蜱叮咬动物携带细菌V3～V4区的检测与分析

为了解被硬蜱叮咬动物携带细菌的种类特点,对采自被硬蜱叮咬的1头牛、1只羊和2匹马的血液,提取DNA并进行PCR扩增,获得16S rDNA的V3~V4片段,应用Illumina HiSeq 2500测序平台进行深度测序,并对病菌进行多样性进行分析。结果共检测到18属致病菌。其中包括6类人兽共患病菌(假单胞菌属、金黄色葡萄球菌属、链球菌属、立克次氏体属、分支杆菌属和不动杆菌属)和2类蜱传病原(类考克斯氏体属和立克次氏体属)。通过二代测序技术探讨了蜱叮咬的动物血液携带细菌的特点,为动物蜱传疾病的深入研究提供参考。     

土耳其斯坦裂体吸虫23kDa蛋白基因的序列分析及抗原表位预测

为研究土耳其斯坦裂体吸虫23 kDa蛋白的生物学特性,以土耳其斯坦裂体吸虫cDNA为模版,利用PCR对23 kDa基因进行扩增,并将其克隆到T-easy载体后进行序列测定。利用生物信息学对其结构、抗原指数进行分析,并对其抗原表位进行预测。序列分析结果表明,该虫体的23 kDa基因长度为657 bp,A+T含量为57.38%,与曼氏血吸虫、埃及血吸虫和日本血吸虫的23 kDa基因的相似性分别为85.24%、83.71%和81.89%。蛋白二级结构分析表明,23 kDa蛋白经过4次跨膜,主要由6个α-螺旋、3个β-折叠、7个β转角和若干个无规则卷曲构成。抗原表位预测结果表明,该蛋白有3个B细胞抗原表位。综合分析土耳其斯坦裂体吸虫23 kDa蛋白是一种较好的抗原分子,是土耳其斯坦裂体吸虫疫苗的重要候选分子。     

牡丹江野生鹿血中伯氏疏螺旋体分子检测

为了解牡丹江地区野生鹿自然感染伯氏疏螺旋体的情况,2019年6月间在牡丹江海林市采集20份野生鹿血标本,应用普通PCR对鹿血标本进行5S-23S基因片段的扩增和测序,并将所得序列与GenBank中的项序列进行分析.结果检出7份阳性样本,阳性率为35％,序列分析发现伯氏疏螺旋体在有2个基因型,分别是Borreliella afzelii和Borreliella garinii.研究结果表明,该地区野生鹿存在伯氏疏螺旋体自然感染.     

蝌蚪肠道内容物中乳酸菌的分离和鉴定

中国林蛙(Rana chinensis)俗称田鸡、蛤什蟆、雪蛤等,其肉质细嫩、清白、味道鲜美,属高蛋白低脂肪肉类,具有极高的营养和经济价值[1].目前,在水产动物免疫方法上,还没有十分有效方法使动物获得最佳的免疫效果.对于规模化养殖来说,对林蛙成蛙进行免疫操作难度较大,但如果能在蝌蚪时期对其进行免疫操作则较为容易.在人和动物体内定殖着大量的微生物,这些微生物既有有害菌也有有益菌,其中乳酸菌(Bacterium acidi lactici)是有益菌类,而且是肠道内的优势菌群.乳酸菌在肠道内的数量较多,可以分解碳水化合物,产生多种有机酸,因而可提高机体的消化机能,促进营养物质的吸收[2].     

一例猫耳痒螨病的诊断及螨虫的分子鉴定

猫耳痒螨病是痒螨科耳痒螨属猫耳痒螨引起的高度接触性传染病寄生虫.主要寄生于猫和狗外耳道及临近皮肤,并引起强烈刺激,引起中耳炎,可分泌大量棕黑色耳垢 [1].耳部的瘙痒感可导致患病动物摩擦、抓挠自己的耳朵,并剧烈的摇头,严重时耳廓有血肿产生.由于猫耳痒螨的传染性强,能够感染接触到的动物甚至人类,且虫体抵抗力较强,能在6～8 ℃的畜舍内存活2个月左右,在-25 ℃时经6 h才死亡.导致该病在世界范围广泛存在,如美国、西班牙、意大利等其他国家,且该病的发病率较高,同窝猫中一只发病其它基本都可检出耳痒螨,但致死率不高.     

分层次教学与专业分流提高动物医学专业人才培养质量的探讨

针对动物医学的专业特点,结合黑龙江八一农垦大学动物医学专业的教学改革与实践经验,探讨了分层次教学与专业分流教学方式的实施原因、实施措施与效果,并分析了其中存在的问题。认为分层次教学与专业分流有助于提高动物医学专业人才的学习兴趣和培养质量。     

刚地弓形虫GRA3基因的克隆与表达

采用PCR方法扩增弓形虫GRA3基因,将扩增产物与pMD18-T Simple载体连接,重组质粒经PCR、双酶切鉴定后测序;构建pGEX-4T-1／GRA3表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,克隆的GRA3基因片段长687bp,含有1个669bp的开放阅读框,编码222个氨基酸,与GenBank中UK株（AF414079）的同源性为99．8％;表达的融合蛋白为50Ku,能被弓形虫阳性血清识别;表明该融合蛋白具有较好的免疫反应活性。     

猪附红细胞体可溶性抗原的分析

为了解附红细胞体可溶性抗原的特性,本试验对解离下的猪附红细胞体,经超声波裂解制备粗抗原,再经SephadexG-200分离提纯后,应用对流免疫电泳(CIEP)定位特异性抗原蛋白峰,再进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Westernblot),对猪附红细胞体粗提及纯化的可溶性抗原进行了分析。结果表明,猪附红细胞体可溶性抗原的电泳图谱上有四条蛋白带,其分子量分别为77Ku、62Ku、58Ku、29Ku,其中特异性抗原分子量为58Ku和29Ku。从而为附红细胞体抗原成分的进一步分析及该病的免疫学诊断等研究奠定了基础。     

两种后睾科吸虫核糖体18S序列的扩增及比较分析

为了研究华支睾吸虫和东方次睾吸虫核糖体18S序列的遗传变异情况,以及两种后睾科吸虫间的亲缘关系,采用分子生物学方法对这两种吸虫核糖体18S序列进行了扩增及其比较分析,并以18S为标记基因,选取相关吸虫采用最大简约法(MP)构建进化树。结果显示,研究所扩增的5条华支睾吸虫18S序列长度一致,均为1 991 bp,种内差异为0.1%~0.3%;5条东方次睾吸虫18S序列长度一致,均为1 998 bp,种内差异为0~0.1%。进化结果显示,后睾科和异形科各形成一单分支,所有的华支睾吸虫聚集在一起,但东方次睾吸虫却没有形成一个独立分支,推断东方次睾吸虫可能为一复杂虫种。     

孔雀组织滴虫病病理与分子诊断

为了从分子水平上对引起黑龙江省海伦市某孔雀养殖场孔雀死亡的病原进行准确鉴定,试验首先剖检死亡孔雀并取盲肠内容物染色镜检,根据剖检病理变化及镜检结果初步怀疑是组织滴虫病;提取肝脏病灶组织DNA,扩增组织滴虫核糖体18S和ITS rDNA序列,对获得的序列与相关组织滴虫序列进行比对分析并构建系统发育树。结果表明:孔雀病变部位主要在盲肠和肝脏,盲肠壁增厚、充血,肠内容物干酪化形成盲肠肠芯,肝脏表面出现数个圆形、稍凹陷、黄绿色的溃疡灶。镜检可见虫体呈多形性,有一条粗壮的鞭毛。该虫体18S rDNA序列长度约为600 bp,与GenBank上登录的江苏扬州株(JX963646)同源性为99.47%;ITS rDNA序列长度约为360 bp,与美国火鸡组织滴虫(HQ334189)同源性为96.00%。基于18S与ITS rDNA构建的系统发育树均形成两大分支,而试验得到的分离株均位于火鸡组织滴虫属集群内。说明引起黑龙江省海伦市某孔雀养殖场孔雀死亡的病原为火鸡组织滴虫。