基于HACCP体系的实验室安全分析及管理实践——以广东海洋大学海洋药物研究所为例

为加强实验室安全管理,探讨了基于HACCP理论的实验室危害分析与安全管理实践。以广东海洋大学海洋药物所为例,通过对实验室特点的分析,利用HACCP理论进行了危害分析(HA),确定了关键控制点(CCPs),提出了HACCP计划;并建立了以此为基础的实验室安防控制体系,进行了实验室安全管理的实践,显著提高了实验室的安全。     

温度对有水保活石斑鱼代谢与鱼肉品质的影响

为探讨温度对有水保活珍珠龙胆石斑鱼代谢与肌肉品质的影响,该文对不同温度有水保活珍珠龙胆石斑鱼的存活率、保活前后的水质变化、血液生化指标与肌肉理化性质等进行了测定。将体质量为(503?31)g的石斑鱼暂养48 h后,以平均1~2℃/h的速度程序降温至13~14℃,分别在15,20,25℃的条件下保活。结果显示:珍珠龙胆石斑鱼在15、20和25℃下保活96 h后的存活率分别为100%,75%和17%。低温保活显著降低水体中代谢产物含量,15组与25℃组相比,珍珠龙胆石斑鱼在24~96 h内的总氨氮产量降低量在38.12%~57.76%。表明低温通过降低鱼体的呼吸代谢,减少水体中总氨氮与非离子氨氮的浓度而减缓水质恶化。休眠后鱼体受到低温应激作用血清皮质醇与血糖水平均显著上升(P0.05)。保活72 h后,与25℃组相比,15℃处理组鱼体血清皮质醇含量显著降低,但血糖水平显著增加(P0.05),表明低温能降低鱼体在保活过程中的应激反应,同时出现显著的高血糖症状。与新鲜的珍珠龙胆石斑鱼相比,保活72 h后,15℃处理组血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和肌酸激酶活性均无显著性变化(P0.05),乳酸脱氢酶活性、尿素氮、尿酸、总蛋白含量均显著上升(P0.05);而甘油三酯含量显著下降(P0.05);且肌肉中糖原与粗脂肪质量分数分别下降32.50%和36.32%,水分、粗蛋白、乳酸含量、以及持水力和p H值均无显著变化(P0.05),总体优于25℃处理组。表明25℃保活条件下珍珠龙胆石斑鱼通过增强机体代谢酶活性,增加能量物质代谢,而导致肌肉品质下降;而在15℃保活鱼体能维持较低的代谢水平,生存能力提高,保活72 h后肌肉品质无显著变化。因此15℃适合珍珠龙胆石斑鱼的长途保活运输。该研究结果为珍珠龙胆石斑鱼的有水保活运输提供参考。     

猪流行性腹泻病毒N蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白（N）基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,经过酶切鉴定和测序鉴定,将构建的重组质粒命名为pcD-NA3.1（＋）-N,且未发现碱基的缺失和插入。用脂质体法将pcDNA3.1（＋）-N转染Vero E6细胞,在48 h后,以针对猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白的鼠源多抗血清进行Western blot、免疫荧光检测,并运用共聚焦显微镜分析N蛋白的亚细胞定位。结果表明N基因能在真核细胞Vero E6中正确表达,共聚焦分析结果表明N蛋白在细胞质和细胞核中定位。     

猪流行性腹泻病毒S蛋白受体结合域的分析

以猪流行性腹泻病毒（PEDV）可溶性的猪氨基肽酶N受体为靶蛋白对PEDV S1基因特异性肽库进行3轮生物淘选,然后对30个淘选的噬菌体克隆进行测序。序列分析发现,2个噬菌体克隆展示无义氨基酸序列,其余28个噬菌体克隆展示的氨基酸序列位于PEDV S蛋白的第249-529位氨基酸区域,这个区域被命名为MRR。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对MRR基因进行真核表达。Western blot结果表明,表达的MRR重组蛋白能够与兔抗PEDV多克隆抗体反应。     

盐提法提取波纹巴非蛤全脏器中糖蛋白的工艺条件研究

对波纹巴非蛤全脏器中的糖蛋白的分离提取条件进行研究,结果表明：以0．5moL／L的NaCl溶液为浸提液,料液比为1：12,75℃水浴浸提90min,提取液经透析浓缩,再以60％乙醇终浓度沉淀,得到糖蛋白粗品,其得率为1．64％,总糖与可溶性蛋白含量分别为38．3％和17．1％。     

消除山西老陈醋二次沉淀产生的研究

采用紫外可见分光光度法,通过单因素和L9(34)正交试验,对山西老陈醋的稳定性进行研究,确定去除山西老陈醋二次沉淀的最佳工艺.结果表明,B-环糊精、司盘80、瓜尔豆胶、阿拉伯胶对老陈醋稳定性的影响顺序为β-环糊精＞司盘80=瓜尔豆胶＞阿拉伯胶;正交试验最佳工艺配方为每100 mL中添加β-环糊精3.5 g、司盘80 0...     

肉碱对草鱼代谢强度的影响

采用腹腔法注射肉碱,分别测定了D-型、L-型和DL-型3种构型的肉碱对草鱼鱼种耗氧率的影响,以探讨草鱼对3种构型的肉碱代谢强度的差异.试验结果表明(1)注射100×10-6D-型、100×10-6L-型和100×10-6,200×10-6DL-型3种构型的肉碱.注射后0.5h,草鱼耗氧率均达到最大,随着时间的延长耗氧率逐渐下降.D-型和L-型肉碱在注射后3h草鱼耗氧率恢复至正常水平,DL-型在5h后也恢复至正常水平.其作用效果为L-型>D-型>DL-型.(2)分别注射D-型、L-型和DL-型各4个剂量水平(50×10-6,100×10-6,150×10-6和200×10-6).注射后0.5h,D-型和L-型均在100×10-6剂量水平耗氧率达到最大,而DL-型在150×10-6达到最大值,表明肉碱对草鱼的有效剂量为100×10-6～150×10-6.上述结果表明3种构型的肉碱均对草鱼产生了生理作用,使草鱼的代谢强度--耗氧率增加,其增加的强度与肉碱的构型有关.     

菲律宾蛤仔提取物提取条件优化及其体外清除自由基的作用

[目的]研究菲律宾蛤仔全脏器提取物体外对自由基的清除作用,为其综合利用提供基础。[方法]分别采用邻二氮菲-Fe2＋氧化法、DPPH反应法和邻苯三酚自氧化法,检测菲律宾蛤仔提取物体外对羟自由基（HO.）、DPPH.和超氧阴离子自由基（O2-.）的清除作用。[结果]以0.1 mol/L NaCl溶液为浸提液,料液比为1∶8,75℃水浴浸提100 min,提取液经透析浓缩,再以70%乙醇终浓度沉淀,提取物（RPS-0）的得率达到3.30%,总糖与可溶性蛋白含量分别为42.40%和14.40%。RPS-0对HO.和DPPH.清除作用的IC50分别为3.100、3.500 mg/ml,对O 2-.的清除率可达到39.4%。[结论]菲律宾蛤仔盐提取物具有一定的体外清除自由基作用。     

红外心率测定技术在香港牡蛎保活运输过程中的应用

心率能反映牡蛎活力水平和生理状态,可作为生命特征指标,用于监测牡蛎的生理代谢水平,本研究为优化香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)保活流通过程中心率测定技术,探究牡蛎保活期间心率的变化,为牡蛎活体流通提供理论依据。以香港牡蛎为研究对象,依据线性数学模型确定牡蛎心脏位置,并基于红外传感器结合PowerLab装置优化红外心率测定技术,探讨了牡蛎活体流通过程暂养盐度波动、线性诱导休眠和贮藏期中对牡蛎心率的影响。结果显示：经6 mm钻孔前处理后,在海水中暂养对牡蛎活力影响较小,第9天存活率仍达100%,且红外测定方法的第2～18 h内心率无显著性差异(P>0.05);个体规格、干露、盐度、温度均显著影响牡蛎的心率(P<0.05),海水贮藏牡蛎经红外技术测定的心率随时间呈显著上升趋势(P<0.05),干露贮藏牡蛎末期心率随时间呈先上升后下降(P<0.05),过度的非生物胁迫时会引起心脏停止搏动现象的产生,可能会对其造成不良影响。研究表明,红外测定技术适用于作为测定牡蛎心率技术,在保活期中心率变化有效反映了牡蛎的生理状态,可采用心率作为牡蛎无水保活...