热激诱导番茄果实细胞色素C的释放

细胞程序化死亡(Programmed Cell Death,PCD)在植物生长发育及胁迫反应过程中起着重要的作用。线粒体中细胞色素C的释放是植物发生PCD的早期特征之一。番茄果实作为一种模式植物在热胁迫过程中有许多抗逆反应。试验优化了番茄果实线粒体蛋白和细胞质蛋白的提取及Western杂交检测技术,并检测到番茄果实经热激处理后细胞色素C从线粒体释放到细胞质,为番茄果实PCD的深入研究奠定基础。     

甜菜果胶-WPI复合对β-胡萝卜素乳液消化特性的影响

基于静电吸附原理和酶促交联原理,分别采用静电自组装与酶促交联技术对β-胡萝卜素乳液进行界面改性,将甜菜果胶层吸附于蛋白乳液界面。结果表明,以乳清分离蛋白(WPI)作为乳化剂,果胶质量分数为0.15%时,可以制备出两种改性β-胡萝卜素乳液。尽管改性乳液的粒径明显大于原乳液,但是,消化后β-胡萝卜素的生物有效率明显低于原乳液,表明改性后的β-胡萝卜素乳液具有一定的缓释功能。并且,果胶间以酶促交联形式存在的改性乳液受pH值的影响更小,缓释效果更突出。     

番茄Metacaspase基因(LeM)的克隆及其在大肠杆菌Rosetta中的高效表达

为获得可溶性的番茄Metacaspase蛋白,后续研究Metacaspase蛋白的酶学特性以及功能,利用RT-PCR方法克隆了番茄(Lycopersicon esculentum)中Metacaspase(LeM)全长cDNA,并成功地构建了LeM基因的原核表达载体重组质粒pET28a-LeM,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)PlysS和Rosetta中进行诱导表达,并对诱导表达条件进行了优化.SDS-PAGE结果显示,在37℃条件下,1 mmol/L IPTG诱导表达量最高,在BL21(DE3)PlysS菌株中重组蛋白主要以包涵体形式存在,而相同条件下在Rosetta菌株中多为可溶性表达.同时酶活测定显示,Rosetta上清中LeM的活性为33 RFU/min,显著高于BL21(DE3)PlysS 7RFU/min.本实验表明,不同菌株对Metacaspase的可溶性表达有很大影响.     

番茄Ⅱ型metacaspase蛋白S1MC7抗体效价检测及其在果实中表达特性分析

以原核表达的番茄SlMC7重组蛋白为抗原,制备SlMC7多克隆抗体,采用ELISA和蛋白质点杂的方法,研究了番茄II型metacaspase蛋白(SlMC7)的抗体效价和表达特性,并对SlMC7蛋白及基因在番茄果实发育过程中的表达差异进行了研究,以期为后续的SlMC7在番茄果实中功能性研究提供材料基础和参考依据.结果表明:SlMC7多克隆抗体效价在256 000以上,在1∶10 000的稀释度下,可识别低至1.6ng的纯蛋白.对各时期番茄果实Western-blot和Real time PCR结果表明,相对于绿熟期,SlMC7蛋白及基因在破色期果实中表达量显著上升,表明SlMC7与番茄果实成熟存在一定相关性.     

运用噬菌体随机七肽库筛选与CRN特异结合的多肽

CORYNE（CRN）对拟南芥(Arabidopsis thaliana)茎尖分生组织干细胞的分裂分化的调控具有重要作用。为了研究与CRN胞内激酶区相互作用的肽,探讨与CRN胞内激酶区相互作用的关键位点,本实验采用了亲和淘选噬菌体随机七肽库的方法。通过四轮亲和淘选后随机挑取10个克隆进行DNA测序,经ELISA鉴定后,得到1个与CRN胞内激酶区特异结合的七肽,其序列为TLTELVR。研究结果表明,利用噬菌体展示技术成功淘选到了与CRN胞内激酶区特异结合的七肽,为进一步研究与CRN胞内激酶区相互作用的分子奠定了基础。     

烟草Bex inhibitor-1基因植物沉默表达载体的构建及对农杆菌的转化

试验首先对质粒pGSA1285进行改造,将pFGC5941质粒的查尔酮合酶的Intron片段取代pGSA1285的GUS片段,构建含有内含子并具有卡那抗性的pGSA2285植物沉默表达载体。同时设计引物、PCR扩增、在BI-1基因两端各加上两个酶切位点,将BI-1基因分别反向、正向插入改造后的质粒pGSA2285Intron片段两端的多克隆位点中,构建得到烟草BI-1基因沉默载体pGSA4285。此沉默质粒经PCR鉴定、限制性酶切分析以及回复动员试验证明已正确构建并成功转入农杆菌,为获得含有BI-1基因沉默烟草植株及其在植物程序性死亡中调控作用的研究奠定试验基础。     

热激处理对白桦幼苗温度适应的影响

以白桦为研究对象 ,人为模拟高温 ,以质膜相对透性和丙二醛含量为主要测定指标 ,比较了不同高温和不同处理时间对 1年生白桦幼苗的伤害程度以及高温预处理对白桦幼苗温度适应的影响 .结果表明 ,膜相对透性及丙二醛含量在 37℃和 4 2℃热激处理的 2 4h期间出现升、降、升的变化趋势 ,但 37℃ 2～ 4h处理为白桦热激反应的理想条件 .37℃ 4h热激预处理既可提高白桦幼苗的耐冷性又可提高白桦幼苗的耐热性     

苹果果实角质层提取及分析方法的优化

苹果货架期失水是影响其品质的重要因素,而果实角质层又是水分散失的主要屏障,探讨苹果货架期角质层和果实失水率的相关性尤为重要,而对角质层组分的定性和定量测定,展开相关研究的前提。本研究本研究针对现有对苹果果实角质层提取和分析的方法进行比较优化,为研究货架期苹果果实角质层的代谢变化及苹果果实采后综合减损措施的探求提供方法学基础。研究结果表明,利用氯仿溶液处理完整果实1 min、完整果实1 h、表皮圆片1 min、表皮圆片1 h,发现氯仿处理表皮圆片1 h所得蜡质含量最高,蜡质成分种类及占比,与其他三者无显著差异,是苹果果实蜡质提取的最优方法。在苹果果实角质分析方面,证明了目前普遍应用于番茄果实角质分析的MeOH-HCl试剂,对苹果果实角质的解聚具有稳定可靠的效果,苹果角质所得的单体产率可达92%左右。     

转番茄Bax inhibitor-1基因烟草悬浮细胞系的建立

利用农杆菌侵染获得转番茄Bax inhibitor-1(LeBI-1)基因的抗性烟草植株,进行了PCR鉴定和共聚焦扫描显微镜检测;同时以MS为基本培养基研究植物生长调节剂的最佳配比和浓度对建立野生型和转基因烟草悬浮细胞素的影响。结果表明:PCR鉴定为阳性,并检测到绿色荧光蛋白,而且6-BA浓度在0.2 mg/L、NAA浓度为2.0 mg/L条件下,可建立野生型和转基因烟草稳定的悬浮细胞系。     

大豆体细胞胚的成熟处理及植株再生

选用体细胞胚高频发生的黑龙江省主栽大豆品种 (东农 7819)的未成熟子叶 ,在含高浓度的生长素 MSB培养基上诱导体细胞胚的产生。体细胞胚分别置于 M3、M10、MC三种成熟培养基上或单纯置于灭菌过的培养皿进行干化处理。成熟处理为大豆体细胞胚萌发所必需。单纯干化处理不利于体细胞胚存活 ,而在高渗成熟培养基 MC或 M10成熟处理过的体细胞胚在 MSG(1/2 MSB+ GA)萌发培养基上的萌发率明显高于 M3。成熟处理后 ,形态正常体细胞胚的萌发率达90 % ,明显高于形态不正常胚 4 %的萌发率。对成熟处理过的体细胞胚的组织学研究表明 ,形态学上苗端未分化是形态不正常胚不能形成完整植株的原因之一。