鹅蛔虫ITS rDNA的分子特征及种类分析

为探究从广东省清远的鹅体内采集的蛔虫(Ascaridia anseris)的种类,对临床采集的鹅蛔虫样品,在形态观察的基础上,用保守引物NC5和NC2扩增鹅蛔虫的ITS rDNA基因片段,将扩增产物经克隆测序后,获得大小为1 009bp的鹅蛔虫ITS rDNA基因序列(GenBank登录号为KC905082)。序列比对和系统进化分析表明,鹅蛔虫5.8SrRNA基因与GenBank收录的鸡蛔虫(登录号为AJ001508)同源性为96%,而与不同地理株的鸽蛔虫的同源性在91%~96%之间;禽蛔科的鸡蛔虫、鸽蛔虫和鹅蛔虫同一进化分支,鹅蛔虫、鸡蛔虫和鸽蛔虫处于各自的独立进化分支。上述证明,鹅蛔虫是不同于鸽蛔虫的一个独立有效种,在系统发生关系上与鸡蛔虫更亲近。     

玉屏风复合多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用

为探讨玉屏风复合多糖对免疫功能损伤的调节和保护作用,以环磷酰胺80 mg/kg诱导的免疫低下小鼠为实验动物模型,通过检测小鼠的脾脏指数、脾淋巴细胞增殖能力、血清溶血素和血清中IL-2等指标,观察不同剂量玉屏风复合多糖(100,200,400 mg/kg)对小鼠脾脏指数、脾淋巴细胞增殖能力、血清溶血素和血清IL-2的影响。结果发现,玉屏风多糖能使免疫抑制小鼠的脾脏指数升高,促进脾淋巴细胞的增值;玉屏风多糖可促进正常小鼠血清溶血素抗体的生成,对抗环磷酰胺所致的小鼠血清溶血素抗体分泌减少;玉屏风复合多糖能提高正常小鼠和免疫抑制的小鼠血清的IL-2水平,尤其以中、低剂量组效果较好。结果证实,玉屏风多糖能对抗环磷酰胺诱导的小鼠免疫抑制,提高免疫功能,对小鼠的脾脏功能也有保护作用。     

串珠镰刀菌素的培养提取及对鸡的免疫病理损伤

从广东某饲料厂所用玉米上分离到串珠镰刀菌,并将该菌株接种玉米面,在25℃培养10d,转4℃培养7d,再转25℃培养10d的条件下,进行产毒培养。培养物灭菌干燥后采用乙腈-水(95∶5)提取串珠镰刀菌素(MON),并用薄层色谱验证和高效液相色谱测定提取物MON含量;将提取的MON按照23mg/kg加入试验组雏鸡饲料中,进行毒性试验,测定试验鸡免疫器官胸腺、法氏囊、脾脏指数及血清中一氧化氮的含量。结果表明:试验组比对照组鸡的胸腺、法氏囊及胸腺指数显著降低(P<0.05),血清中NO含量极显著升高(P<0.01)。     

玉屏风多糖脂质体的制备及表征研究

优选玉屏风多糖脂质体的最佳工艺并对其进行表征验证。采用逆向蒸发法制备玉屏风多糖脂质体,以膜材比、脂药比和超声时间为考察因素,包封率为评价指标,采用L9(34)正交试验设计优选制备条件,以超速离心法测定包封率,体外释药试验验证,纳米颗粒分析仪和透射电镜测定其粒径大小与形态。制备玉屏风多糖脂质体的最佳工艺为膜材比8∶1,脂药比4∶1,超声时间90s,包封率88.38%,24h累积释放率73.45%,平均粒径132.65nm。制备的玉屏风多糖脂质体具有较高的包封率与良好的缓释作用,粒径和形态较均匀,重现性好。     

猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究

以猪附红细胞体和多种血营养菌16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f/HM-r,在反向引物的5′端用生物素标记,以猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的可变区序列设计种特异性寡核苷酸探针,探针的5′端用地高辛标记,成功地建立了猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法。通过测定不同浓度PCR产物对应的微孔板杂交-酶反应显色OD值,用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程为y=2.1012-0.4492×logx,其相关系数R为0.977,显示对未知样品可进行定量检测。该方法与猪的多种细菌性病原、猫血巴尔通氏体CA株和E.wenyonii无交叉反应,其敏感性比常规PCR琼脂糖电泳检测提高了近100倍。用建立的方法对38份临床样品进行检测,结果有12份检测结果为阳性。     

霉玉米中毒对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

50只小白鼠随机分成5组,每组10只,用于测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能。试验前处死1组,其结果作为对照;其他4组作为霉玉米中毒试验组,分别于饲喂霉玉米后第7、14、21、28天处死小鼠,测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果,霉玉米中毒试验组的小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能明显降低,表明霉玉米中毒可使腹腔巨噬细胞的吞噬功能下降。     

鸭黄病毒病的诊断和防制

从2010年4月起,广东多个地区的蛋鸭(种鸭)发生一种表现运动障碍,采食量和产蛋率迅速下降的急性传染病,根据流行病学、临床症状、病理剖检、细菌学检验、病毒的初步分离、动物回归实验、RT-PCR的检测等实验方法,证实是禽的黄病毒病.采取油乳剂灭活疫苗的预防接种,配合清瘟御毒素、本草甘露等中药的综合应用,以及加强饲养管理和环境卫生消毒等防制措施,有效地控制该病的发生和流行.     

玉屏风复合多糖的质量控制研究

旨在建立一种玉屏风复合多糖(Yupingfeng polysaccharides,YPF-P)的质量控制方法。提取纯化YPF-P,采用高效凝胶色谱(HPLC-GPC)法测定YPF-P的分子质量。流动相:超纯水,流速:0.7 mL/min,柱温:35℃;薄层色谱(TLC)法测定多糖的单糖组成,使用硅胶G板二次展开,105℃显色45 min;MTT法对多糖作用后的CEF体外增殖能力测定,优选出YPF-P溶液中的最佳浓度,然后与其3种组方中药多糖进行比较试验。结果显示,YPF-P中Mw约为5 ku小分子多糖占其85%;YPF-P由果糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、阿拉伯糖、D-半乳糖与、D-核糖、D-半乳糖醛酸组成;YPF-P的15.63μg/mL～1 000μg/mL各浓度的试验组均有显著促进CEF增殖的作用,其中1 000μg/mL浓度组促进增殖的效果最明显。4种多糖对CEF的增殖促进作用大小顺序为玉屏风复合多糖黄芪多糖白术多糖防风多糖。研究结果表明,该方法稳定可靠,可以作为一种YPF-P的质量控制方法。     

柱前衍生化HPLC法测定玉屏风复合多糖的单糖组成

本研究旨在采用HPLC法测定玉屏风复合多糖(Yupingfeng polysaccharides,YPF-P)中的单糖组成。水提醇沉提取,AB-8大孔树脂纯化后的YPF-P样品用三氟乙酸溶液水解成单糖,然后将水解后的YPF-P样品与作为对照品的8种单糖D-甘露糖、鼠李糖、D-葡萄糖、D-核糖、D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、阿拉伯糖用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化,经Wondasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,以磷酸盐缓冲溶液(p H值6.9)-乙腈(85∶15)进行洗脱,柱温40℃;流速1.0 mL/min;进样量20μL检测波长254 nm。结果表明,YPF-P是由D-甘露糖、鼠李糖、D-葡萄糖、D-核糖、D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、阿拉伯糖组成的,物质的量比为4.64∶1∶5.88∶2.40∶120∶42.9∶69.5。研究结果表明,该方法灵敏度高、样品用量少、稳定性好、准确可靠,能够很好地分离测定YPF-P的各单糖组分。     

鸽蛔虫ITS rDNA的克隆与序列分析

以采自广东省佛山市的鸽蛔虫(Ascaridia columbae)为研究对象,利用保守引物BD1和BD2扩增鸽蛔虫基因组DNA的ITS rDNA片段,对扩增产物进行克隆和序列测定。结果成功扩增出大小为1045bp的ITS rDNA序列。获得的鸽蛔虫的ITS rDNA序列(AC001、AC002)的5.8S rDNA与GenBank收录的鸡蛔虫5.8S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001508)相似性分别为95.5%和94.3%,而与澳大利亚鸽蛔虫5.8 S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001509)相似性分别为96.8%和95.5%。将获得的序列与蛔目不同科的代表性蛔虫的5.8SrDNA序列进行比对和系统进化分析,结果表明鸽蛔虫与鸡蛔虫处于同一进化分支上,也表明ITS rDNA是蛔虫分子鉴定的有效遗传标记,这对蛔虫分子分类学及分子流行病学的进一步研究打下了基础。