鸡Mx基因的克隆与原核表达

本研究旨在通过克隆鸡Mx全基因序列进而进行该基因的原核表达,获得具有生物学活性的蛋白.利用poly Ⅰ:C诱导鸡胚成纤维细胞Mx基因表达,克隆了Mx基因全长cDNA序列,将开放阅读框(ORF)连接构建于表达质粒pGEX-4t-2中获得重组表达载体pGEX-Mx,转化Rosetta(DE3)菌株,经IPTG诱导后检测.表达产物检测显示该蛋白的相对分子量为75 ku.说明获得了Mx基因的高效表达,为进一步进行Mx基因的活性检测以及利用Mx蛋白进行抗病毒转基因的研究奠定了基础.     

奶牛OLR1 3′UTR A223C多态的生物学信息分析

[目的]探索氧化型低密度脂蛋白受体OLR1 3＇UTR A223C多态与奶牛乳脂率高低紧密关联的分子机制。[方法]用miRanda（1.0）软件装载牛microRNA数据库,预测OLR1 3＇UTR潜在的microRNA。[结果]共预测16个microRNA靶标,OLR1 3＇UTR A223C突变定位于bta-miR-370靶标种子序列的互补区。[结论]由于OLR1 3＇UTR A→C突变导致bta-miR-370靶标的消失,为OLR1 3＇UTR A223C多态与奶牛乳脂率高低紧密关联的分子机制深入研究提供依据。     

鸡microRNA基因“seed”区4个SNPs的群体遗传分布

采用CRS-RFLP技术研究了rs14076349、rs16681032、rs14934924和rs16681031共4个SNPs位点在蛋肉兼用型、蛋用型和药用观赏型3种经济类型的6个鸡群的遗传多样性。结果表明:rs16681032在所有鸡群中未检测到变异,rs16681031、rs14934924和rs14076349位点具有较高的次等位基因频率,分别为0.4553、0.1173和0.3296。兼用型鸡与药用观赏型鸡在rs16681031位点的基因频率分布差异显著(P<0.05);兼用型鸡与蛋用型鸡在rs14934924位点的基因频率分布差异极显著(P<0.01);rs14076349位点在所有经济类群间的基因频率分布差异极显著(P<0.01)。根据基因频率信息进行聚类分析,大致可将6个鸡群分为3类,聚类结果反映出不同鸡种microRNAs调控通路的差异。研究结果表明,鸡种系特异性microRNA基因可能受到正选择的影响而存在加速进化现象,其"seed"区SNPs位点在不同鸡种的经济表型的形成中可能发挥着重要作用。     

转移早期囊胚期细胞制备的嵌合体鸡

用显微注射方法将尼拉商品鸡鸡胚X期细胞液注入同期海兰鸡的囊胚腔中，再经体外培养至出雏，获得尼拉--海兰嵌合体鸡，嵌合体率为5%（3/60），出雏率为15%（9/60）。另一项实验是将受体鸡胚经过600rad^60Co辐射处理后再注入供体细胞并体外培养至出雏，结果嵌合体率为14.0%(8/57），孵化率为15.8%(9/57），其中两只毛色嵌合体公鸡存活至今已经8个月。嵌合体鸡的黑色羽毛可出现在多个部位，有两只鸡的腿部和喙的角质也出现黑色斑。嵌合体鸡血液DNA具有供体鸡的特征带。本研究为进一步制备转基因鸡奠定了基础，也为鸡的发育生物学研究和遗传学研究提供了实验材料。     

慢病毒载体构建策略及生物安全性研究进展

慢病毒可以感染分裂细胞和非分裂细胞,是较有前途的病毒载体,来源于HIV-1型载体,能阻止形成有复制能力的HIV-1病毒,构建一个更为安全的模式是慢病毒载体构建策略的焦点。该文介绍了慢病毒载体应用过程中的不同载体系统及构建策略,对载体的生物安全性进行了分析,展望了慢病毒在基因治疗、RNA干扰及转基因领域的应用前景。     

鸡mir-1644基因“seed”区的T＞C多态分析

 【目的】观察“seed”区T＞C多态对鸡mir-1644基因“茎环”结构和靶基因选择的影响,分析其在不同鸡群的遗传分布,为揭示其对mir-1644表达调控的影响及表型效应奠定基础。【方法】利用mfold和miRanda软件进行mir-1644二级结构模拟和靶基因预测,采用引入酶切位点RFLP技术对6个鸡群的179个个体进行基 因型检测。【结果】①T→C突变可导致pre-mir-1644空间构型和自由能改变,稳定性降低;②预测到21个mir-1644-T和mir-1644-C基因差异调控的靶基因。③在汶上芦花鸡群体内以C等位基因为优势基因,与其它鸡间的基因型分布存在显著差异（P＜0.01）。【结论】“seed”区T＞C 突变可能干扰或破坏mir-1644基因的表达调控,且CC基因型可能与汶上芦花鸡某些表型变异有关。     

依据锌指基因内含子序列构建羊、牛种系发生树的研究

为了研究绵羊和山羊的分歧时间,试验采用PCR方法扩增并克隆测定了大尾寒羊、小尾寒羊、鲁北白山羊、波尔山羊Zfy和Zfx基因最后一个内含子部分片段,结合已发表的欧洲牛的相应序列构建了3种反刍动物种系发生树.结果表明:(1)Zfy基因内含子具有独特遗传特征,可应用种属水平以上的分类阶元的种系发生分析,是研究反刍动物系统进化...     

乳腺生物反应器生产蛋白药物

九十年代是生物高技术的时代，转基因动物的研究如火如荼，作为转基因动物研究的一个重要方面——乳腺生物反应器更得科技界及商界的热情关注。有人把这样的产业叫做基因药物工业或叫分子牧场，生产用于人类疾病治疗的蛋白药物。乳腺是生产蛋白药物的一个理想场所，这是因...     

转基因动物的生物反应器

本文介绍了啮齿类，反刍类，猪，鸡等各种动物的转基因生物反应器，动物血液，器官等不同组织／器官的生物反应器，生物反应器的途以及启动子，增强子，内含子，ＭＡＲｓ，ＬＣＲ反式作用因子等调控元件的作用，并对生物反应器存在的问题，应用前景及我国目前的研究现状作了探讨。