三种融合标签对大熊猫轮状病毒结构蛋白VP6-VP7可溶性表达的影响

大熊猫轮状病毒(giant panda rotavirus,GPRV)是引起幼龄大熊猫腹泻的主要病原,对圈养大熊猫产生了较大的危害。轮状病毒结构蛋白VP6是一种载体蛋白,可介导黏膜免疫反应。VP7是轮状病毒结构蛋白中主要的中和抗原。因此,VP6-VP7的融合表达作为候选抗原对该病的防治具有重要的意义。传统大肠埃希菌原核表达存在表达量低、可溶性差以及纯度低等弊端。本研究使用醛缩酶(EDA)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)3种融合标签,以实现获得表达量高和纯度高的GPRV-VP6-VP7重组表达蛋白。将扩增的VP6、VP7基因片段利用同源重组酶构建到含3种融合标签的表达载体pET21b上,将重组质粒转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞中进行低温诱导表达。用Ni-柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Image J分析蛋白表达量和可溶性,Western blot分析得到表达的重组表达蛋白正确且具有蛋白活性。实验结果证明,EDA标签能显著促进VP6-VP7蛋白的原核可溶性表达,提高VP6-VP7蛋白表达量。     

毛皮动物传染性疾病的发生与防治措施

近几年来,由于毛皮动物的商业价值被不断挖掘,人工饲养的毛皮动物的品种和数量逐渐增加,加上国内外种兽的互相交换,增加了疾病传播蔓延机会,使传染病不断暴发流行,因此必须加强卫生防疫工作,贯彻“防重于治”的方针。     

硝化应激在神经型犬瘟热疾病发展中的临床意义

为了研究硝化应激在神经型犬瘟热疾病发展中的作用,并探讨其对该病的诊断价值,选取犬瘟热临床病例113例,其中有神经症状组(NCD)共37例,无神经症状组(NNS)共76例,并设25例无犬瘟热健康犬作为对照组(CG)。就诊时分别采取血液和脑脊液,测定一氧化氮(NO)、神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平。结果显示:NCD组2种组织液中的NO、nNOS和NSE升高,显著高于NNS组(P<0.05)与CG组(P<0.01);ROC曲线分析发现,2种组织液中的NO、nNOS和NSE对神经型犬瘟热的诊断具有良好的灵敏度和特异性,血浆中以nNOS最佳,截断值为230.1 ng/mL,脑脊液中以NSE最佳,截断值为3.67 ng/mL;NSE对神经型犬瘟热具有一定预后价值,血浆中NSE<2.07的病例死亡率显著低于NSE≥2.07的病例。结果表明:神经型犬瘟热疾病发展中伴有硝化应激和神经损伤,血浆与脑脊液中的NO、nNOS和NSE具有对神经型犬瘟热的诊断及预测作用。     

家乡的四合木

正在我的家乡,有一种神奇的植物,叫四合木。说他神,是因为他在荒漠上已经生长了1亿4千多万年,是古地中海的遗留物种,被称作"植物中的大熊猫"。说他奇,是因为在地球上,他只在乌海及周边区域小范围的荒漠地区生长,是国家一级保护植物,在世界上绝无仅有。四合木,伴我在家乡成长,我在感叹他神奇的同时,更为他那顽强的生命力、为他的铮铮傲骨而折服。走在乌海郊外,在荒漠戈壁之间,有一种墨绿色的灌木满眼地进入你的视     

唐家河 野生动物天堂的变迁

今年8月29日,位于四川省西北部的青川县下了一整天的雨。58岁的侯兴国坐在唐家河国家级自然保护区的入口,对来到这里的人们讲着保护区里野生动植物资源的分布情况。而在多年以前,他还是一名手持斧头的伐木工。与侯兴国一样发生巨变的,还有唐家河自然保护区。在1978年之前,唐家河曾是四川省绵阳专区伐木厂主要基地。巅峰时期,有近千名伐木工人在这里砍树、运送木材。直到1978年,唐家河林区才建立了自然保护区;1986年,唐家河自然保护区进入＂国家队＂。     

一例野外救护老年大熊猫的康养体会

对一例野外救护的年老、体弱、左上唇缺失、失去野外生存能力的大熊猫,采取专职饲养人员护理、进行医疗辅助行为培训,最终能在非麻醉状态下完成剪趾甲、梳理毛发等日常护理工作和采血、量血压、口腔检查等医学检查项目;采取精细化饲养方案,保证充足营养补给,使其体质迅速恢复,并正常发情,通过人工采精,保留下了遗传因子,为大熊猫种群保护做出了贡献,也为野外救护老年大熊猫康养护理积累了经验。     

犬瘟热防治体会

犬瘟热是由犬瘟热病毒（CDV）引起的一种高度接触性传染病,主要出现双相热,鼻炎、结膜炎,消化道、呼吸道、神经系统症状。该病传染性极强,死亡率高达80%以上,是犬类常见、多发的传染病。1流行病学本病一年四季均可发生,不同年龄、性别和品种的犬均可感染,以不满1周岁的幼犬最为易感,纯种犬的易感性强,且病情严重,死亡率高。传染源是病犬和带毒犬,病原可随其分泌物、     

犬瘟热病毒检测技术的研究进展

正犬瘟热(CDV)在1809年由Jeneer首次报道。1905年卡尔(Carre)将分离的滤过性致病因子接种动物从而复制出病例,1926年Laidlaw和Duncan利用完全隔离的犬和易感性高的雪貂进行了人工感染,该试验肯定了本病的病原为病毒。1980年我国首次分离并获得了犬瘟热病毒。犬瘟热常引起大批犬、貂、狐等动物发病,死亡率可达30~80%,继发细菌感染是导致死亡率增高的主要原因之一,若并发肺炎其死亡率可高达90%以上。国内外对CDV进行了大量研究,建立了多种实验室检测方法。下面我们从病毒分离、免疫学和分子生物学等方面对犬瘟热病毒检测技术进行阐述。     

稳定表达山羊SLAM受体的BHK-21细胞系的建立及应用

信号淋巴激活分子(SLAM)又称为CD150,是小反刍兽疫病毒(PPRV)和犬瘟热病毒(CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞的主要受体,在病毒侵入细胞中发挥重要作用。为建立稳定表达山羊SLAM(g SLAM)的真核细胞系,本研究将人工合成的g SLAM基因克隆至真核表达质粒p IRESpuro3中,并在该基因的3'端引入Flag标签序列作为分子标记,构建了重组质粒p IRES3-g SLAM。将该重组质粒转染BHK-21细胞,经嘌呤霉素加压筛选及采用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组PPRV病毒(r PPRV/GFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达g SLAM基因的细胞系。r PPRV/GFP感染和western blot鉴定表明,无论是否有嘌呤霉素压力的存在,该细胞系在传代至第20代,仍能稳定表达g SLAM蛋白。由于g SLAM氨基酸序列与犬的同源性较高,以表达GFP重组CDV强毒株(r CDV/GFP)感染该细胞系,病毒可以感染且能形成明显的细胞病变,表明该细胞系可用于CDV强毒分离和致弱机制等相关研究。