有促进淋巴细胞有丝分裂、激活免疫细胞——淋巴细胞的作用。据美国《科学》杂志报道,机体免疫系统通过识别植物血凝素而识别病毒,并产生相应的抗体和其他免疫反应,以从体内清除病毒。植物血凝素与黄芪多糖等多种中草药联用具有增效作用,与部分抗生素联用具有相加作用。因其强大的增强机体非特异性免疫力的作用以及强效的抗病毒作用,植物血凝素在兽药中的应用也日益广泛。     

“玉鹅种养”对土壤pH值及氮、磷、钾、有机质含量的影响

为了探究"玉鹅种养"对玉米地土壤的改良情况,试验于2012—2017年连续6年选择适宜时间在玉米地里放养鹅,不施化肥和农药,作为试验组(玉鹅种养),同时以没有放养鹅而施用化肥和农药的玉米地为对照组,待玉米老熟后随机采集放养鹅玉米地和对照玉米地的土壤测定pH值及氮、磷、钾、有机质含量,并进行对比分析。结果表明:试验组玉米地土壤的pH值低于对照组,更接近于中性土壤;试验组玉米地土壤中有机质含量逐年升高,且都高于对照组,尤其是碱解氮和速效钾的含量显著提高。说明"玉鹅种养"模式有利于改善玉米地土壤肥力、降低土壤pH值,种养结合有利于黑土地肥力恢复。