家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右     

有机硒对猪肉品质影响的研究进展

氧化是影响猪肉品质的主要因素,向畜禽饲料中添加抗氧化剂可以有效改善肉产品的抗氧化能力。硒是谷胱甘肽过氧化物酶的重要组成部分,通过催化减少有机氢过氧化物生成量而抵抗氧化应激。本文综述了有机硒的抗氧化机理以及其对猪肉品质的影响。     

重组猪抑制素蛋白质中毒素残留检测及其理化稳定性

为探索纯化的重组猪抑制素蛋白质毒素残留情况以及重组猪抑制素蛋白质稳定性,本研究利用鲎试剂、气相色谱和SDS-PAGE方法对重组猪抑制素蛋白质中的细菌内毒素、β-巯基乙醇的残留量及其蛋白质在不同温度、极端p H值和反复冻融条件下的稳定性进行检测。结果显示,经过3次等电点沉淀洗涤后,重组猪抑制素蛋白质中细菌内毒素和β-巯基乙醇的残留量大幅减少。通过在不同温度下的处理发现,重组猪抑制素蛋白质在4℃环境下较稳定,可以长期保存;但在37℃时,稳定性快速下降,随着温度上升而降解加速。通过极端p H值和反复冻融试验发现,重组猪抑制素蛋白质对极端p H值和反复冻融具有较好的耐受性。     

利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）K88的热不稳定性肠毒素（heat-labile toxin，LT）基因进行无痕敲除并获得K88 LT^-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列，并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段；将供体片段转化至ETEC K88，同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统，对LT基因进行敲除；通过PCR验证获得了K88 LT^-缺陷菌株，并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示，λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段，CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除，最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明，K88 LT^-缺陷菌株的溶血能力丧失，并且生长速度比野生型菌株减缓，LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT^-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。     

抑制载鸭水体有害细菌和内毒素污染对肉鸭生长性能的影响研究

试验旨在研究降低载鸭水体革兰氏阴性菌和内毒素污染对肉鸭肠道发育和生长性能的影响。将480只1日龄鸭随机分成4组,包括对照组、对照组+低聚半乳糖、对照组+光合细菌以及对照组+低聚半乳糖+光合细菌。每组4个重复,每个重复30只。在50d的试验期间采用"高床+水池"模式养殖至出栏。结果表明,日粮添加低聚半乳糖和向载鸭水体应用光合细菌均抑制水体大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌数量(P0.05),降低鸭血液内毒素浓度(P0.05),增加肠黏膜绒毛长度(P0.05),提高肉鸭日增重(P0.05),降低料重比和死亡率(P0.05)。表明低聚半乳糖和光合细菌通过降低养殖水体革兰氏阴性菌和内毒素水平促进肠道吸收能力,提高肉鸭生长性能。     

餐厨废弃物饲料化技术及其在动物生产中的应用

餐厨废弃物(food waste,FW)的资源利用受到广泛关注。FW焚化、填埋、堆肥、厌氧消化等技术因其面临的环境可持续性问题而受到越来越多的批评。饲料化技术可以将FW转化为高价值的饲料,从而减少固体废物的排放、养殖成本和环境污染,但该技术应符合减少、再利用和回收有机废物的处理原则。作者综述了FW的饲料化技术及其在动物生产中的应用。FW饲料化技术主要包括热处理、酶处理、藻类培养、昆虫过腹、发酵技术。其中热处理可以确保微生物安全性,是其他技术的预处理技术。藻类培养和昆虫过腹技术可以将FW转化为植物和昆虫蛋白,避免同源污染,但尚不清楚藻类和昆虫在FW利用过程中是否会造成污染物积累。酶处理和发酵技术可以将FW中大分子转化为小分子。酶的催化性能和稳定性容易受外界条件的影响,需要考虑特殊的酶制剂。发酵技术的机械化程度和资源利用率高,其核心是微生物,需要筛选有效的、能充分利用FW的微生物。目前FW在畜牧业中的应用较少,在其生产和应用中要特别注意用量和使用时间。为了使FW饲料真正作为动物饲料进入食物链,研究人员必须对不同动物(含不同生长阶段)的生长性能和产品特性进行研究,以确保动物健康及动物产品对人类健康没有负面影响。     

用免疫抑制素提高水牛超排效果的初步研究

为了探讨免疫抑制素对水牛超排的作用,进一步揭示水牛超排机理,选取17头具有正常发情周期的母水牛,随机分为试验组(10头),对照组(7头),试验组首次免疫重组猪抑制素亚基融合蛋白1 mg/头,首免后第28和第56天分别进行加强免疫,剂量为0.5 mg/头,对照组牛同期注射矿物油与生理盐水混合佐剂。试验组牛在首免、二免和三免当天分别用B超仪进行卵泡大小监测和计数,在超排后第6天用B超仪进行卵泡和黄体数进行统计。用免疫抑制素组水牛平均卵泡数在加强免疫后,卵泡数量从8.8增加到15.0个,但与对照组相比差异不显著(P>0.05)。超排后,试验组的平均成熟卵泡数、黄体数和排卵率分别是12.2±0.79,9.0±1.06和73.77%,与对照组相比差异显著。胚胎回收总数和可用胚胎数差异不显著。结果表明,利用免疫抑制素免疫水牛,可提高水牛的超排效果。     

南方养鸭模式及鸭舍建造要点

(一)"鸭-鱼"联合生产南方许多省份,过去多采用天然水源进行鸭养殖,近二十年,则更多地将养鱼与养鸭结合,形成了较有特色的"鸭鱼"联合生产模式,进行种鸭、肉鸭和蛋鸭的生产。该生产模式中,鸭舍建设相对简单,一般是在鱼塘、河湖或水库岸边建造一个结构较为简单的开放式或半开放式鸭舍,在鸭舍与水面之间建一运动场,并在水上围出一定区域作为水上运动场。对于种鸭和蛋鸭舍,舍内需要加上产蛋箱,并安装灯具以提供人     

推广鹅反季节繁殖技术 推进新农村建设

发展现代农业,促进农村经济可持续发展,农民创业是关键,技术、资金、市场信息是助力。首先必须因地制宜,根据各地农民的自身资源优势和经济实力,发展适合自身情况的特色产业,从而提高农业的竞争力和生产力。其次必须提升农民的自我发展能力,使之成为“有文化、懂技术、会经营“的新型农民,促进农民的自主创业,开展产业化农牧业生产,促进现代农业的持续发展。     

广东地方鹅产蛋-就巢周期调控模式的探讨

马岗鹅原产于广东省开平市,是广东省的优良地方鹅种之一,具有体型大小适中、屠宰率高、肉质鲜嫩、生长快和耐粗易养等优点,深受广大消费者的欢迎,目前在广东省各地几乎都有分布,而且全省近年的饲养量增长迅猛.