单增李斯特菌inlK基因缺失株的构建及其生物被膜与消毒剂抗力分析

【目的】 研究inlK基因对Lm90SB2菌株生物被膜形成能力的影响及其生物被膜与消毒剂抗力的关系,以期为有效防控单增李斯特菌污染提供参考。【方法】 以单增李斯特菌Lm90SB2为试验菌,根据GenBank中公布的单增李斯特菌F2365 inlK基因序列(登录号:AE017262),应用Primer Premier 5.0软件设计用于扩增inlK基因上、下游同源臂片段及验证缺失株的特异性引物,以同源重组技术构建inlK基因缺失株,并通过旁外侧引物运用PCR方法进行缺失株检测。将标准菌株Lm90SB2和构建的缺失株分别培养8、12、24、48 h后进行结晶紫染色,在倒置显微镜下观察形态变化,并用酶标仪测定生物被膜形成能力;用含3 g/L卵磷脂+3 g/L吐温80的PBS溶液和含10 g/L卵磷脂+20 g/L吐温80的PBS溶液作为新洁尔灭消毒剂的中和剂,含5 g/L硫代硫酸钠+5 g/L卵磷脂+20 g/L吐温80的PBS溶液和含10 g/L硫代硫酸钠+30 g/L卵磷脂+20 g/L吐温80的PBS溶液84消毒剂的中和剂,设消毒剂+菌悬液、消毒剂+菌悬液+中和剂、中和剂+菌悬液、消毒剂+中和剂+菌悬液、稀释液+菌悬液(阳性对照)、稀释液+中和剂+培养基(阴性对照)6个试验组,进行中和剂的筛选,并检测不同浓度新洁尔灭(1∶15、1∶30)和84消毒剂(1∶50、1∶100)分别作用1、5、10、20 min时对2株菌的灭菌率。【结果】 PCR结果表明,成功构建了缺失株Lm90SB2ΔinlK,且inlK基因的缺失导致Lm90SB2菌株生物被膜形成能力显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01);含3 g/L卵磷脂+3 g/L吐温80的PBS溶液构成的中和剂可有效中和新洁尔灭消毒剂,5 g/L硫代硫酸钠+5 g/L卵磷脂+20 g/L吐温80的PBS溶液可有效中和84消毒剂。不同比例的新洁尔灭(1∶15、1∶30)和84消毒剂(1∶50、1∶100)消毒剂在1、5、10 min对Lm90SB2ΔinlK株的灭菌率均显著或极显著高于Lm90SB2株(P<0.05;P<0.01),且在20 min时灭菌率均为100%。【结论】 inlK基因的缺失导致Lm90SB2菌株生物被膜形成能力下降,且对消毒剂抗力减弱。     

兽用消毒剂二氧化氯检测方法的研究进展

二氧化氯由于对细菌、病毒有广谱、快速、高效和安全的杀灭特点和优势,在畜禽养殖业中得到越来越广泛的应用。本文主要对目前国内外已有的二氧化氯检测方法进行阐述,并对各方法的优缺点进行评述。     

鳖常用消毒剂的应用

重点介绍消毒剂的分类、选择使用以及二氧化氯（ＣｌＯ２）和碘伏在养鳖中的应用研究进展。     

新型消毒剂XD-A对家蚕病原菌消毒效果研究

消毒剂XD-A是本研究室以漂粉精为主剂,添加月苄三甲氯铵等辅剂,以合适的比例复配研制成的一种新型蚕用环境消毒剂。本文采用XD-A进行了一系列相关试验,消毒效果试验表明,在有效氯浓度为0.3%时作用15 min即可杀灭白僵菌、苏芸金芽孢杆菌等常见家蚕病原菌;生物学试验表明,有效氯浓度为0.1%作用10min即可杀灭家蚕核型多角体(NPB)和质型多角体(CPB);家蚕添食试验结果表明,XD-A对家蚕生长发育及茧质无不良影响;同时该消毒药液在敞口状态下,可以保持较高的有效氯浓度长达52 h。     

Combination of quaternary ammonia and glutaraldehyde as a disinfectant against enveloped and non-enveloped viruses

Infectious bursal disease is a highly infectious immunosuppressive disease of chickens endemic in many poultry-producing areas around the world. The non-enveloped virus that causes the disease, infectious bursal disease virus (IBDV), is highly stable and resistant to inactivation by common disinfectants. Avian influenza viruses (AIV), on the other hand, are highly vulnerable to most disinfectants due to their phospholipid envelope, but still pose a major threat to the poultry industry, as the outbreaks in 2015 in the United States have shown. Several studies have evaluated the efficacy of disinfectants against both IBDV and AIV but failed to take into consideration factors that would affect the disinfectant efficacy once used in the field, such as organic material. Therefore, the aim of this study was to investigate the efficacy of a commercial combination of quaternary ammonia and glutaraldehyde as a disinfectant against IBDV and AIV in the presence of organic material commonly found in the commercial poultry industry: fecal matter alone, feathers/dust mixed with feces, and bedding material mixed with feces. After a 10-minute disinfectant contact time, each surface was swabbed and virus isolation attempted in embryonated specific-pathogen-free (SPF) chicken eggs. The non-enveloped very virulent (vv) IBDV was reisolated from spiked feces and shavings treated with the disinfectant. This was confirmed by RT-PCR detection of the virus. In contrast, no viral isolate or RT-PCR product was obtained from the samples collected from spiked feathers/dust treated with the disinfectant. Finally, no low pathogenic (LP) AI was re-isolated from the samples treated with the disinfectant indicating that, under laboratory conditions, the combination of quaternary ammonia and glutaraldehyde was partially and completely effective in the inactivation of vvIBDV and LPAI, respectively. Not only the viral envelope, but also the presence of organic matter plays an important role in the viral resistance to disinfectants.     

中草药消毒剂杀菌效果的研究

为研究中草药消毒剂的杀菌效果,选取大黄、艾叶等中草药在实验室制备了复方中草药消毒剂,并对其进行了定量杀菌试验、临床现场消毒试验等研究。结果表明,以大黄、艾叶等中草药组方的中草药消毒剂对金黄色葡萄球菌作用10 min,杀灭率达99.9%,作用30 min,可达100%;对大肠杆菌作用10 min以上,杀灭率达100%;对枯草芽孢杆菌作用15 min以上杀灭率达99.9%;表面现场消毒对细菌杀灭率达99.96%;54 ℃温箱中放置14 d后,杀菌效果基本不变;有机物的存在对消毒效果有一定影响。结果提示中草药消毒剂用于养殖场消毒稳定有效,并可进行相关消毒剂的开发。     

荷兰芹清洗消毒工艺改进

[目的]为提高荷兰芹的食用安全性和商业价值,使荷兰芹外观口味俱佳、保存期更长,对荷兰芹的清洗杀菌工艺进行改进。[方法]以荷兰芹为试验对象,利用多槽自动输送式蔬菜清洗工序和次氯酸杀菌消毒制备设备进行清洗和杀菌,通过清洗杀菌试验的测试结果来确定合理的清洗和杀菌工艺参数。[结果]荷兰芹最佳清洗消毒工艺为:预清洗,0.5%艺康产品利洁在浸泡槽中浸泡5 min;清洗,清洗机用水自动清洗5 min;预消毒,清洗机中配制次氯酸钠200~250 mg/kg,浸泡消毒5 min;消毒,浸泡槽中,次氯酸钠100~150mg/kg,浸泡消毒5 min;漂洗,浸泡槽中,使用无菌水漂洗,浸泡5 min。最终得出,0.5%利洁添加对荷兰芹的菌落总数TPC具有较好抑制作用,同比未添加组降低了37.68%。[结论]研究结果可为工业化生产中荷兰芹的清洗杀菌工艺提供参考。     

土壤处理对连作西洋参生长及根病发生的影响

采用田间随机区组试验,选择前茬种过西洋参的老参地,用大扫灭、二硫化碳、多菌灵等3种低毒化学农药和紫苏根作为添加物进行土壤处理,处理后播种西洋参,调查出苗、存苗、根的生长及根病情况。探讨化学农药及植物添加物处理老参地土壤对改善重茬西洋参生长及减少病害的作用。试验结果表明,98%大扫灭粉剂5g/m2~15g/m2、二硫化碳液剂20ml/ m2进行土壤熏蒸处理,对提高重茬西洋参的出苗率、保苗率、产量,以及减轻根部病害均有较好的效果;添加紫苏根50g/m2~100g/m2的作用主要表现为可以提高根重,多菌灵消毒的作用效果不明显。     

土壤处理对连作西洋参生长及根病发生的影响

采用田间随机区组试验,选择前茬种过西洋参的老参地,用大扫灭、二硫化碳、多菌灵等3种低毒化学农药和紫苏根作为添加物进行土壤处理,处理后播种西洋参,调查出苗、存苗、根的生长及根病情况.以探讨化学农药及植物添加物处理老参地土壤对改善重茬西洋参生长及减少病害的作用.98%大扫灭粉剂5～15g/m2、二硫化碳液剂20ml/m2进行土壤熏蒸处理.对提高重茬西洋参的出苗率、保苗率、产量,以及减轻根部病害均有较好的效果;添加紫苏根50～100g/m2的作用主要表现为可以提高根重,多菌灵消毒的作用效果不明显.老参地使用土壤熏蒸剂及适宜的植物添加剂,对克服西洋参连作障碍具有一定作用.     

鸡舍空气致病菌分离鉴定及其对消毒剂的敏感性观察

本试验研究金黄色葡萄球菌与大肠杆菌对河北省某地区规模化鸡舍空气的污染情况及其对消毒剂的敏感性。根据细菌分离培养特性、形态学、生化试验、动物试验和玻板凝集试验分离出7株金黄色葡萄球菌、6株致病性大肠杆菌（血清型为O15、O26、O93、O78）。经统计,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌在规模化鸡舍空气中的检出率分别为63.6%、27.27%。应用滤纸片法测定其对消毒剂的敏感性,2种致病菌对消毒剂的敏感性差异较大,这表明规模化鸡舍空气受致病菌的污染程度不同,并且致病菌对消毒剂的敏感性有差异。