猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立

为了建立稳定表达猪FcγRⅢ (Porcine Fc gamma receptor Ⅲ,poFcγRⅢ )的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1- FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细...     

H5N1亚型禽流感病毒核衣壳蛋白(NP)基因的进化及原核表达

参考GenBank上H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计引物,PCR扩增NP基因,对其进行序列分析并构建分子进化树。将克隆的NP基因插入原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中进行诱导表达,对诱导表达的NP重组蛋白进行纯化、Western-Blot鉴定及免疫原性分析。结果表明,克隆的NP基因与GenBank上发表的另外2个河南AIV毒株亲缘关系较近,诱导表达的NP重组蛋白主要以可溶性形式存在,分子量约为70 kDa,并且能够与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。     

猪FcγRⅠ真核表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立

本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA,并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300μg.mL-1)和G418(400μg.mL-1)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环和流式细胞术对细胞系进行鉴定。结果表明成功构建了猪FcγRⅠ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系,且表达于转染细胞表面的poFcγRⅠ受体分子能与猪IgG特异结合。本研究为进一步研究奠定了基础。     

家畜IgG Fc受体研究进展

IgG Fc受体(Fcγreceptors,FcγRs)是一类重要的免疫细胞表面分子,对细胞反应的正向和负向调节发挥重要的免疫学功能,是治疗过敏和自身免疫性疾病理想的药物靶标。综述了FcγRs亚类的生物学特性及家畜FcγRs的研究进展,并对FcR(Fc受体)免疫学功能也进行了阐述。     

H5N1亚型禽流感病毒核衣壳蛋白原核表达条件的优化

为了提高禽流感核衣壳蛋白(NP)在大肠杆菌中的表达量,试验研究了载体、培养基、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对NP融合蛋白表达量的影响。结果:使用LB培养基于37℃培养3.5h后,采用终浓度为2mmol/L的IPTG在28℃、200r/min诱导培养5h,pET32a-NP融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-NP融合蛋白的分子质量与预计大小一致,约为70ku;Western-blot结果表明,pET32a-NP融合蛋白能与抗His标签的单克隆抗体发生特异性反应,说明NP蛋白得到正确表达。