仔猪胰腺细胞体外培养体系的建立

为了研究体外培养仔猪胰腺细胞的适宜条件,试验选取1日龄的仔猪胰腺组织置于冰上清洗、修剪,对消化酶、离心方式、培养皿铺被方式、培养液及添加不同促生长因子等多种因素进行筛选和优化。结果表明:0.25%胰酶消化所获得的细胞强于0.1%胶原酶消化获得的细胞,细胞清亮,易于生长;采用500 r/min离心5 min、多次离心所获得的细胞较Percoll不连续密度梯度离心和5%BSA等密度梯度离心所获得的细胞贴壁率高,生长能力强,易于培养传代;采用0.1%明胶或20μg/mL的层黏连蛋白铺被培养皿均比无铺被的培养皿获得更多的贴壁细胞;以RPMI 1640、M199、F12、L-DMEM多种培养液培养仔猪胰腺细胞,表现出多种细胞形态和生长趋势;在基础培养液中添加上皮生长因子、角质化生长因子、β-巯基乙醇和白血病细胞抑制因子、转铁蛋白与亚硒酸盐混合试剂等促干细胞增殖因子可促进不同形态细胞的增殖。说明按此方式培养可获得大量、多种细胞形态的仔猪胰腺祖/干细胞。     

兔胰腺干/祖细胞的分离培养和鉴定

采取1～9日龄的实验仔兔胰腺,1 mg/mLⅣ型胶原酶消化,低糖DMEM培养.细胞铺满后进行传代20代以上冻存.对2～3代的细胞进行免疫组化染色,诱导向β细胞分化并进行高糖刺激胰岛素分泌.结果表明,兔的胰腺干/祖细胞具有较强的增殖能力;免疫组化染色表现为PDX-1、CK19、nestin和胰高血糖素阳性;分化诱导2 d后,双硫腙染色（DTZ）20%阳性,6 d后迅速增加到80%;高糖刺激诱导细胞具有胰岛素释放能力.通过免疫组化染色和诱导细胞胰岛素分泌实验证明分离的是兔胰腺干/祖细胞.首次报道兔胰腺干/祖细胞分离培养方法.     

新生仔兔胰腺干细胞的分离培养及横向诱导分化研究

对新生仔兔胰腺干细胞的分离、培养方法进行了研究,并检测了其横向诱导分化为心肌、成骨、神经细胞的潜能。结果表明,分离到的新生仔兔胰腺干细胞为上皮样细胞,在传代过程中该细胞的生长特性未发生改变,并始终表达导管源胰腺干细胞的标志CK-19,PDX-1;新生仔兔胰腺干细胞经诱导可分化为心肌、神经和成骨细胞,经免疫组化染色鉴定显示,心肌样细胞表达-αactin、神经样细胞表达NF-200而不表达GFAP、成骨样细胞茜素红染色呈阳性。证明该细胞具有多潜能性,是一种亚全能干细胞。     

棕榈酸对胰岛MIN6细胞胰岛素成熟的影响

为研究棕榈酸对胰岛MIN6细胞胰岛素成熟的影响,用0.3mmol/L棕榈酸处理体外培养的MIN6细胞,通过Western blot检测内质网应激(ER stress)相关蛋白、激素原转化酶1(PC1)和激素原转化酶2(PC2)表达水平。通过ELISA检测细胞培养液中成熟胰岛素在总胰岛素中所占的比例,判断棕榈酸对MIN6细胞胰岛素剪切的影响。结果表明,与对照组相比,棕榈酸会导致MIN6细胞ER Stress相关分子表达升高,同时与胰岛素剪切相关的PC1和PC2蛋白水平明显降低。MIN6细胞中胰岛素的剪切成熟在棕榈酸作用下受到影响,成熟胰岛素的产生显著降低。说明棕榈酸可诱导MIN6细胞发生内质网应激,影响与胰岛素剪切成熟相关的PC1和PC2蛋白的表达,结果导致MIN6细胞分泌的成熟胰岛素在总胰岛素中所占比例降低。     

甲状腺激素受体在围生期甲亢母鼠心脏中的差异表达

[目的]研究围生期甲亢母鼠心脏中甲状腺激素受体在mRNA水平的差异表达。[方法]首先建立妊娠合并甲亢模型,取围生期(孕16 d、孕18 d、孕20 d、产后5 d、产后10 d)母鼠心脏组织,提取总RNA。采用实时定量PCR方法,检测TRα1、TRβ1的表达量变化。[结果]与正常母鼠相比,在围生期甲亢大鼠心脏中TRα1表达量在孕16 d上调213%,孕18 d上调64%,产后5 d上调888%,产后10 d上调200%。除产后10 d外,TRβ1变化不显著。[结论]甲亢可以引起围生期大鼠TRα1在mRNA水平的表达量上调,TRα1的表达量与心功能的维持密切相关。     

仔猪胰腺干／祖细胞的生物学特性

分离1日龄长白仔猪的胰腺细胞后,通过显微镜和电镜观察细胞生长形态和超微结构,运用细胞计数法制作细胞生长曲线测定其群体倍增时间,采用免疫组化法测定细胞生长不同时期的表面标志蛋白的表达,用肝细胞因子和尼克酰胺联合诱导其向功能性G细胞分化,并测定了分化细胞对葡萄糖的反应能力。结果显示获得的仔猪胰腺祖／干细胞具有多种形态,以神经样细胞克隆生长占优势,电镜超微结构证实其具有核质比高、细胞器不分化的干细胞态特征。试验测得第1代和第3代群体的倍增时间分别为96．0、307．7h,仔猪胰腺祖／干细胞表达胚胎干细胞标志Oct4、SSEA-1、SSEA-4,也表达胰腺干细胞的标志PDX-1、CK7等。仔猪胰腺干／祖细胞的向β细胞诱导分化细胞对22mmol／L葡萄糖的刺激产生强烈的胰岛素分泌反应,胰岛素分泌量可达321．75mIU／L。结果证实仔猪胰腺千／祖细胞具有干细胞和胰腺祖的表面标志和超微结构,同时具有分化成分泌胰岛素β细胞的能力。     

仔猪胰腺细胞体外培养体系的建立

为了研究体外培养仔猪胰腺细胞的适宜条件,试验选取1日龄的仔猪胰腺组织置于冰上清洗、修剪,对消化酶、离心方式、培养皿铺被方式、培养液及添加不同促生长因子等多种因素进行筛选和优化.结果表明:0.25%胰酶消化所获得的细胞强于0.1%胶原酶消化获得的细胞,细胞清亮,易于生长;采用500r/min离心5 min、多次离心所获得...     

胎猪胰岛源胰腺干细胞分离培养与诱导分化试验

 【目的】分离培养胎猪胰腺干细胞对其进行功能检测。【方法】用先悬浮后贴壁的方法从胎猪胰岛获得胰腺干细胞，用免疫组化方法鉴定该细胞，以MTT法测定其不同代次的生长活性，诱导该细胞成为胰腺内分泌细胞并检测其功能。【结果】分离得到的细胞不表达nestin，而表达导管上皮细胞标志ck-19、平滑肌标志α-actin,其在体外的生长行为有类似胚胎干细胞样生长形态，细胞体外增殖活力很强，现已传至18代，细胞经诱导后分化为分泌胰岛素的胰腺内分泌细胞，并且伴随着细胞超微结构的改变。【结论】通过本方法可以分离到胎猪胰腺干/祖细胞，经诱导分化可形成有功能的胰岛样细胞团并释放胰岛素。