miR172超表达载体的构建及其在micro-Tom番茄中的遗传转化

为了进一步阐明miRNA在番茄不同生长发育阶段尤其是在果实成熟阶段的调控途径,利用聚合酶链式反应(PCR)从番茄(Solanum lycopersicum)的cDNA克隆出miR172基因核心片段,将该基因片段,以及pCAMBIA1300-221载体通过特异性的限制性内切酶双酶切,然后将miR172片段正向连接到载体上,转化大肠杆菌Trans5α,鉴定重组质粒正确后,利用冻融法将重组载体转入农杆菌EHA105中。再次回转大肠杆菌验证获得的重组载体,通过PCR以及双酶切鉴定是否符合预期结果,将测序结果与NCBI上的基因序列相比较,同源性高达100%。结果成功构建了适用于番茄农杆菌遗传转化的植物表达载体,接下里进行转基因植株的培育和鉴定。为通过miR172基因进一步研究果实成熟衰老机理奠定了物质基础。     

番茄果实成熟关键调控因子MADS-RIN的研究进展

果实的成熟过程涉及一系列的生理生化变化,如色素的积累,果实的软化、香气和风味物质的形成等。这一过程在分子层面上受到多基因形成的复杂网络的调控,由许多转录因子单独或协同调控实现。为了清晰表述LeMADS-RIN的研究进展,首先对MADS-RIN做了简要介绍,然后论证了LeMADS-RIN是番茄果实成熟过程中关键调控因子,再对LeMADS-RIN影响果实成熟过程的许多生理生化过程和代谢途径进行了详细的归纳分析,如乙烯的生物合成、糖代谢、脂类代谢、色素形成、细胞壁代谢等。之后对LeMADS-RIN的调控模式的相关研究做了系统的回顾总结,随着RIN调控因子以及调控模式研究的深入,依赖于RIN调控而影响果实成熟的网络得到了进一步完善。笔者通过约60篇文献论证了果实成熟关键调控因子LeMADS-RIN对果实成熟调控的重要意义及相关的研究进展,最后对其研究前景提出了展望。     

反义LeEIL2基因表达载体的构建及在番茄中的转化

为了研究LeEIL2基因在番茄果实成熟过程中的作用 ,将全长的番茄LeEIL2基因以反义方向构建到植物表达载体 pBI1 2 1上 ,经过酶切鉴定正确后 ,将该载体转入农杆菌EHA1 0 5中 ,通过农杆菌介导法转化番茄 ,经组织培养和抗性筛选获得再生植株 ,PCR检测再生植株 ,初步鉴定为阳性植株 ,为获得转反义LeEIL2番茄果实打下基础。     

番茄果实高质量总RNA的提取富集及RT-PCR检测

以番茄果实为材料,比较了3种在果实中提取RNA的方法,针对番茄果实多糖的特点,利用无水乙醇和异丙醇联合沉淀的方法除去多糖,改良了Trizol法.为了检验含量比较低的miRNA,利用Licl沉淀的方法进行富集.结果表明:改良Trizol法能够有效地去除多糖,提取到的RNA 28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,A260与A280比值为1.84,A260与A230比值为1.92,RNA产率为350.4 μg/g,说明利用改良Trizol法从番茄果实中提取的RNA质量好、完整性好.由此法所得的RNA可直接用于cDNA文库构建等分子生物学实验.     

冷激处理对黄瓜低温贮藏中冷害的影响

采用"青绿一号"黄瓜为试材,用0℃处理4h,研究了4℃和7℃冷害温度对冷害指数、冷害发生率、丙二醛(MDA)含量、细胞膜渗透率、过氧化氢酶(CAT)活性、过氧化物酶(POD)活性等指标的影响。结果表明:冷激处理可以减轻黄瓜贮藏中的冷害。因此,黄瓜在处于冷害温度范围内运输时,可通过预先冷激的方法减轻冷害造成的损失。     

葡萄柚提取物对红地球葡萄保鲜效果的影响

采用0.01%和0.1%(V/V)两种浓度葡萄柚提取物(GSE)对红地球葡萄进行处理,低温贮藏60天,对其保鲜效果进行了试验研究.结果表明,红地球葡萄经GSE处理可延缓相关微生物病害的发生,抑制霉菌在果实表面蔓延,同时减少水分蒸发,与对照相比明显地延长了贮藏期,其中0.1%(V/V)GSE保鲜效果最为显著.     

农药微乳剂乳液稳定性研究

微乳剂乳液稳定性是微乳剂制剂主要质量技术指标之一。从有机溶剂、表面活性剂和有效成分质量分数等方面研究了对微乳剂乳液稳定性的影响;并用光散射法测定了微乳剂分散相流体力学半径及分布,从微观水平探讨微乳剂的乳液稳定性机理。结果表明:对于某些微乳剂乳液不稳定的有效成分,采用混合溶剂是达到乳液稳定的有效途径;在微乳液粒径范围内,乳液稳定性与流体力学粒径分布密切相关;为了达到乳液稳定,必须调节表面活性剂系统的亲水性和亲油性使其达到平衡;限定有效成分的质量分数也有助于乳液稳定。     

烟草Bex inhibitor-1基因植物沉默表达载体的构建及对农杆菌的转化

试验首先对质粒pGSA1285进行改造,将pFGC5941质粒的查尔酮合酶的Intron片段取代pGSA1285的GUS片段,构建含有内含子并具有卡那抗性的pGSA2285植物沉默表达载体。同时设计引物、PCR扩增、在BI-1基因两端各加上两个酶切位点,将BI-1基因分别反向、正向插入改造后的质粒pGSA2285Intron片段两端的多克隆位点中,构建得到烟草BI-1基因沉默载体pGSA4285。此沉默质粒经PCR鉴定、限制性酶切分析以及回复动员试验证明已正确构建并成功转入农杆菌,为获得含有BI-1基因沉默烟草植株及其在植物程序性死亡中调控作用的研究奠定试验基础。     

转番茄Bax inhibitor-1基因烟草悬浮细胞系的建立

利用农杆菌侵染获得转番茄Bax inhibitor-1(LeBI-1)基因的抗性烟草植株,进行了PCR鉴定和共聚焦扫描显微镜检测;同时以MS为基本培养基研究植物生长调节剂的最佳配比和浓度对建立野生型和转基因烟草悬浮细胞素的影响。结果表明:PCR鉴定为阳性,并检测到绿色荧光蛋白,而且6-BA浓度在0.2 mg/L、NAA浓度为2.0 mg/L条件下,可建立野生型和转基因烟草稳定的悬浮细胞系。     

低温贮藏对鲜切石榴籽粒品质及活性氧代谢的影响

 【目的】研究低温和室温贮藏对于模拟商业包装的鲜切石榴籽粒营养成分以及活性氧代谢的影响。【方法】以（6±0.5）℃贮藏105 d的石榴进行鲜切处理后得到的籽粒为材料,测定商品盒加薄膜包装（18±2）℃贮藏5 d和低温下（4±0.5）℃贮藏7 d的鲜切石榴籽粒的失水率、营养成分、超氧阴离子自由基产生速率、过氧化氢含量、丙二醛含量的变化。【结果】低温条件可以有效降低鲜切石榴的失水率,保持鲜切石榴籽粒的糖、酸含量,提高糖酸比,使可溶性固形物以及抗坏血酸均保持在较高的水平;低温条件可以抑制超氧阴离子产生速率以及过氧化氢和丙二醛的产生,从而延缓膜质过氧化作用的发生。【结论】商品盒加薄膜包装（4±0.5）℃低温存放7 d的鲜切石榴籽粒具有良好的商品性。